3 135例泌尿生殖道感染支原體的體外培養(yǎng)及藥敏試驗結(jié)果分析

劉偉民（福建省廈門市中醫(yī)院檢驗科 361009）

支原體作為泌尿生殖道常見寄生微生物，其發(fā)病率在逐年的升高，其致病性與血清型和（或）生物群有關(guān)［1］。其中解脲脲原體（Uu）和人型支原體（Mh）除易導(dǎo)致非淋菌性尿道炎（NGU）外，還可引起附睪炎、前列腺炎、輸卵管炎、盆腔炎、男女不育等諸多并發(fā)癥。近些年來由于抗菌藥物的普遍應(yīng)用及不規(guī)則用藥，支原體耐藥和交叉耐藥現(xiàn)象不僅增加了臨床治療的難度，還是病原菌擴(kuò)散及流行期延長的重要因素［2］。為了解本地區(qū)支原體感染及藥敏情況及為臨床用藥提供可靠的方案，現(xiàn)將本院有關(guān)泌尿生殖道支原體感染現(xiàn)狀和藥敏分析報道如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 3 135例疑似支原體感染者全部來自2011年1月至2012年1月廈門中醫(yī)院婦科門診及男性科門診。其中男1 530例（48.80%），女1 605例（51.20%），年齡17～60歲，平均27歲。

1.2 標(biāo)本采集 被檢測者取標(biāo)本前至少1周內(nèi)無用抗菌藥物史。女性：用無菌棉拭子插入宮頸口內(nèi)1～2 cm處停留15～30 s，輕輕轉(zhuǎn)動后取出；男性：用無菌棉拭子插入尿道口內(nèi)2～3 cm處停留15～30 s后取出，或由臨床醫(yī)生按摩前列腺取前列腺液或患者自取精液置無菌管中。

1.3 檢測方法 全部標(biāo)本采用珠海麗珠試劑有限公司的Uu和Mh分離鑒定、計數(shù)、藥敏試劑盒。試劑包括支原體液體選擇培養(yǎng)基、微量藥敏測試板，其中液體培養(yǎng)基中含蛋白胨、酵母提取物、馬血清、生長因子等營養(yǎng)物質(zhì)并加有尿素、精氨酸底物及酚紅指示劑，此外還加有抑菌劑和殺菌劑；測試板為24孔板條，第1、2孔分別為陰性和陽性培養(yǎng)對照孔，3、4孔分別為Uu和Mh低濃度水平鑒定孔，5、6孔分別為Uu和Mh高濃度水平鑒定孔，剩余的為9種抗菌藥物的高低兩個水平濃度的藥敏試驗孔。實驗所用試劑均在有效期內(nèi)使用，并嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。藥敏試驗包括強(qiáng)力霉素、交沙霉素、美滿霉素、克拉霉素、羅紅霉素、阿奇霉素、氧氟沙星、左氧氟沙星、司帕沙星。標(biāo)本充分混勻接種后置于37℃恒溫箱進(jìn)行培養(yǎng)及藥物敏感試驗，于48 h時觀察結(jié)果。

1.4 結(jié)果分析 測試微孔以發(fā)生顏色由黃色變成紫紅色為反應(yīng)陽性。其中若陰性對照孔出現(xiàn)陽性反應(yīng)的顏色變化此標(biāo)本認(rèn)定為不合格，不列入統(tǒng)計范圍。此外對標(biāo)本試驗出現(xiàn)不合乎規(guī)律的其他反應(yīng)現(xiàn)象也同樣被認(rèn)定為不合格的試驗結(jié)果，不列入統(tǒng)計分析范圍。例如，同種藥物出現(xiàn)低濃度敏感，而高濃度卻耐藥的結(jié)果，均認(rèn)定為不合乎規(guī)律的反應(yīng)結(jié)果，這與該方法的敏感性試驗并沒有考慮標(biāo)本中支原體滴度有關(guān)，需重新進(jìn)行試驗。在判斷反應(yīng)陽性時，嚴(yán)格參照陽性對照孔的陽性顏色變化為參考標(biāo)準(zhǔn)，支原體生長應(yīng)保持培養(yǎng)基透明清涼，遇培養(yǎng)基變紅且混濁，應(yīng)在排除標(biāo)本本身濁度影響后，判定為污染。對泌尿生殖道支原體感染情況以及對9種抗菌藥物的敏感性比較結(jié)果進(jìn)行分析。

