高效液相色譜法測定白芍總苷中芍藥苷含量

紀 佳

鄭州人民醫(yī)院藥劑科，河南鄭州 450053

為更好的在實踐中對白芍中的芍藥苷含量進行測定，本研究利用高效液相色譜法對白芍總苷膠囊中的芍藥苷的具體含量進行檢測，并同時對高效液相色譜法對白芍總苷中芍藥苷測定的精密度和重復性以及穩(wěn)定性方面進行考察，分析可行性，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試藥

1.1.1 實驗儀器 高效液相色譜儀系統主要包括：脫氣機（G1379），四 原 泵（G1311A）、進 樣 器（G1313A）、柱 溫 箱（G1316A）、色譜工作站（Echrom 98），分析天平（92SM），超聲儀（5150A）。

1.1.2 實驗室試藥 白芍總苷原料藥（浙江立華110736）；芍藥苷對照品（中國藥品生物制品檢定所091102）；水（雙蒸水）；乙腈（色譜純）；磷酸（分析純）；其他試劑（全部為分析純）。

1.2 實驗方法

1.2.1 對照品溶液制備方法 精密稱取芍藥苷對照品22.2 mg，置于10 m L容量瓶中，然后加入適量的甲醇溶液將其進行溶解，再繼續(xù)加甲醇將其稀釋至刻度線，搖勻后就制成芍藥苷對照品實驗的儲備液。再進行精密移取芍藥苷對照品的儲備液1 mL，放置到10 mL量瓶中，再加甲醇溶液稀釋至刻度線，即得芍藥苷的對照品溶液。

1.2.2 供試品溶液制備方法 精密稱取白芍總苷樣品20 mg，置于10 mL容量瓶中，加適量甲醇超聲溶解，放至室溫后用甲醇定容至刻度，搖勻后就制成白芍總皂苷供試品的儲備液，再進行精密移取白芍總皂苷供試品的儲備液1 mL放置到5 mL容量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻后使用0.45 μm濾膜進行過濾，即得供試品溶液。

1.2.3 色譜條件設定[1]色譜柱（SB—C18250 mm×4.6 mm，5μm）；流動相（乙腈—0.015%磷酸）；流速（1.0 mL/min）；柱溫（30℃）；梯度洗脫程序為：8%乙腈0 min—12%乙腈5 min—20%乙腈20 min—20%乙腈25 min—45%乙腈35 min—45%乙腈40 min。

1.2.4 線性關系的考察 分別精密吸取芍藥苷的對照品溶液0.04、0.2、0.8、1.0、1.5、1.8 m L 各自放置在 2 m L 量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻后依次進樣5 μL，記錄色譜圖，以其色譜的峰面積做為縱坐標（Y），以芍藥苷對照品溶液的進樣質量濃度做為橫坐標（X），進行線性回歸[2]。

1.2.5 精密度的考察 精密吸取芍藥苷對照品溶液5μL，在“色譜條件設定”下，重復進樣6次，記錄所測量色譜的峰面積。1.2.6 穩(wěn)定性的考察 分別精密吸取一批白芍總苷供試品溶液 5 μL，分別在 0、1、2、4、6、12、24 h 時進樣測定，記錄所測得的色譜峰面積[3]。

1.2.7 重復性的考察 分別稱取同一批次白芍總苷樣品6份，按照“供試品溶液制備方法”項下的方法制備6份白芍總苷供試品溶液，按“色譜條件設定”下分別進樣5 μL進行測量，記錄峰面積。

1.2.8 加樣回收率的考察 稱取白芍總苷樣品5份各10 mg，分別精密加入一定量的芍藥苷，制備供試品溶液，取各溶液5 μL進樣，在“色譜條件設定”項下分別測定芍藥苷峰面積，記錄色譜圖，計算回收率。

1.2.9 樣品測定 稱取白芍總苷20 mg 3份，按“供試品溶液制備方法” 項下方法進行制備，分別進樣測定芍藥苷的峰面積，按照所求的的標準曲線計算樣品中所含芍藥苷的質量分數，取3次計算的平均值。

2 結果

2.1 線性關系

得出芍藥苷的回歸方程為：Y＝6.523 2X-0.821 69 （r=0.999 9），線性范圍是4.43~198.90μg/mL。

2.2 精密度

得出芍藥苷峰面積的相對標準偏差RSD為1.41%。實驗結果表明，使用高效色相色譜法對白芍苷的含量進行檢測具有良好的精密度。

2.3 穩(wěn)定性

得出芍藥苷的峰面積相對標準偏差RSD是1.36%，結果顯示在白芍供試品溶液制備24 h內進行芍藥苷的含量測定，其實驗結果均比較穩(wěn)定。

2.4 重復性

得出6次芍藥苷的質量分數的相對標準偏差RSD是1.72%。實驗結果說明使用高效液相色譜法對白芍總苷中芍藥苷的含量進行檢測重復性良好。

2.5 回收率

得出芍藥苷的平均回收率是102.3%，相對標準偏差RSD是0.78%。實驗結果說明使用高效液相色譜法對白芍總苷中芍藥苷的含量進行檢測加樣回收率良好。

2.6 芍藥苷的含量

白芍總苷樣品中芍藥苷的平均質量分數為368.12 mg/g，相對標準偏差RSD是1.72%。

3 討論

白芍總苷為從白芍的飲片中提取出的總苷，按照白芍的干燥品進行計算，質量合格的白芍其芍藥苷的含量應少于40.0%[4]。對白芍進行生化提取后，從白芍干燥根中可提取芍藥苷、羥基芍藥苷、芍藥內酯苷、芍藥花苷、苯甲酰芍藥苷等諸多具有一定生理功效的苷類混合物，這些苷類統稱為白芍總苷。而芍藥苷是白芍最為重要的一種苷類成分，其在白芍總苷中的含量約在 90% 左右。本研究進行高效液相色譜法對白芍總苷中的芍藥苷含量進行測定，所使用的稀釋溶劑為甲醇，實驗證明純品的甲醇作為溶劑，所制得的溶液比較澄清，可有效免于過濾，同時實驗中采取梯度洗脫的方式，明顯的縮短了進行芍藥苷含量測定的分析時間。綜上所述，本研究建立的應用高效液相色譜法對白芍總苷中芍藥苷的含量進行檢測，其檢測方法簡單、方便、準確性好，同時實驗穩(wěn)定性和重復性也比較好，在對白芍總苷中芍藥苷的含量測定上，具有良好的應用價值。

[1] 張家富，孟楣，邢安之.HPLC法測定白芍不同飲片中芍藥苷的含量[J].安徽醫(yī)藥，2005，9（8）：588-589.

[2] 王巧，劉榮霞，畢開順，等.HPLC法測定白芍總苷膠囊中芍藥內酯苷、芍藥苷和苯甲酰芍藥苷[J].中草藥，2005，36（11）：1630-1632.

[3] 鄭軍獻，胡軼娟，魏克民，等.白芍提取物中芍藥苷及總皂苷的含量測定[J].中國中醫(yī)藥科技，2011，18（4）：326-327.

[4] 饒毅，夏川川，周海濱，等.高效液相色譜法測定白芍總苷的不確定度分析[J].中國實驗方劑學雜志，2011，（19）：89-93.