• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    ‘孔府酥脆’棗試管苗離體葉片不定梢誘導(dǎo)和再生

    2011-12-31 13:50:18孫清榮孫洪雁周廣芳
    關(guān)鍵詞:孔府蔗糖生根

    孫清榮,孫洪雁,周廣芳

    (山東省果樹(shù)研究所,山東泰安271000)

    紅棗營(yíng)養(yǎng)豐富、富含維生素,深受廣大消費(fèi)者喜愛(ài),但由于棗(Zizyphus jujuba Mill.)樹(shù)在生長(zhǎng)過(guò)程中經(jīng)常受到細(xì)菌、真菌等病害的危害,制約了紅棗的產(chǎn)量。通過(guò)品種改良可以獲得優(yōu)良的棗樹(shù)品種,但由于棗胚敗育率高及落花落果嚴(yán)重等因素,導(dǎo)致利用常規(guī)雜交育種方法很難達(dá)到品種改良的目的?;蚬こ痰耐庠椿蜻z傳轉(zhuǎn)化技術(shù)為植物抗病品種的選育提供了育種新途徑,而遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)的成功應(yīng)用則主要依賴于植物高效再生體系的建立。因此,建立棗樹(shù)的高效再生體系是實(shí)現(xiàn)其分子育種的首要步驟,對(duì)棗樹(shù)的品種選育至關(guān)重要。

    ‘孔府酥脆’棗(Zizyphus jujuba‘Kongfusucui’)是優(yōu)良的鮮食棗品種之一,但該品種植株在種植過(guò)程中易感染棗瘋病,嚴(yán)重影響其產(chǎn)量。有關(guān)棗及其不同品種離體葉片不定梢誘導(dǎo)的研究較多[1-5],但由于基因型的不同,這些研究成果均不適用于‘孔府酥脆’棗葉片不定梢再生。迄今為止,尚未見(jiàn)有關(guān)‘孔府酥脆’棗離體葉片不定梢再生方面的報(bào)道。作者研究了培養(yǎng)方法和外源植物激素添加量對(duì)‘孔府酥脆’棗離體葉片不定梢再生的影響,以期獲得‘孔府酥脆’棗葉片不定梢再生的最佳培養(yǎng)條件,為將抗棗瘋病基因轉(zhuǎn)入‘孔府酥脆’棗的遺傳轉(zhuǎn)化研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料和方法

    1.1 材料

    實(shí)驗(yàn)用‘孔府酥脆’棗試管苗由作者所在實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng),在增殖培養(yǎng)基(含2 mg·L-1BA、0.4mg·L-1IBA、30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1瓊脂的MS培養(yǎng)基,pH 5.8)上繼代保存約30 d。

    1.2 方法

    1.2.1 不定梢誘導(dǎo)培養(yǎng)基激素配比 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,選擇WPM培養(yǎng)基[6]為基本培養(yǎng)基,均含有30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1瓊脂,并在滅菌前將培養(yǎng)基酸堿度調(diào)整至pH 5.8。根據(jù)添加植物激素的種類及質(zhì)量濃度分為2組培養(yǎng)基(Ⅰ和Ⅱ),分別用于愈傷組織誘導(dǎo)和不定梢誘導(dǎo)。培養(yǎng)基Ⅰ共6種,分別添加不同質(zhì)量濃度的TDZ(0.1、0.5、1.0 mg·L-1)和IAA(0.1、0.5 mg·L-1):Ⅰ1含0.1 mg·L-1TDZ和0.1 mg· L-1IAA;Ⅰ2含0.1 mg·L-1TDZ和0.5 mg·L-1IAA;Ⅰ3含0.5 mg·L-1TDZ和0.1 mg·L-1IAA;Ⅰ4含0.5 mg·L-1TDZ和0.5 mg·L-1IAA;Ⅰ5含1.0 mg·L-1TDZ和0.1 mg ·L-1IAA;Ⅰ6含1.0 mg·L-1TDZ和0.5 mg·L-1IAA。培養(yǎng)基Ⅱ共2種:Ⅱ1含0.1 mg·L-1IAA和1.0 mg·L-1GA3;Ⅱ2含0.5 mg·L-1IAA和1.0 mg·L-1GA3。

    1.2.2 不定梢誘導(dǎo)培養(yǎng)流程的篩選 不定梢誘導(dǎo)培養(yǎng)基本流程為:從試管苗頂端摘取剛展開(kāi)的幼嫩葉片,將葉片垂直于中脈橫切后接種于培養(yǎng)基Ⅰ上,葉片近軸面接觸培養(yǎng)基;葉片在培養(yǎng)基Ⅰ上培養(yǎng)4周后轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基Ⅱ上培養(yǎng)3周。在培養(yǎng)基Ⅰ上的培養(yǎng)條件為:暗培養(yǎng),培養(yǎng)溫度為(25±2)℃;在培養(yǎng)基Ⅱ上的培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)溫度為(25±2)℃,光照時(shí)間為14 h·d-1,光照度為2 500 lx。

