十字花科根腫病研究進(jìn)展

王 靖， 黃 云， 李小蘭， 黎懷忠

（1．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理系，成都 611130； 2．河套大學(xué)農(nóng)牧與生化工程學(xué)院，巴彥淖爾 015000；3．四川省成都市郫縣植保植檢站，611730）

十字花科根腫病最早于1737年在英國(guó)地中海西岸和歐洲南部發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)廣泛分布于歐洲、北美、日本及中國(guó)的遼寧、吉林、新疆、北京、山東、上海、江蘇、浙江、安徽、湖北、湖南、四川、重慶、江西、云南、西藏、廣東、廣西、福建、臺(tái)灣等?。ㄊ校┳灾螀^(qū)［1］。隨著十字花科作物栽培種類增加及面積的擴(kuò)大、商品種子和南北菜的相互交流調(diào)運(yùn)、土壤的酸化、全球氣候的逐年變暖，近年來我國(guó)十字花科根腫病的發(fā)生面積逐年擴(kuò)大，嚴(yán)重程度逐年加重，已成為十字花科植物重要病害之一。根腫病不僅僅危害十字花科蔬菜，還危害油菜及十字花科作物、雜草等。根腫病是世界范圍內(nèi)的毀滅性土傳植物病害，可造成20%～90%的嚴(yán)重減產(chǎn)。休眠孢子在無感病寄主植物的土壤中存活可達(dá)20年之久，土壤一旦污染，將不再適宜十字花科植物的栽培［2］；此外，引起根腫病的原生動(dòng)物——蕓苔根腫菌（Pl asmodiophor a br assicae Wor on）專性寄生，不能在人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，傳染性強(qiáng)、傳播速度快、傳播途徑多、防治難度大，因此國(guó)際上目前非常重視該病并進(jìn)行了大量研究。本文概述了國(guó)內(nèi)外根腫病的研究進(jìn)展，期望能對(duì)我國(guó)根腫病的整體研究有所借鑒和幫助。

1 根腫病的寄主和危害

1．1 寄主范圍

根腫病主要危害十字花科植物，如油菜、白菜、青菜、甘藍(lán)、抱子芥、榨菜、蘿卜、蕪菁等。一些花園植物如香雪球、庭薺、緞花、胡椒草、紫羅蘭、糖芥等有時(shí)也被感染。絕大多數(shù)野生十字花科植物包括野芥子、菥蓂、野芥菜、野蘿卜、黃花山芥菜、山芥等易被侵染。木犀草（木犀草科）、虞美人（罌粟科）、紅三葉草（豆科）和草地生黑麥草（禾本科）等非十字花科植物在人工接種時(shí)也可被侵染［3］。

1．2 癥狀及危害

根腫病主要危害植物根部，形成形狀及大小不一的腫瘤，后期腫根易被雜菌侵入造成腐爛［4］。植株整個(gè)生育期均可發(fā)病，受侵愈早，發(fā)病愈重。發(fā)病初期，地上部癥狀不明顯。隨著受害根部的逐漸膨大，病株葉片淡綠、生長(zhǎng)緩慢。基部葉片在晴天中午常萎蔫，早晚恢復(fù)，嚴(yán)重者整株枯死。

根腫病會(huì)導(dǎo)致十字花科作物產(chǎn)量和品質(zhì)嚴(yán)重下降［5］，且土壤將長(zhǎng)期帶菌而導(dǎo)致部分蔬菜和油菜基地被迫改種其他作物。在我國(guó)，根腫病常年危害面積約320～400萬h m2，占十字花科作物種植面積的1／3以上，大流行年份發(fā)生與危害面積可達(dá)900萬h m2，平均產(chǎn)量損失達(dá)20%～30%，嚴(yán)重田塊直接產(chǎn)量損失達(dá)60%以上。

2 根腫病的病原

蕓苔根腫菌（P．br assicae）的分類地位仍存在爭(zhēng)議。目前公認(rèn)的觀點(diǎn)是將根腫病菌歸到原生動(dòng)物界、根腫菌門（Plasmodiophoromycota）中（因?yàn)槠渖钍分写嬖谠|(zhì)團(tuán)階段）［6］。