2 結(jié) 果

2.1 支原體培養(yǎng)結(jié)果 見表1。

表1 3 135例疑似泌尿生殖支原體感染者培養(yǎng)結(jié)果［n（%）］

2.2 725例支原體藥敏實驗結(jié)果 見表2。

表2 725例支原體藥敏實驗結(jié)果［n（%）］

3 討 論

支原體在自然界分布廣泛，人和動物體內(nèi)均可分離出，是一類缺乏細(xì)胞壁，代之以3層結(jié)構(gòu)的單位膜，使其呈高度多形性、可塑性、易溶解性，介于細(xì)菌和病毒之間并能通過濾菌器等的原核微生物，能在無生命培養(yǎng)基中生長、繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物，內(nèi)含一個環(huán)形雙股DNA。支原體主要存在于泌尿生殖道黏膜上皮表面，借助其特殊的頂端結(jié)構(gòu)吸附在宿主細(xì)胞表面吸收宿主細(xì)胞養(yǎng)料，從細(xì)胞膜獲得脂質(zhì)和膽固醇，造成細(xì)胞損傷，釋放出有毒代謝產(chǎn)物引起炎癥并且能夠進(jìn)入宿主細(xì)胞內(nèi)。Uu有尿素酶可水解尿素產(chǎn)生大量氨，對細(xì)胞有毒害作用。Uu和Mh通過性交傳播均可導(dǎo)致陰道炎、子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎等盆腔炎癥，部分可引起習(xí)慣性流產(chǎn)等。感染Uu和（或）Mh早期癥狀較輕，容易被忽視，只有部分患者出現(xiàn)輕微不適，從而臨床上導(dǎo)致病程延長，反復(fù)感染，引起嚴(yán)重的生殖道損傷。在實際臨床中有相當(dāng)比例感染者并發(fā)其他較易診斷的疾病，如淋病，使得更加容易造成支原體感染的漏診。部分文獻(xiàn)報道，淋病患者的支原體檢出率高出非淋菌性尿道炎支原體檢出率高兩倍以上。由此看來，對泌尿生殖道進(jìn)行支原體體外培養(yǎng)和藥敏是非常有意義的［3-5］。

本研究結(jié)果顯示，2011年1月至2012年1月本院泌尿生殖道支原體感染率為23.13%，其中以Uu為主（13.78%），其次為Mh陽性率（5.17%），Uu和 Mh混合感染陽性率較低（4.18%），這與國內(nèi)其他地區(qū)報道的檢測結(jié)果有一定差異。但并不能說明感染支原體的患者少了；相反，近年來感染支原體的患者癥狀輕微不典型或無癥狀而常被忽視，從而加大了臨床診斷的難度。對Mh感染率明顯高于以往的文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，必須引起高度的重視。女性感染率明顯高于男性，提示支原體感染存在性別差異，其中男性268例（17.52%），而女性有457例（28.47%）?？赡艿脑驗椋海?）男女泌尿生殖器官的生理結(jié)構(gòu)存在差異，因女性泌尿生殖道的內(nèi)環(huán)境和酸堿度（p H）更適合支原體的生長；（2）男女之間的生理差異和泌尿生殖道血液循環(huán)的不同，相同劑量的抗菌藥物到達(dá)局部的血藥濃度不同而造成治療上的差異［6］。

從725例支原體陽性患者的藥敏結(jié)果看，耐藥率高的3種抗菌藥物分別是氧氟沙星（38.48%）、克拉霉素（40.83%）、羅紅霉素（40.41%）。而敏感率高的前3種抗菌藥物為交沙霉素（98.90%）、美滿霉素（96.83%）、強(qiáng)力霉素（98.21%）。Uu、Mh感染屬于性傳播疾病，女性生殖道感染存在一定的隱私，患者往往自行用藥，劑量不足、療程不夠，及盲目首選昂貴的和新的廣譜抗菌藥物以及非專業(yè)診治濫用抗菌藥物，造成耐藥株不斷增多，慢性遷延等因素造成患者反復(fù)感染，呈現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象，呈逐年上升的趨勢，成為臨床治療的棘手問題。