    為確定不同培養(yǎng)方法對(duì)不定梢誘導(dǎo)的影響,在上述基本培養(yǎng)流程的基礎(chǔ)上設(shè)置2種培養(yǎng)方式18種培養(yǎng)組合,分別為一步培養(yǎng)方式(在6種培養(yǎng)基Ⅰ上連續(xù)培養(yǎng)7周)和兩步培養(yǎng)方式(在6種培養(yǎng)基Ⅰ上培養(yǎng)4周后再分別轉(zhuǎn)接到2種培養(yǎng)基Ⅱ上培養(yǎng)3周)。另外,為研究愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間對(duì)不定梢誘導(dǎo)的影響,對(duì)兩步培養(yǎng)方式中葉片在培養(yǎng)基Ⅰ上的培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)行了不同的設(shè)置(分別為1、2、3和4周)。

    每處理接種3瓶,每瓶接種10個(gè)外植體,各處理均重復(fù)3次。在培養(yǎng)基Ⅱ上培養(yǎng)3周后,記錄再生不定梢的葉片數(shù)并計(jì)算不定梢的誘導(dǎo)率,結(jié)果取平均值。

    1.2.3 不定梢的增殖和生根培養(yǎng) 將在培養(yǎng)基Ⅱ上獲得的不定梢(芽)轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基(含2.0 mg·L-1BA、0.4 mg· L-1IBA、30 g·L-1蔗糖和6 g·L-1瓊脂的MS培養(yǎng)基,pH 5.8)上進(jìn)行繼代和增殖培養(yǎng),待不定梢在增殖培養(yǎng)基上長(zhǎng)至1.5 cm以上時(shí)分別轉(zhuǎn)移至2組生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo)。生根培養(yǎng)基分別為:含0.5 mg·L-1IBA、20 g·L-1蔗糖和6 g· L-1瓊脂的1/4MS培養(yǎng)基(pH 5.8);含0.5 mg·L-1IBA、30 g ·L-1蔗糖和6 g·L-1瓊脂的1/4MS培養(yǎng)基(pH 5.8)。不定梢增殖和生根培養(yǎng)條件與不定梢誘導(dǎo)的光照培養(yǎng)條件相同。

    每處理4瓶,每瓶轉(zhuǎn)接15個(gè)不定梢,每處理重復(fù)3次,培養(yǎng)30 d后觀察并統(tǒng)計(jì)生根的不定梢數(shù)量,計(jì)算生根率。生根率的計(jì)算公式為:生根率=(生根不定梢數(shù)/接種的不定梢總數(shù))×100%。

    1.3 數(shù)據(jù)分析

    采用DPSV3.01數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,采用Duncan’s新復(fù)極差法進(jìn)行多重比較,并對(duì)差異顯著性(P= 0.05)進(jìn)行檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果和分析

    2.1 ‘孔府酥脆’棗葉片不定梢誘導(dǎo)的3個(gè)影響因素分析

    采用不同的培養(yǎng)方式,‘孔府酥脆’棗葉片在激素配比不同的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)培養(yǎng)不同時(shí)間后不定梢的誘導(dǎo)率見(jiàn)表1。

    表1 培養(yǎng)方式、激素配比及培養(yǎng)時(shí)間對(duì)‘孔府酥脆’棗葉片不定梢誘導(dǎo)率的影響(±SD)Table 1 Effects of culture method,phytohormone proportion and culture time on induction rate of adventitious shoot from leaves of Zizyphus jujuba‘Kongfusucui’(±SD)

    表1 培養(yǎng)方式、激素配比及培養(yǎng)時(shí)間對(duì)‘孔府酥脆’棗葉片不定梢誘導(dǎo)率的影響(±SD)Table 1 Effects of culture method,phytohormone proportion and culture time on induction rate of adventitious shoot from leaves of Zizyphus jujuba‘Kongfusucui’(±SD)