根腫病菌的休眠孢子囊在寄主根部薄壁組織細(xì)胞內(nèi)形成，球形或扁圓形、單胞、無色或略帶灰色，大小1．6～4．6μm，常密集呈魚卵狀。將休眠孢子懸浮液的沉淀經(jīng)戊二醛固定、乙醛逐步脫水、醋酸異戊酯置換、離子濺射鍍金后，于掃描電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)不同寄主上根腫病菌休眠孢子的形態(tài)和大小略有不同（表1）［7］。由于根腫病菌休眠孢子囊萌發(fā)時(shí)只釋放1個(gè)游動(dòng)孢子，因此它的休眠孢子囊通常稱為休眠孢子。

表1 不同寄主來源根腫病菌休眠孢子的大小

條件適宜時(shí)休眠孢子萌發(fā)釋放出1個(gè)具有一長(zhǎng)一短2條鞭毛的游動(dòng)孢子，腎形或橢圓形、近球形。游動(dòng)孢子經(jīng)過一段時(shí)間后鞭毛脫落而囊化形成休止孢。休止孢萌發(fā)形成一管狀結(jié)構(gòu)穿透寄主細(xì)胞壁，將原生質(zhì)注入寄主細(xì)胞內(nèi)，發(fā)育成原質(zhì)團(tuán)。黃云等人在電鏡下觀察到了油菜根腫病菌休眠孢子至管腔的過程［8］。

2．1 致病性分化

目前國(guó)際上通用的鑒別體系是Willia ms系列和ECD系列。Willia ms根據(jù)被侵染的4種十字花科植物 品 種 ‘Jersey Queen’、‘Badger Shipper’、‘Laurentian’和‘Wilhel msburger’的反應(yīng)類型制定了一個(gè)標(biāo)示根腫病菌生理小種的系統(tǒng)。

Williams系列包括 ‘Jersey Queen’、‘Badger Shipper’、‘Laurentian’和‘Wilhel msburger’4種十字花科植物［9］；歐洲鑒別寄主ECD系列共含有15個(gè)十字花科品種，其中同樣含有‘Jersey Queen’、‘Badger Shipper’和‘Wilhel msburger’［10］。Jone等進(jìn)行單孢接種后利用ECD系列獲得了4個(gè)生理小種［11］。沈向群等人采用Williams系列進(jìn)行鑒定，認(rèn)為目前國(guó)內(nèi)根腫病菌的優(yōu)勢(shì)生理小種是4號(hào)（主要分布在平原大白菜主產(chǎn)區(qū)）［12］。

2．2 分離與保存

根腫病菌休眠孢子的常規(guī)分離是將根腫組織進(jìn)行研磨、過濾、反復(fù)離心，但該法不利于休眠孢子的長(zhǎng)期保存（因?yàn)樾菝哝咦討腋∫褐泻卸喾N微生物）［13］。Castlebur y等將常規(guī)分離法進(jìn)行了改進(jìn)，在離心過程中加入消毒滅菌劑（40%二氧化硅溶于Na OH，p H9．8）以排除其他微生物［14］。

肖崇剛等［15］選用10%次氯酸鈉溶液（有效氯0．52%）作為消毒滅菌劑，減少了離心次數(shù)。楊佩文等［16］用50%蔗糖溶液對(duì)休眠孢子粗提液進(jìn)行懸浮，以除去淀粉、土壤顆粒等雜質(zhì)。鄧潔等人［17］在p H5．5左右、添加0．5%的二甲基亞砜、孢子濃度約為7×108、345 W功率下超聲波處理50 min后，孢子破碎率穩(wěn)定地達(dá)到90%以上，除菌率達(dá)99%以上。

根腫病菌不能在人工合成培養(yǎng)基上進(jìn)行離體培養(yǎng)，使得長(zhǎng)期保存非常困難。根腫病菌常用的保存方法是活體或低溫保存，活體保存法（把根腫病菌接種在健康的植株上作為菌株保存）費(fèi)時(shí)、勞動(dòng)強(qiáng)度大。Castlebury等認(rèn)為根腫組織冷凍數(shù)年后休眠孢子仍具有活性，而Miller卻認(rèn)為冷凍保存3個(gè)月后休眠孢子的活性會(huì)減弱［18］。

