貓冠狀病毒的特性及診斷方法

(上海市外高橋出入境檢驗(yàn)檢疫局，上海市郊 200137)

貓冠狀病毒在世界各地廣泛存在。感染貓冠狀病毒后的貓有可能患上一種名為貓傳染性腹膜炎的嚴(yán)重疾病。

由于目前尚無(wú)有效的疫苗及藥物治療該病，因此對(duì)該病的診斷顯得尤為重要。本文簡(jiǎn)要介紹了貓冠狀病毒的特性及常見(jiàn)診斷方法，供參考。

1 病毒特性

貓冠狀病毒(FCoVs)是一種有囊膜的RNA病毒，基因組由29190個(gè)核苷酸組成。FCoVs屬冠狀病毒科，該科其他病毒還有豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV),犬冠狀病毒(CCV),貉冠狀病毒(RDCoV)及中國(guó)鼬獾冠狀病毒(CFBCoV)等。

病毒基因編碼病毒聚合酶(Pol)及四個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(纖突，囊膜，膜，核衣殼蛋白)，順序?yàn)?′-Pol-S-E-M-N-3′，額外基因還包括(3a,3b,3c,7a,和7b)。

FCoVs有兩種已知的生物型，即貓傳染性腹膜炎病毒(FIPV)和貓腸道冠狀病毒(FECV)。據(jù)報(bào)導(dǎo)，F(xiàn)IPV和FECV都可引起病毒血癥，但只有FIPV能在巨噬細(xì)胞中復(fù)制并引起疾病。病毒，抗病毒的抗體，以及引起彌散性血管炎的補(bǔ)體之間的復(fù)雜免疫反應(yīng)是FIP的重要特征。

FCoV感染在貓群中非常普遍。大約20%～60%寵物貓可以檢測(cè)到FCoV抗體。對(duì)于部分喂養(yǎng)多只寵物貓的家庭，有時(shí)抗體陽(yáng)性率可達(dá)100%。FCoV具有高度傳染性，主要通過(guò)糞便及消化道途徑傳播。

2 病毒診斷

FECV感染通常只引起輕微的疾病癥狀。多數(shù)病例不表現(xiàn)臨床癥狀，部分幼貓會(huì)有連續(xù)數(shù)d輕微腹瀉癥狀，少數(shù)病例則可出現(xiàn)嘔吐癥狀。

通過(guò)電鏡觀察或RT-PCR方法可從糞便中檢測(cè)到病毒(FCoVs)。由于正常的健康小貓或成年貓都能從糞便中排毒，因此從糞便中檢測(cè)FECV的實(shí)際意義不大。

FIPV能引起致死的腹膜炎。細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)較弱的貓可以發(fā)生這種疾病的“濕性”形式，這是一種免疫復(fù)合物性的血管炎，可以導(dǎo)致富含蛋白質(zhì)的體液從血管流入腹腔。具有部分細(xì)胞介導(dǎo)免疫反應(yīng)貓可發(fā)生這種疾病的“干性”形式，可引起多種組織發(fā)生肉芽腫性病變。當(dāng)免疫系統(tǒng)崩潰時(shí)，“干性”FIP在疾病的最后階段也會(huì)變得具有一定的“濕性”。

由于缺乏具體的臨床癥狀，缺乏疾病特有的生化異常現(xiàn)象，實(shí)踐中常用的檢測(cè)方法靈敏度和特異性較低，確診FIP比較困難。對(duì)于FIP的診斷一般基于疾病病史調(diào)查，血液學(xué)實(shí)驗(yàn)及其他診斷方法，如血清學(xué)診斷、組織切片觀察、PCR等。

如果患貓出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，使用抗生素治療沒(méi)有明顯效果，此時(shí)可以考慮其是否是患傳染性腹膜炎病(FIP)。大部分患FIP貓的年齡多為6至8周齡之間。此時(shí)，母源抗體已經(jīng)消退，不足以保護(hù)再受致病微生物影響。