    1)Ⅰ1:0.1mg·L-1 TDZ-0.1 mg·L-1 IAA;Ⅰ2:0.1mg·L-1 TDZ-0.5 mg·L-1 IAA;Ⅰ3:0.5 mg·L-1 TDZ-0.1 mg·L-1 IAA;Ⅰ4:0.5 mg·L-1 TDZ-0.5 mg·L-1 IAA;Ⅰ5:1.0 mg·L-1 TDZ-0.1 mg·L-1 IAA;Ⅰ6:1.0 mg·L-1 TDZ-0.5 mg·L-1 IAA;Ⅱ1:0.1 mg·L-1 IAA-1.0 mg·L-1 GA3;Ⅱ2:0.5 mg ·L-1 IAA-1.0 mg·L-1 GA3.2)數(shù)據(jù)為葉片在培養(yǎng)基Ⅰ上連續(xù)培養(yǎng)7周或分別培養(yǎng)1、2、3或4周后再轉(zhuǎn)接至培養(yǎng)基Ⅱ上培養(yǎng)3周后的不定梢誘導(dǎo)率 These data indicate induction rate of adventitious shoot from leaves cultured continuously onmediumⅠfor seven weeks,or cultured onmediumⅠfor one,two,three or four weeks,respectively and then cultured on mediumⅡfor three weeks;同列中不同的小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)Different small letters in the same column indicate the significant difference(P<0.05).

    培養(yǎng)方式1) Culture method1)不同培養(yǎng)時(shí)間的誘導(dǎo)率/%2) Induction rate at different culture times2) 1周One week 2周Two weeks 3周Three weeks 4周Four weeksⅠ1 0.0gⅠ1-Ⅱ1 4.6±1.2e 6.0±1.3d 18.8±6.2cd 39.5±4.3fⅠ1-Ⅱ2 4.9±1.8e 6.1±0.9d 18.2±4.2d 40.2±3.7fⅠ2 0.0gⅠ2-Ⅱ1 15.7±2.5d 18.3±2.5c 25.2±1.9abcd 48.0±3.3eⅠ2-Ⅱ2 27.3±2.5ab 30.1±3.2a 29.7±3.5ab 49.0±3.3eⅠ3 0.0gⅠ3-Ⅱ1 5.0±2.6e 7.3±3.1d 23.7±4.0bcd 58.0±2.2dⅠ3-Ⅱ2 9.6±3.1e 10.9±2.0d 26.3±3.0abc 58.6±3.3dⅠ4 0.0gⅠ4-Ⅱ1 29.3±4.0a 30.3±2.5a 31.7±1.5a 65.2±3.5cⅠ4-Ⅱ2 15.7±3.8d 18.3±3.8c 25.1±4.9abcd 68.2±2.6cⅠ5 0.0gⅠ5-Ⅱ1 9.3±3.5e 10.6±2.7d 28.1±1.6ab 81.6±1.7bⅠ5-Ⅱ2 20.3±4.0cd 21.0±4.4bc 28.3±4.1ab 82.8±3.0bⅠ6 0.0gⅠ6-Ⅱ1 25.3±4.5abc 28.7±3.2a 29.9±4.6ab 88.5±1.3aⅠ6-Ⅱ2 23.3±3.5abc 25.3±4.7ab 27.8±5.2ab 86.2±2.2ab

    2.1.1 培養(yǎng)方式的影響 由表1可見(jiàn),采用一步培養(yǎng)法在6種培養(yǎng)基Ⅰ上連續(xù)培養(yǎng)7周后葉片均沒(méi)有分化出不定芽,僅能產(chǎn)生由黃白色變?yōu)楹稚挠鷤M織;而采用兩步培養(yǎng)法,將在培養(yǎng)基Ⅰ上培養(yǎng)不同時(shí)間的外植體轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基Ⅱ上后,所有處理組都能誘導(dǎo)產(chǎn)生不定梢,但各處理組不定梢的誘導(dǎo)率不同。說(shuō)明兩步培養(yǎng)法對(duì)‘孔府酥脆’棗葉片不定梢誘導(dǎo)是有效的。2.1.2 培養(yǎng)基中激素配比的影響 由表1還可見(jiàn),葉片在培養(yǎng)基Ⅰ上培養(yǎng)4周后,培養(yǎng)基Ⅰ中TDZ的質(zhì)量濃度對(duì)不定梢的誘導(dǎo)率有顯著影響,隨著TDZ質(zhì)量濃度提高,不定梢的誘導(dǎo)率顯著增加。培養(yǎng)基Ⅰ中生長(zhǎng)素IAA的質(zhì)量濃度對(duì)葉片不定梢的誘導(dǎo)率也有明顯影響,在TDZ質(zhì)量濃度較低(0.1和0.5 mg·L-1)的培養(yǎng)基中添加0.5 mg·L-1IAA,不定梢的誘導(dǎo)率顯著高于添加0.1mg·L-1IAA的培養(yǎng)基;但在TDZ質(zhì)量濃度較高(1.0 mg·L-1)的培養(yǎng)基中添加不同質(zhì)量濃度的IAA,不定梢誘導(dǎo)率的差異不大。