2．3 檢測(cè)

利用酶聯(lián)免疫法 ELISA （enzy me－liked i mmunosor bent assay）、斑點(diǎn)免疫法 DIBA （dot i mmunobinding assay）和組織免疫印跡 TBIA （tissue－bl ot i mmunoassay）等方法可以檢測(cè)人工接種土壤及根腫組織中的休眠孢子［19－20］；采用熒光顯微技術(shù)也可以估測(cè)土壤中根腫病菌休眠孢子的含量［21］；不過這些方法的應(yīng)用因需要專用設(shè)備而受到了限制。血清學(xué)技術(shù)也可用于檢測(cè)，雖然便宜，但需要制備單克隆抗體，因此也不實(shí)用。

PCR技術(shù)在檢測(cè)根腫病菌方面顯示了巨大潛力［22］。Ito等將PCR技術(shù)應(yīng)用到根腫病的檢測(cè)中［23］。Faggian等獲得了專一性PCR引物來檢測(cè)根腫病菌［24］。Mananares等繪制了不同根腫病菌單孢分離菌群的RAPD圖譜［25］，發(fā)現(xiàn)同屬某一特殊類型的病原菌（P1）有共同的分子標(biāo)記——OPL14（1200），同時(shí)設(shè)計(jì)出了擴(kuò)增引物。楊佩文等應(yīng)用ITS區(qū)段通用引物ITS1和ITS4對(duì)根腫病菌進(jìn)行PCR，并將得到的目的片段克隆到p GEM－T載體上，設(shè)計(jì)了一對(duì)根腫病菌特異性寡聚核苷酸引物［26］。尹全等根據(jù)Gen Bank中根腫病菌的保守序列設(shè)計(jì)了一對(duì)引物，該引物能從供試的根腫病菌根組織中特異性擴(kuò)增出一條498 bp的預(yù)期條帶，且能檢測(cè)出土壤根腫病菌孢子含量大于104個(gè)／g土的帶菌土壤［27］。

2．4 生物學(xué)特性

Chupp和Honig認(rèn)為光抑制休眠孢子萌發(fā)。肖崇剛、黃云等認(rèn)為根腫病菌休眠孢子萌發(fā)適溫為24℃，最適p H為6．0～6．7，腫根腐爛處理促進(jìn)萌發(fā)，光不利于萌發(fā)。肖崇剛等發(fā)現(xiàn)甘藍(lán)根腫病菌休眠孢子的致死溫度為45℃，番茄、抗感根腫病甘藍(lán)的根分泌物均能促進(jìn)休眠孢子萌發(fā)；而黃云等發(fā)現(xiàn)油菜根腫病菌休眠孢子的致死溫度為48℃，寄主植物白菜、抗感根腫病油菜的根分泌物促進(jìn)休眠孢子萌發(fā)，非寄主植物水稻的根分泌物抑制休眠孢子的萌發(fā)［18，28］。上述分歧可能與病菌、寄主及非寄主的選擇有關(guān)。

3 病害發(fā)生規(guī)律

根腫病菌以休眠孢子黏附在種子上或在帶有病殘?bào)w的土壤及未腐熟的廄肥中越冬。休眠孢子既可在田間近距離傳播（主要借助線蟲、昆蟲活動(dòng)、土壤中水分、農(nóng)事操作等），又可進(jìn)行遠(yuǎn)距離傳播（帶菌泥土的轉(zhuǎn)移、帶病苗及病株的調(diào)運(yùn)）［29－30］。種子帶菌與否目前存在爭(zhēng)議。根毛或幼根一般先被入侵（不表現(xiàn)癥狀），當(dāng)根腫病菌進(jìn)入寄主根部的形成層及皮層組織后，薄壁細(xì)胞受刺激而加速分裂，且體積增大，從而導(dǎo)致根部長(zhǎng)出腫瘤（約需10 d）。當(dāng)病根腐爛后，其內(nèi)大量的休眠孢子又隨病殘?bào)w落在土壤或堆肥中，進(jìn)行再侵染或休眠。

