王氏保赤丸中大黃5種成分的HPLC測定

陳廣通，汪冬庚，李玉琴

（南通大學醫(yī)學院，江蘇 南通 226001）

王氏保赤丸系清代名醫(yī)王臚卿祖?zhèn)髅胤剑饕弥涡喝闇岱e、感冒發(fā)熱、喘咳痰鳴、胃呆食減、嘔吐腹脹、痰厥急驚等癥，該方由大黃、黃連、制南星、川貝母、巴豆霜等制成［1-3］。文獻報道［4-10］王氏保赤丸的質(zhì)量控制研究多為薄層掃描法，多以單一成分為指標控制王氏保赤丸的質(zhì)量。本實驗首次應用高效液相色譜建立了同時測定主藥大黃中5種活性成分：蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚含量的方法，可作為控制王氏保赤丸質(zhì)量的有效手段。

1 材料

島津LC-20AD高效液相色譜儀，SPD-20A紫外檢測器，LC-20AD泵；蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚（中國藥品生物制品檢定所，純度均為98％）；王氏保赤丸（南通精華制藥股份有限公司，批號090827，091022，091201）；乙腈、甲醇為色譜純；水為自制重蒸水；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Shimadzu VP-ODS柱（4.6～250mm，5μm）；流動相乙腈-0.1％磷酸梯度洗脫；檢測波長254nm；流速1.0mL/min；柱溫30℃；進樣量10μL；在該色譜條件下，5種有效成分均被洗脫且達到基線分離，色譜圖見圖1。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液 取王氏保赤丸研細，精密稱取細粉1.0μg，加甲醇50mL，超聲提取15min（2次），濾過，合并濾液，濃縮至干，加10％鹽酸20mL，混旋后用氯仿60mL分3次萃取，合并萃取液，回收氯仿，殘渣用甲醇溶解并定容至25mL，0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液 精密稱取對照品蘆薈大黃素10.5μg，大黃素10.5μg，大黃酸4.19μg，大黃酚4.63μg，大黃素甲醚4.36μg分別置50mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，搖勻，得各對照品貯備液。再分別精密吸取各對照品貯備液1、2、10、5、10mL置同一蒸發(fā)皿中，蒸干后，殘渣用甲醇溶解，并定容于5mL量瓶中，混勻，得對照品混合溶液。

2.2.3 陰性對照液 按本品制劑工藝制備不含大黃的制劑，同供試品溶液制備方法制備，作為陰性對照液。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密吸取上述對照品混合溶液1、4、8、12、20μL依次注入液相色譜儀，測定峰面積。以進樣量（μg）為橫坐標，相應峰面積積分值為縱坐標，進行線性回歸處理。蘆薈大黃素的回歸方程為Y=2 630 241.389 6X-38 601.111 3，r=0.999 6，線性范圍為0.042～0.840μg；大黃酸的回歸方程為Y=1 234 944.446 7X-98 333.469 5，r=0.9998，線性范圍為0.168～3.352μg；大黃素的回歸方程為Y=1 527 103.668 8X-21 953.773 6，r=0.999 7，線性范圍為0.084～1.680μg；大黃酚的回歸方程為Y=2 105 701.919 3X-23 364.479 5，r=0.999 9，線性范圍為0.093～1.852μg；大黃素甲醚的回歸方程為Y=807 372.109 6X-6 211.136 8，r=0.999 4，線性范圍為0.174～3.49μg。

圖1 王氏保赤丸的高效液相色譜圖

2.4 精密度試驗 取同一供試品溶液，按照上述色譜條件，連續(xù)進樣5次，測定5種活性成分的峰面積，計算各成分的RSD。蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為：2.20％、2.83％、1.52％、2.46％和1.67％，表明儀器的精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，按照上述色譜條件，分別在0、2、4、6、8h進行測定。蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為0.71％、1.57％、2.24％、1.54％和1.37％，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復性試驗 按照樣品制備方法平行制備5分同一批供試品溶液，分別依次測定。蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚峰面積的RSD分別為2.00％、2.11％、2.11％、2.14％和1.85％，表明此法重現(xiàn)性良好。

2.7 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的王氏保赤丸供試品1.0μg共5分，再分別精密加入對照品混合溶液0.7mL，使各成分含量分別約為0.062、0.21、0.14、0.26、0.21μg。按照“2.2”項下的方法配制回收率試驗溶液，進樣測定各成分的含量，計算得各成分的回收率分別為：99.8％、99.0％、100.0％、98.6％、100.2％，RSD分別為1.30％、1.74％、0.89％、0.86％和1.07％（n=5）。

2.8 樣品的測定 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μL，按上述色譜條件測定，以外標一點法計算樣品中大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素、大黃酚和大黃素甲醚的含量，3批樣品（批號090827，091022，091201）測定結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果 mg/g

3 小結(jié)

供試品溶液制備時考察了加熱回流和超聲處理，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液并進行測定，結(jié)果表明，加熱回流5h與超聲處理30min的測定結(jié)果一致。由于超聲提取操作簡便，時間短，故確定提取方法為超聲提取。該方法操作簡便，結(jié)果準確，可靠，重復性好，可以作為該產(chǎn)品質(zhì)量控制的方法。

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