    培養(yǎng)基Ⅱ中IAA的質(zhì)量濃度對(duì)提高不定梢誘導(dǎo)率基本沒(méi)有作用,但對(duì)不定梢的生長(zhǎng)勢(shì)有一定影響。在添加了0.5 mg·L-1IAA的培養(yǎng)基Ⅱ上誘導(dǎo)培養(yǎng)比在含0.1 mg·L-1IAA的培養(yǎng)基Ⅱ上更有利于不定梢的伸長(zhǎng)生長(zhǎng),這可能與一定濃度的生長(zhǎng)素具有促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)、刺激生長(zhǎng)的功能有關(guān)[7-8]。

    2.1.3 在培養(yǎng)基Ⅰ上不同培養(yǎng)時(shí)間的影響 由表1可見(jiàn),葉片在培養(yǎng)基Ⅰ上培養(yǎng)1、2或3周后再轉(zhuǎn)接到培養(yǎng)基Ⅱ上培養(yǎng),不定梢的誘導(dǎo)率均較低,絕大部分處理組的不定梢誘導(dǎo)率都在30%以下;而在培養(yǎng)基Ⅰ上培養(yǎng)4周的葉片不定梢的誘導(dǎo)率則大幅度提高,表明適當(dāng)延長(zhǎng)在培養(yǎng)基Ⅰ上的培養(yǎng)時(shí)間對(duì)不定梢誘導(dǎo)率的提高有一定作用。另外,為明確TDZ在‘孔府酥脆’棗葉片不定梢誘導(dǎo)培養(yǎng)過(guò)程中的作用,作者還將葉片在含1.0 mg·L-1TDZ的培養(yǎng)基Ⅰ上的培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至3個(gè)月和4個(gè)月,均沒(méi)有觀察到不定芽形成,但將葉片轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基Ⅱ上培養(yǎng)1周后即可觀察到不定梢,轉(zhuǎn)接2周后不定梢的誘導(dǎo)率可達(dá)60%以上,說(shuō)明培養(yǎng)基Ⅱ與‘孔府酥脆’棗葉片不定芽分化啟動(dòng)有關(guān)。

    2.2 不定梢的增殖和生根

    將獲得的不定梢轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng),不定梢的增殖生長(zhǎng)和伸長(zhǎng)生長(zhǎng)狀況均較良好,月增殖倍數(shù)約為3。生根培養(yǎng)基中其他成分保持一致,分別添加30和20 g·L-1蔗糖,不定梢的生根率分別為89.9%和81.4%,每株生根數(shù)分別為2.8和2.3,顯示生根培養(yǎng)基中蔗糖的質(zhì)量濃度對(duì)不定梢的生根有顯著影響,較高的蔗糖濃度有利于不定梢生根。

    3 討論和結(jié)論

    雖然棗樹(shù)葉片不定梢誘導(dǎo)已在一些品種或類型上獲得了成功[1-4,9-10],但因基因型的不同,所采用的不定梢誘導(dǎo)方法也有所不同,獲得的再生率也各不相同。陳宗禮等[1]以MS為基本培養(yǎng)基,采用兩步培養(yǎng)方法獲得了‘沾化冬棗’不定梢,不定梢的再生率為40%;而Gu等[2]以WPM為基本培養(yǎng)基,采用一步培養(yǎng)方法使‘沾化冬棗’不定梢再生率最高可達(dá)89.5%;以MS為基本培養(yǎng)基,采用兩步培養(yǎng)方法獲得的‘黃驊冬棗’不定梢的再生率達(dá)92.5%[3];而以WPM為基本培養(yǎng)基,采用兩步培養(yǎng)方法獲得的酸棗不定梢的再生率為100%[4-5];通過(guò)先誘導(dǎo)葉片不定根,再由不定根誘導(dǎo)不定芽也成功獲得了‘贊皇大棗’不定梢植株,但再生率很低,在20%以下[9]。這些結(jié)果均表明,基因型和培養(yǎng)方法對(duì)棗樹(shù)葉片不定梢的再生都有重要影響。本研究中,采用兩步培養(yǎng)法的‘孔府酥脆’棗葉片不定梢的再生率較高,與已報(bào)道的能獲得較高不定梢再生率的兩步培養(yǎng)方法相似[3-5],都在含細(xì)胞分裂素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)一定的時(shí)間,然后轉(zhuǎn)接至含生長(zhǎng)素和赤霉素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。

    綜合考慮不定梢誘導(dǎo)率及其生長(zhǎng)勢(shì),確定‘孔府酥脆’棗離體葉片不定梢誘導(dǎo)的最佳培養(yǎng)方法為采用兩種培養(yǎng)基(培養(yǎng)基Ⅰ和培養(yǎng)基Ⅱ)的兩步培養(yǎng)法。其中,最佳培養(yǎng)基Ⅰ為含1.0 mg·L-1TDZ和0.5 mg·L-1IAA的WPM培養(yǎng)基,最佳培養(yǎng)基Ⅱ?yàn)楹?.5 mg·L-1IAA和1.0 mg·L-1GA3的WPM培養(yǎng)基。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果為‘孔府酥脆’棗的工廠化育苗及采用生物技術(shù)手段改良品種提供了技術(shù)基礎(chǔ)。這一培養(yǎng)方法也為不同棗品種葉片的不定梢誘導(dǎo)提供了參考依據(jù)。

    [1]陳宗禮,延志蓮,薛 皓,等.沾化冬棗葉片培養(yǎng)和植株再生[J].植物生理學(xué)通訊,2002,38(6):584.