溫暖（土溫10～30℃，適溫19～25℃）、濕潤(rùn)（相對(duì)含水量60%～98%）的弱酸性土壤最利于根腫病的發(fā)生，p H 4．8～7．6的田塊均可發(fā)病，發(fā)病的早晚、輕重與當(dāng)年的溫度、降雨和土壤等因素有關(guān)。播種后第2、3周的光照水平（最佳光照600 W／h m2·d）和溫度（最適日均溫≥19．5℃）對(duì)根腫病發(fā)生的嚴(yán)重程度影響最大［31］。條件適宜時(shí)，十字花科作物在2葉1心至6葉1心期，根腫病發(fā)生發(fā)展速度快，6葉1心后發(fā)展速度有所減慢。2葉期是防治根腫病的關(guān)鍵。

4 根腫病的防治

4．1 農(nóng)業(yè)措施

4．1．1 改良土壤，惡化根腫病菌的生存環(huán)境

利用石灰及其他形式的鈣鹽在一定程度上可以調(diào)節(jié)土壤pH。鈣鹽處理既可以調(diào)節(jié)土壤的p H，又可以增加土壤中可交換Ca2＋的濃度從而減輕病害的危害［32］。一旦發(fā)病可撒施熟石灰（100～150 kg／667 m2）或草木灰（30～50 kg／667 m2）［33］。通過施用石灰調(diào)節(jié)土壤p H來降低根腫病發(fā)病率雖有一定的防治效果，但成本高，且長(zhǎng)期使用石灰對(duì)土壤結(jié)構(gòu)、生理生化性狀都會(huì)造成不良影響，因此不可長(zhǎng)期使用。

戴玉華等［34］推薦了生產(chǎn)上可使用的有效技術(shù)：用腐熟農(nóng)家肥做底肥 → 播種后發(fā)芽前用1%石灰液澆穴 → 出苗后2葉、4葉和6葉期各灌根1次 →病情嚴(yán)重的地塊團(tuán)棵期再澆施1%石灰液1次。該法成本低、用量少、流失快，對(duì)土壤理化性狀影響小。

4．1．2 加強(qiáng)田間管理，營(yíng)造良好的土壤環(huán)境

采用無菌土育苗；田間開溝、及時(shí)除草，盡量降低濕度；一旦發(fā)現(xiàn)病株立即拔出并燒毀（且用石灰水對(duì)病窩消毒）；菜收完后，應(yīng)徹底清除田間病殘?bào)w（可將根茬全部挖出，運(yùn)到50～70 c m深的坑內(nèi)，撒石灰后蓋土，讓根茬腐爛）。需將病殘?bào)w煮熟后，再喂牲畜，決不能用病殘?bào)w漚肥。另外，將常規(guī)播種期延后5～10 d播種，可在一定程度上減輕根腫病的發(fā)生。

4．2 化學(xué)防治

化學(xué)防治是目前普遍采用的防治方法，據(jù)報(bào)道多菌靈、百菌清、五氯硝基苯、氟啶胺、氰霜唑等對(duì)根腫菌具有一定的防效［35－36］。張日 波［37］在室內(nèi)進(jìn)行了藥劑抑制孢子萌發(fā)的篩選試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)12種藥劑對(duì)白菜根腫病菌的孢子抑制率大小順序依次為：氰霜唑＞噻菌銅＞多抗霉素B＞氟啶胺＞百菌清＞乙鋁·錳鋅＞代森鋅＞甲基硫菌靈＞烯酰嗎啉＞多菌靈＞丙森鋅＞甲霜·錳鋅。但在大田卻只有50%氟啶胺和10%氰霜唑?qū)Π撞烁[病具有較好防治效果。孫道旺等［38］發(fā)現(xiàn)在苗期應(yīng)用75%百菌清灌根2次對(duì)根腫病有效，且農(nóng)藥殘留量未超標(biāo)。

4．2．1 嚴(yán)格種子處理及苗床消毒，培育抗病壯苗

播前曬種并去掉弱病粒；播種前用55℃的溫水浸種15 min，再用10%氰霜唑懸浮劑2 000～3 000倍液浸種10 min或福爾馬林100倍液浸種20～30 min，用水洗凈后播種；使用福爾馬林50倍液或敵磺鈉500倍液或10%氰霜唑1 500～2 000倍液對(duì)苗床進(jìn)行潑地消毒（淋土深度15 c m左右）。移栽時(shí)需藥液（石灰水：每桶水加0．1～0．2 kg石灰粉；10%氰霜唑1 500～2 000倍液）浸根或用作定根水。