FIP是具有多種臨床表現(xiàn)的一種疾病。在“濕性”形式中，最典型的癥狀是有大量腔內(nèi)積液。“濕性”FIP典型的病變是腹部器官的漿膜表面出現(xiàn)纖維素性病變及肉芽腫。呼吸困難，輕度發(fā)熱，心跳聲沉悶是常見(jiàn)癥狀。眼睛出現(xiàn)葡萄膜炎，角膜后沉淀以及虹膜著色變化?！案尚浴盕IP病變通常發(fā)生在眼睛和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，肉芽腫則可能出現(xiàn)在腹腔，臨床癥狀多種多樣。

X光片顯示胸膜，心包，腹腔積液，肝腫大，腸系膜淋巴結(jié)腫大，可能導(dǎo)致部分患貓腹部出現(xiàn)腫塊。超聲波檢查可用于確認(rèn)腹腔液的存在，判定胰腺，肝臟，淋巴結(jié)和腎臟等臟器是否正常。磁共振成像(MRI)可以顯示貓的腦室周圍對(duì)比度增強(qiáng)，心室擴(kuò)張和腦積水。

3 血清學(xué)檢測(cè)

檢測(cè)血清抗體是檢測(cè)FCoV感染最常用的診斷方法。但因多數(shù)健康貓也會(huì)有針對(duì)FCoV的抗體，因此抗體檢測(cè)很難區(qū)分真正患病貓與健康貓。目前，已有商用抗體檢測(cè)試劑盒，其特異性及敏感性分別為95%和83%。

抗體檢測(cè)結(jié)果對(duì)確診有一定的局限性。有些患有“濕性”FIP貓的抗體滴度很低甚至為0。原因可能是貓?bào)w內(nèi)病毒已經(jīng)與抗體相結(jié)合，導(dǎo)致抗體不能同試劑盒內(nèi)的抗原相結(jié)合。

由于FIP是一種免疫介導(dǎo)的疾病，抗原-抗體復(fù)合物能在血清和胸腔積液中循環(huán)存在。因此，通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法可用于檢測(cè)抗原-抗體復(fù)合物。

4 RT-PCR檢測(cè)

RT-PCR方法能較為敏感地檢測(cè)糞便樣品中的FCoV。糞便樣品需要仔細(xì)保存處理，以防環(huán)境中到處存在的RNA降解酶。樣品制備好后最好立即采用RT-PCR進(jìn)行檢測(cè)。糞便樣品中RT-PCR的信號(hào)強(qiáng)度同腸道中存在的病毒數(shù)量有關(guān)。

病毒可以經(jīng)各種組織及腹水中進(jìn)行檢測(cè)，肝和脾是最容易檢測(cè)到病毒的組織器官。且新鮮組織中病毒的數(shù)量明顯高于經(jīng)福爾馬林或乙醇處理后的組織。

用于檢測(cè)病貓F(tuán)IP的引物也能用于擴(kuò)增感染FCoV后仍為健康貓所攜帶的病毒。因此，RT-PCR檢測(cè)的結(jié)果要與臨床癥狀等結(jié)合診斷。

RT-PCR產(chǎn)生假陰性結(jié)果有很多原因，例如RNA降解、反轉(zhuǎn)錄失敗、FCoV基因組序列變異等?；旌细腥綜CV或TGEV有可能引起假陰性，因?yàn)檫@兩種病毒同F(xiàn)CoV有一段相同的保守序列。

5 組織學(xué)與免疫化學(xué)法檢測(cè)

采用H&E染色法對(duì)組織切片進(jìn)行染色鏡檢是診斷FIP較好的一種方法。H&E染色可較好地定位巨噬細(xì)胞，中性粒細(xì)胞，淋巴細(xì)胞和漿細(xì)胞的局部炎癥。

血管病變周圍會(huì)有大量炎性細(xì)胞增殖，這是“濕性”FIP的典型特征。炎性細(xì)胞堆積及壞死增生性病變是“干性”FIP肉芽腫性病變的典型特征。

免疫組化方法也可檢測(cè)出組織內(nèi)的FCoV 抗原，但不能區(qū)分FECV 和 FIPV。“干性”FIP時(shí)，病變組織中病毒抗原濃度要比“濕性”FIP低。