    [2]Gu X F,Zhang J R.An efficient adventitious shoot regeneration system for Zhanhua winter jujube(Zizyphus jujuba Mill.)using leaf explants[J].Plant Cell Reports,2005,23(12):775-779.

    [3]周瑞金,劉孟軍.棗離體葉片高效再生植株的研究[J].園藝學(xué)報(bào),2006,33(3):625-628.

    [4]王 妍,孫清榮,王元征,等.泰山酸棗離體葉片再生體系的建立[J].西北植物學(xué)報(bào),2009,29(10):2118-2122.

    [5]孫清榮,孫洪雁,張力思,等.酸棗葉片不定梢形成及玻璃化的影響因素[J].西北植物學(xué)報(bào),2010,30(5):1039-1044.

    [6]Lloyd G B,McCown BH.Commercially feasiblemicropropagation of mountain laurel,Kalmia latifolia,by use of shoot-tip culture[J].Proceedings of the International Plant Propagators’Society,1980,30:421-427.

    [7]葉梅榮,甘立軍,夏 凱.生長(zhǎng)素和赤霉素對(duì)離體水仙花莖切段伸長(zhǎng)的影響[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報(bào),2006,14(5):421-426.

    [8]葉梅榮,甘立軍,夏 凱.源于大蒜花苞的生長(zhǎng)素對(duì)蒜薹伸長(zhǎng)的促進(jìn)作用[J].園藝學(xué)報(bào),2006,33(6):1241-1245.

    [9]李 云,王 宇,田硯亭,等.贊皇大棗葉片再生植株的初步研究[J].核農(nóng)學(xué)報(bào),2003,17(3):187-190.

    [10]黃 建,馬鋒旺,樊軍鋒,等.棗樹(shù)離體葉片不定芽再生體系建立的研究[J].西北植物學(xué)報(bào),2006,26(5):942-948.