432例Uu感染者藥敏實驗結(jié)果顯示對Uu耐藥率最高的抗菌藥物為氧氟沙星（26.62%）。這可能與近年來普遍使用喹諾酮類藥物，使位于支原體染色體上旋轉(zhuǎn)酶基因發(fā)生突變，改變了支原體DNA旋轉(zhuǎn)酶靶位，從而降低了喹諾酮類藥物阻斷支原體DNA的復(fù)制能力［7］。支原體的DNA旋轉(zhuǎn)酶由A亞基和B亞基組成，A亞基結(jié)構(gòu)是喹諾酮化合物和復(fù)合體結(jié)合的決定因素，其63～106位氨基酸對喹諾酮類化合物結(jié)合至關(guān)重要。Uu無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，故干擾細(xì)胞壁合成的抗菌藥物如青霉素類、頭孢菌素類等對其無作用，因此臨床多用干擾蛋白合成或抑制核酸形成的抗菌藥物。如交沙霉素、強(qiáng)力霉素等進(jìn)行治療Uu，敏感率最高的是交沙霉素（99.31%），可作為Uu感染治療的首選藥物。其次為強(qiáng)力霉素（99.07%），美滿霉素（96.53%），克拉霉素（96.53%），羅紅霉素（92.59%），阿奇霉素（94.21%）。交沙霉素是一種16環(huán)耐性非誘導(dǎo)型大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物，其與支原體核蛋白50S亞基結(jié)合，抑制氨基酸2tRNA與肽鍵2tR2NA之間的肽鍵形成，導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成障礙，菌體死亡，此藥抗菌譜廣，效果顯著。

162例Mh感染者藥敏實驗結(jié)果顯示，對Mh敏感率最高的抗菌藥物為強(qiáng)力霉素（98.77%）、美滿霉素（98.77%）、交沙霉素（98.15%）。耐藥率居前位的3種抗菌藥物分別為克拉霉素（97.53%）、羅紅霉素（95.68%）、阿奇霉素（95.68%）；氧氟沙星、左氧氟沙星、司帕沙星的耐藥率也均在30%以上，可能是臨床十幾年的廣泛應(yīng)用，使其敏感性下降，這也提示此類藥物在該地區(qū)不適用。Uu＋Mh合并感染131例標(biāo)本的藥物試驗的耐藥性較高的為克拉霉素（98.47%）和羅紅霉素（99.24%）。阿奇霉素131例（100.00%）屬中介。此外氧氟沙星、左氧氟沙星、司帕沙星的耐藥率高達(dá)49%以上。因此混合感染的應(yīng)首選的藥物為強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素［8］。

綜上所述，支原體感染現(xiàn)狀不容樂觀，應(yīng)更加重視多重耐藥。同時建議在實際工作中不能單純依靠體外藥物敏感結(jié)果，應(yīng)結(jié)合臨床綜合考慮，對癥下藥，有利于疾病的治療和控制耐藥株的產(chǎn)生。

［1］楊劍虹，曹季軍.827例泌尿生殖道支原體檢測及耐藥性分析［J］.醫(yī)學(xué)檢驗與臨床，2008，19（5）：83.

［2］顏丹，顏海嬰，鐘桂書，等.男性不育患者精液中衣原體、支原體感染的現(xiàn)狀研究［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，34（9）：1766－1767.

［3］張靈芝，姜玉霞.1 233例疑似泌尿生殖道支原體感染者體外檢測及藥敏分析［J］.現(xiàn)代醫(yī)藥衛(wèi)生，2008，24（24）：3688－3690.

［4］謝小毛，黃開淑，李文華，等.繼發(fā)不育男性泌尿生殖道支原體感染狀況與耐藥性分析及其臨床應(yīng)用研究［J］.中國優(yōu)生與遺傳雜志，2008，16（12）：105－106.

［5］李巧燕.2 886例支原體培養(yǎng)與藥敏分析［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2008，18（11）：1553－1553.

［6］張有江，張軍民，羅燕萍，等.400例泌尿生殖道支原體、衣原體檢測及藥敏結(jié)果分析［J］.中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2003，13（7）：689－690.

［7］曾令曉，梁美娟，蘭美群.622例泌尿生殖道感染支原體的藥敏試驗結(jié)果分析［J］.應(yīng)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2008，14（1）：3－5.

［8］張德立.泌尿生殖道解脲脲原體感染檢測及體外藥敏試驗分析［J］.中國醫(yī)療前沿，2008，3（22）：95.