不同采血管對同型半胱氨酸測定結果的影響

潘志雄，劉曉峰，劉丹

(九江市第一人民醫(yī)院檢驗科，江西 九江 332000)

不同采血管對同型半胱氨酸測定結果的影響

潘志雄，劉曉峰，劉丹

(九江市第一人民醫(yī)院檢驗科，江西 九江 332000)

同型半胱氨酸；分離膠；抗凝劑

同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過程中去甲基化所產(chǎn)生的重要中間產(chǎn)物。近年來，許多研究發(fā)現(xiàn)同型半胱氨酸與心血管疾病及腦中風有密切關系，體內同型半胱氨酸濃度被視為心、腦及周圍血管疾病的獨立危險因子[1，2]。目前，國內用何種標本(血清或血漿)測定同型半胱氨酸已做了一些研究報道，但沒有明確的統(tǒng)一規(guī)定。本文通過對兩種不同類型采血管采集的標本檢測Hcy的結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本來源 隨機選擇30例門診患者的靜脈血，分別將2ml血液注入兩支乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管和一只分離膠真空采血管中，剔除有黃疸、溶脂或溶血的標本。

1.1.2 儀器和試劑 采用日立7600-020全自動生化分析儀，檢測試劑、校準品和質控品由臺塑生醫(yī)科技股份有限公司提供，分離膠真空采血管由積水醫(yī)療科技(中國)有限公司生產(chǎn)，EDTA-K2抗凝管由美國BD公司生產(chǎn)。

1.2 方法

1.2.1 采樣處理 抗凝管組混勻后立刻以3000r/min離心5min；分離膠管組在血液凝固后以3000r/min離心5min。

1.2.2 Hcy濃度即刻值的測定 離心后的三組血清(漿)標本立即上機同時測定，將測定結果作為相應標本的Hcy濃度即刻值(采血至進樣整個過程控制在 15min 內)。

1.2.3 檢測方法 以臺塑公司出品的酶法試劑在日立7600-020全自動生化分析儀上進行測定，嚴格按照本實驗室的標準操作規(guī)程和試劑盒說明書進行實驗。

2 結果

2.1 Hcy濃度即刻值(μmol/L)比較 分離膠管血清組為10.9+7.1μmol/L；EDTA-K2抗凝管血漿組Ⅰ為10.2+7.2μmol/L；EDTA-K2抗 凝 管 血 漿 組 Ⅱ 為10.3+7.4μmol/L，分離膠管血清組與抗凝管血漿組數(shù)據(jù)比較差異非常顯著(P<0.01)。

2.2 不同采血管的Hcy濃度在室溫隨時間延長的變化比較見表1(各時間點測得數(shù)據(jù)與所在組即刻值采用方差分析比較)。分離膠管血清組在室溫下保存，4h內5個時間點測得結果與該組Hcy濃度即刻值比較無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，抗凝組Ⅰ、Ⅱ在室溫條件下保存，1h及以后各時間點測得結果均較Hcy濃度即刻值顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。

3 討論

表1 30例門診患者不同采血管、室溫放置不同時間的Hcy濃度變化(±s，μmol/L)

表1 30例門診患者不同采血管、室溫放置不同時間的Hcy濃度變化(±s，μmol/L)

注：抗凝組Ⅰ為離心后不再混勻的血漿；抗凝組Ⅱ為測定后混勻放置，于下次測定前5min離心的血漿。*與抗凝組Ⅰ即刻值比較P＜0.01；△與抗凝組Ⅱ即刻值比較P＜0.01。

組別 即刻值 30min 1h 2h 3h 4h F P標本放置時間分離膠組抗凝組Ⅰ抗凝組Ⅱ10.9±7.1 10.2±7.2 10.3±7.4 10.8±7.4 10.3±7.5 10.6±7.8 11.1±7.2 11.1±7.2*13.8±11.9△11.1±7.3 11.7±7.1*15.9±13.9△11.0±7.3 11.8±7.3*18.5±16.2△11.0±6.7 11.9±5.8*19.6±18.2△0.528 69.79 251.8>0.05<0.01<0.01

在正常機體內,同型半胱氨酸的生成和清除保持著嚴格的動態(tài)平衡。正常成人Hcy濃度大約為5～15μmol/L,其中約 70%～80%與血漿蛋白(主要是清蛋白)結合,約1%以游離硫醇的形式存在于血液循環(huán)中,約20%～30%自身結合成同型胱氨酸二聚體,或與其它的硫醇如半胱氨酸結合形成混合二硫化物[3]。目前，學術界對Hcy測定的標本類型(血清或血漿)尚缺乏統(tǒng)一認識，導致在各實驗室之間標本類型不一致，結果相差懸殊。由于Hcy可從血細胞釋放入血漿，故其血漿Hcy水平存在時間依賴性，室溫下正常人體的Hcy水平每小時增高5%～15%，這種增高與血液Hcy原水平無關[4]。從表1可以看出，抗凝組Ⅰ標本是離心放置的，而抗凝組Ⅱ標本是混勻放置的，抗凝組Ⅱ的測定結果明顯高于相應時間點的抗凝組Ⅰ，并隨著時間的延長差距加大，實驗結果表明，血液標本室溫放置時間不能超過30min，檢測血漿Hcy的重要步驟是在采集血樣后立即離心除去血細胞，并及時測定，否則由于常溫下血細胞持續(xù)釋放Hcy至血漿，將導致其檢測值增高。

本實驗對兩種不同真空采血管比較，分離膠管血清組的測定結果顯著高于抗凝管血漿組 (P＜0.01)，與王永鋒[5]的報道相符。這可能與離心前，從血液凝固到血清分離需要額外的時間，使血細胞釋放Hcy入血清有關。實驗還表明分離膠管血清組在室溫下保存4h其結果幾乎不變化，與該組Hcy濃度即刻值比較無統(tǒng)計學顯著性意義 (P>0.05)。這是由于分離膠對血清成分呈現(xiàn)惰性，血樣在分離膠管中離心后，分離膠在血清與血塊之間形成膠狀的隔離層，因此在較長時間內阻止了血細胞產(chǎn)生的Hcy進入血清，從而使測定結果在較長時間內保持穩(wěn)定。用分離膠管對Hcy檢測結果，在離心后可以穩(wěn)定4h，對于采血后不能及時測定或需送外院測定的標本可使用，但是測定結果與抗凝管有顯著差異(P<0.01)，需及時離心，并制定本實驗室的參考范圍。積極采取恰當措施，盡量避免人為因素造成測定結果的差異，以便更好地輔助臨床診斷。

[1]黃淑英，姚全良.血清同型半胱氨酸水平與冠心病的關系[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2009，27(5)：497-506.

[2]陸 勝，季雄娟.腦梗死患者血清同型半胱氨酸測定的臨床應用[J].實驗與檢驗醫(yī)學，2009，27(1)：92-108.

[3]HankeyGJ,Eikeboom JW.Homocysteine and vascular disease[J].Lancet,1999,(3)54:407-413.

[4]Ueland PM，Refsum H，Stabler SP，et a1.Total homocysteine in plasma or serum：methods and clinical applications[J].Clin Chem，1993，39(9)：1764-1779.

[5]王永鋒，田 宇.同型半胱氨酸兩種不同類型標本測定結果比較[J].實驗醫(yī)學與臨床，2008，5(20)：1259-1260.

R446.11+2

B

1674-1129(2012)04-0400-03

10.3969/j.issn.1674-1129.2012.04.041