    猜你喜歡
    孔府蔗糖生根
    洮河流過(guò)生根的巖石(外二章)
    2019年來(lái)賓市蔗糖業(yè)總產(chǎn)值近100億元
    孔府名肴——“帶子上朝”
    金橋(2018年10期)2018-10-09 07:27:50
    孔府宴大件——神仙鴨子
    金橋(2018年7期)2018-09-25 02:28:26
    孔府的年節(jié)楹聯(lián)
    國(guó)外的微水洗車模式如何在本地“生根”
    摻HRA 對(duì)蔗糖超緩凝水泥基材料性能的影響
    瀾滄縣蔗糖產(chǎn)業(yè)發(fā)展的思考
    溫暖在嚴(yán)寒深處生根
    山東青年(2016年1期)2016-02-28 14:25:21
    冷脅迫與非冷脅迫溫度條件下桃果實(shí)的蔗糖代謝差異
    搡老妇女老女人老熟妇| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩亚洲欧美综合| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 欧美高清成人免费视频www| 免费无遮挡裸体视频| 亚洲欧美日韩无卡精品| 91在线精品国自产拍蜜月| 麻豆国产av国片精品| 国产综合懂色| 国产熟女欧美一区二区| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲一区高清亚洲精品| 内射极品少妇av片p| 亚洲专区中文字幕在线| 亚洲av免费在线观看| 一个人观看的视频www高清免费观看| 热99re8久久精品国产| 国产探花在线观看一区二区| 22中文网久久字幕| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 国产成人av教育| 国产成人a区在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 久久这里只有精品中国| 亚洲av熟女| 在线看三级毛片| 国产激情偷乱视频一区二区| 欧美日韩黄片免| 久久久成人免费电影| 深夜精品福利| 久久亚洲精品不卡| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲男人的天堂狠狠| av黄色大香蕉| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 久久久久久久久中文| 波多野结衣巨乳人妻| 午夜视频国产福利| 韩国av一区二区三区四区| 欧美激情久久久久久爽电影| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 男女啪啪激烈高潮av片| 听说在线观看完整版免费高清| 午夜激情欧美在线| 国产伦在线观看视频一区| 日日啪夜夜撸| 成人特级av手机在线观看| 成人性生交大片免费视频hd| 在线观看舔阴道视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 91久久精品国产一区二区成人| 婷婷丁香在线五月| 国产老妇女一区| www.色视频.com| 在线观看午夜福利视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 成年女人看的毛片在线观看| 国产精品一区二区三区四区久久| 三级毛片av免费| 国产精品人妻久久久久久| 亚洲av中文av极速乱 | 黄色一级大片看看| 一进一出好大好爽视频| 日本一二三区视频观看| 麻豆一二三区av精品| 国产乱人视频| 噜噜噜噜噜久久久久久91| xxxwww97欧美| 日韩精品中文字幕看吧| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 亚洲第一电影网av| 国产一区二区三区视频了| 波多野结衣高清作品| 99精品久久久久人妻精品| 亚洲av中文字字幕乱码综合| www日本黄色视频网| 一级毛片久久久久久久久女| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产成人aa在线观看| a级一级毛片免费在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 两个人视频免费观看高清| 免费看光身美女| 国产免费男女视频| 国产老妇女一区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 国产精品人妻久久久影院| 99热只有精品国产| 九九热线精品视视频播放| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲四区av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 又爽又黄a免费视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 亚洲色图av天堂| 日韩精品青青久久久久久| 久久99热这里只有精品18| 国国产精品蜜臀av免费| 成人无遮挡网站| 最新在线观看一区二区三区| 日韩大尺度精品在线看网址| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 日本五十路高清| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 午夜亚洲福利在线播放| 久久久色成人| 欧美高清性xxxxhd video| 日日夜夜操网爽| 国产免费男女视频| 日本免费一区二区三区高清不卡| 精品国产三级普通话版| 国产黄a三级三级三级人| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 精品人妻熟女av久视频| 精品日产1卡2卡| av专区在线播放| 亚洲av二区三区四区| 亚洲真实伦在线观看| 国产精品人妻久久久影院| 亚洲国产精品成人综合色| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国产伦一二天堂av在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| 国产精品av视频在线免费观看| 高清毛片免费观看视频网站| 国产成人一区二区在线| 亚州av有码| 国产成人aa在线观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 草草在线视频免费看| 久久国内精品自在自线图片| 麻豆一二三区av精品| 国产 一区精品| 一区二区三区免费毛片| 精品久久久噜噜| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 日韩av在线大香蕉| 九色国产91popny在线| 成人毛片a级毛片在线播放| 88av欧美| 欧美成人a在线观看| 好男人在线观看高清免费视频| 少妇人妻精品综合一区二区 | 少妇被粗大猛烈的视频| 精品乱码久久久久久99久播| 日韩欧美三级三区| 床上黄色一级片| 日日干狠狠操夜夜爽| 1024手机看黄色片| 级片在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 欧美区成人在线视频| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久久久久大精品| 真人一进一出gif抽搐免费| 国产av一区在线观看免费| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 成人三级黄色视频| 国产精品三级大全| 毛片女人毛片| 久久精品国产亚洲网站| 国产精品免费一区二区三区在线| 国产伦人伦偷精品视频| 国产成人aa在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 国内精品一区二区在线观看| 日韩精品青青久久久久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 麻豆成人午夜福利视频| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产黄片美女视频| 又粗又爽又猛毛片免费看| 97超视频在线观看视频| 欧美激情在线99| 精品午夜福利视频在线观看一区| 久久久久久久亚洲中文字幕| 特级一级黄色大片| 日韩人妻高清精品专区| 国产高清激情床上av| 99九九线精品视频在线观看视频| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 国产成年人精品一区二区| 亚洲欧美激情综合另类| 动漫黄色视频在线观看| 一区二区三区四区激情视频 | 真人一进一出gif抽搐免费| 欧美激情国产日韩精品一区| 亚洲精品粉嫩美女一区| 黄色丝袜av网址大全| 日本免费一区二区三区高清不卡| 午夜老司机福利剧场| 免费av观看视频| 国产主播在线观看一区二区| 成年免费大片在线观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 日韩强制内射视频| 99久久成人亚洲精品观看| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品久久久久久,| a在线观看视频网站| 国产av麻豆久久久久久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 国产成人av教育| .国产精品久久| 九九热线精品视视频播放| 亚洲美女搞黄在线观看 | 国产黄a三级三级三级人| 欧美成人免费av一区二区三区| 麻豆久久精品国产亚洲av| 最近中文字幕高清免费大全6 | 男女做爰动态图高潮gif福利片| 国产精品一区www在线观看 | 一区二区三区四区激情视频 | 此物有八面人人有两片| 免费av毛片视频| 亚洲内射少妇av| 最近最新免费中文字幕在线| 中出人妻视频一区二区| 国产精品乱码一区二三区的特点| 97碰自拍视频| 精品久久国产蜜桃| 麻豆国产av国片精品| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久久成人免费电影| a在线观看视频网站| 国产在视频线在精品| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 国产精品,欧美在线| 美女cb高潮喷水在线观看| 久久久精品大字幕| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 国产一区二区激情短视频| av女优亚洲男人天堂| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲成人久久性| 久久久久久伊人网av| 久久久久国内视频| av黄色大香蕉| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 88av欧美| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| a在线观看视频网站| 搞女人的毛片| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 国产色爽女视频免费观看| 午夜影院日韩av| 亚洲欧美日韩高清专用| av.在线天堂| а√天堂www在线а√下载| 啦啦啦韩国在线观看视频| 成人国产麻豆网| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 国产精品久久视频播放| 亚洲av五月六月丁香网| 乱人视频在线观看| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 久久久久九九精品影院| 在线a可以看的网站| 国产伦人伦偷精品视频| 国产午夜精品论理片| 99在线人妻在线中文字幕| 高清在线国产一区| 男人舔女人下体高潮全视频| 在线看三级毛片| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 毛片一级片免费看久久久久 | 国产黄a三级三级三级人| 高清在线国产一区| 国产伦精品一区二区三区视频9| 桃色一区二区三区在线观看| 又粗又爽又猛毛片免费看| 国产亚洲精品久久久com| 黄色一级大片看看| 欧美成人性av电影在线观看| 日韩国内少妇激情av| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 欧美潮喷喷水| 长腿黑丝高跟| 99热这里只有是精品50| 99久久中文字幕三级久久日本| 老司机福利观看| 久久久午夜欧美精品| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品久久久久久久电影| 高清毛片免费观看视频网站| 亚洲av五月六月丁香网| 69人妻影院| 日韩欧美在线乱码| 久久久久久大精品| a级一级毛片免费在线观看| 亚州av有码| 直男gayav资源| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 欧美xxxx性猛交bbbb| 亚洲电影在线观看av| 日韩强制内射视频| 性欧美人与动物交配| 国产黄片美女视频| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲最大成人手机在线| 直男gayav资源| 国产毛片a区久久久久| 成人国产麻豆网| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲人成网站高清观看| 国产乱人视频| 春色校园在线视频观看| 精品不卡国产一区二区三区| 丝袜美腿在线中文| 99久久九九国产精品国产免费| 俄罗斯特黄特色一大片| 久久久久久久久中文| 久久99热这里只有精品18| 欧美色视频一区免费| 在线播放无遮挡| 无遮挡黄片免费观看| 色播亚洲综合网| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲成人久久性| 亚洲内射少妇av| 国产69精品久久久久777片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产亚洲精品久久久com| 91在线观看av| 亚洲综合色惰| 三级毛片av免费| 精品福利观看| 成人午夜高清在线视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美日韩乱码在线| 天天一区二区日本电影三级| 国产高清有码在线观看视频| 中国美白少妇内射xxxbb| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久精品影院6| 国产色婷婷99| 床上黄色一级片| 成人一区二区视频在线观看| 99在线人妻在线中文字幕| 91精品国产九色| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲成av人片在线播放无| 在线a可以看的网站| 五月玫瑰六月丁香| 欧美3d第一页| 成人毛片a级毛片在线播放| 欧美黑人巨大hd| 久久久久久久久久成人| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 99视频精品全部免费 在线| 变态另类丝袜制服| 亚洲美女搞黄在线观看 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 精品人妻视频免费看| 日本欧美国产在线视频| 欧美激情国产日韩精品一区| 一区福利在线观看| 国产成人av教育| 日本-黄色视频高清免费观看| 欧美精品国产亚洲| 直男gayav资源| 国产一区二区三区av在线 | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 一本久久中文字幕| 黄色一级大片看看| 亚洲精品国产成人久久av| 黄色丝袜av网址大全| 久久人人精品亚洲av| 国产成人aa在线观看| 日本成人三级电影网站| 偷拍熟女少妇极品色| 真实男女啪啪啪动态图| 精品人妻视频免费看| 日韩 亚洲 欧美在线| 国产高潮美女av| 精品人妻熟女av久视频| av天堂在线播放| 干丝袜人妻中文字幕| 精品人妻视频免费看| 国产视频内射| 人妻夜夜爽99麻豆av| 久久久久久大精品| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 久久亚洲真实| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久久久伊人网av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 一区二区三区高清视频在线| 嫩草影院新地址| 久久久久久久亚洲中文字幕| 亚洲成人中文字幕在线播放| 国产真实乱freesex| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国国产精品蜜臀av免费| 黄色丝袜av网址大全| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 精品人妻熟女av久视频| 久久香蕉精品热| 免费搜索国产男女视频| 91狼人影院| 国产精品人妻久久久影院| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 真人一进一出gif抽搐免费| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 九九爱精品视频在线观看| 国产精品福利在线免费观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲专区国产一区二区| 免费大片18禁| 联通29元200g的流量卡| 午夜福利欧美成人| 精品一区二区三区视频在线| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 欧美黑人欧美精品刺激| 精品日产1卡2卡| 日本五十路高清| 成人性生交大片免费视频hd| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 制服丝袜大香蕉在线| 中文字幕av在线有码专区| 国产成年人精品一区二区| 啦啦啦韩国在线观看视频| 嫩草影院精品99| 天天一区二区日本电影三级| 亚洲va在线va天堂va国产| av在线蜜桃| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 精品人妻视频免费看| 午夜影院日韩av| 久久久国产成人精品二区| 热99在线观看视频| 天堂网av新在线| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 91在线观看av| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲电影在线观看av| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 村上凉子中文字幕在线| 别揉我奶头 嗯啊视频| 亚洲18禁久久av| 看黄色毛片网站| 超碰av人人做人人爽久久| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久亚洲真实| 国产一区二区三区视频了| 国产成人av教育| av国产免费在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲内射少妇av| 国产伦一二天堂av在线观看| 精品久久久久久久末码| 日本免费一区二区三区高清不卡| 91麻豆av在线| 日韩欧美三级三区| 欧美日本视频| 成人无遮挡网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 成人鲁丝片一二三区免费| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 亚洲在线观看片| 波多野结衣高清作品| av在线老鸭窝| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产三级中文精品| 日本欧美国产在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 久久久精品大字幕| 国产伦精品一区二区三区视频9| 国产单亲对白刺激| 波多野结衣高清无吗| 国产美女午夜福利| 免费av不卡在线播放| 狠狠狠狠99中文字幕| 国产av麻豆久久久久久久| 国内揄拍国产精品人妻在线| 在线看三级毛片| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲性夜色夜夜综合| 午夜精品一区二区三区免费看| 他把我摸到了高潮在线观看| 色av中文字幕| 亚洲精品日韩av片在线观看| 国产69精品久久久久777片| 日韩一本色道免费dvd| 精品欧美国产一区二区三| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 天天躁日日操中文字幕| 黄色一级大片看看| 色哟哟·www| 国产单亲对白刺激| 悠悠久久av| 91在线精品国自产拍蜜月| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 久久精品国产清高在天天线| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 成人午夜高清在线视频| av在线蜜桃| 91精品国产九色| 国产精品人妻久久久影院| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 亚洲成人免费电影在线观看| xxxwww97欧美| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲午夜理论影院| 最近最新免费中文字幕在线| 神马国产精品三级电影在线观看| 国产v大片淫在线免费观看| 精品午夜福利在线看| 内射极品少妇av片p| 午夜福利视频1000在线观看| 国产精品无大码| 国产高清三级在线| 男女之事视频高清在线观看| 我的老师免费观看完整版| 99久国产av精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 欧美人与善性xxx| 99久久精品国产国产毛片| 亚洲真实伦在线观看| 别揉我奶头 嗯啊视频| 九九热线精品视视频播放| 精品福利观看| 日韩高清综合在线| 国产av在哪里看| 99热这里只有精品一区| 国产一区二区激情短视频| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲成人久久爱视频| 婷婷六月久久综合丁香| 亚洲午夜理论影院| 久久久久九九精品影院| 深夜a级毛片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 一夜夜www| 一区二区三区高清视频在线| 欧美高清性xxxxhd video| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 热99re8久久精品国产| 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美日本视频| 禁无遮挡网站| eeuss影院久久| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲精品一区av在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 22中文网久久字幕| 高清在线国产一区| 深爱激情五月婷婷| 麻豆久久精品国产亚洲av| 精品久久久久久成人av| 久久久久久大精品| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久草成人影院| 有码 亚洲区| 又紧又爽又黄一区二区| 麻豆av噜噜一区二区三区| 国产成年人精品一区二区| 日韩精品中文字幕看吧| 久99久视频精品免费| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 欧美日本视频| 成人无遮挡网站| 午夜影院日韩av| 99热精品在线国产| 亚洲av一区综合| 熟女电影av网| 亚洲av不卡在线观看| 丰满乱子伦码专区| 欧美区成人在线视频| 国产精品久久久久久久久免| 国产精品三级大全| 国产熟女欧美一区二区| 中出人妻视频一区二区| 久久久久久国产a免费观看| 熟女电影av网| 91麻豆av在线| 日韩强制内射视频| 日本黄大片高清| 日本在线视频免费播放| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产一级毛片七仙女欲春2| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产一级毛片七仙女欲春2| 在线看三级毛片| 午夜福利欧美成人| 老女人水多毛片| 男女边吃奶边做爰视频| 内射极品少妇av片p| 亚洲va在线va天堂va国产|