4．2．2 土壤處理

播種或移栽前用氰氨化鈣或氟啶胺進(jìn)行土壤處理。氟啶胺在土壤中藥效穩(wěn)定，但在較高濃度下對(duì)幼苗根系生長(zhǎng)有抑制作用，只適宜在移栽大田時(shí)進(jìn)行土壤處理。

4．2．3 藥劑防治

田間防治時(shí)，可用75%百菌清500倍液或10%氰霜唑1 500～2 000倍液對(duì)植株進(jìn)行灌根，每15 d左右一次。

4．3 抗病品種的選育

國(guó)外，特別是韓國(guó)和日本，對(duì)抗根腫病育種的研究做了大量工作。Bradshaw等利用四倍體雜交法培育出了對(duì)根腫病有抗性的蕪菁、甘藍(lán)［39］；Masashi Hiral等培養(yǎng)出了抗根腫病的大白菜（將歐洲飼用蘿卜的抗病基因轉(zhuǎn)移到大白菜上）［40］。

國(guó)內(nèi)，孫保亞等人從國(guó)外引進(jìn)的大白菜中分離出大白菜抗根腫病自交系48個(gè)［41］，但在我國(guó)白菜中還沒有發(fā)現(xiàn)抗根腫病的材料。劉勇等在成都根腫病重發(fā)病區(qū)對(duì)四川主栽的38個(gè)油菜品種和8個(gè)德國(guó)新引進(jìn)的油菜品種進(jìn)行了根腫病抗性研究，結(jié)果表明四川主栽油菜品種全部感?。?2］。司軍等對(duì)19份甘藍(lán)材料的抗性進(jìn)行了鑒定及綜合評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)‘日本甘藍(lán)’、‘皺葉甘藍(lán)’、‘大楠木’3份材料對(duì)根腫病表現(xiàn)為抗病，可以作為抗病育種的材料［43］。胡靖鋒等采用菌土接種法鑒定了云南地區(qū)110份十字花科作物對(duì)根腫病的抗性，發(fā)現(xiàn)蕪菁材料‘TS04’為高抗材料［44］。

4．4 生物防治

4．4．1 誘餌法

通過種植根腫病菌寄主植物或非寄主植物來促進(jìn)休眠孢子萌發(fā)，減少土壤里休眠孢子的數(shù)量，然后在隨后種植十字花科作物時(shí)便可減輕根腫病的發(fā)生。國(guó)外在這方面已經(jīng)進(jìn)行了大量研究，并且證明了該方法的有效性［45－46］。

4．4．2 從自然界分離拮抗微生物防治根腫病

Narisawa等［47－48］從小麥、油菜、大白菜和象草地里生長(zhǎng)的大白菜根中分離根殖真菌，在消毒土壤中，其中16個(gè)菌株可以完全抑制根腫病菌，2株根部?jī)?nèi)生菌Heteroconiu m chaetospir a在自然土中也可減輕根腫病的發(fā)生。

Arie等報(bào)道利用Phoma gl omer ata JCM 9972可以抑制根腫病菌休眠孢子的萌發(fā)并有效控制根腫病的發(fā)生［49］，其主要抑菌物質(zhì)為頂環(huán)氧菌素（N－［3－氯－5－（三氟甲基）－2－吡啶基］－3－氯－4－（三氟甲基）－2，6－二硝基苯胺），且250μg／mL頂環(huán)氧菌素能完全抑制休眠孢子的萌發(fā)。

在田間試驗(yàn)中，產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的放線菌（Streptomyces sp．）AC－3與有機(jī)肥按2%的比例混合，可將根腫病危害減輕50%，明顯好于單用有機(jī)肥的效果［50］。Cheah等通過溫室和田間試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，3個(gè)木霉菌株（TC32、TC45和TC63）和1個(gè)鏈霉菌菌株（S99）可以顯著減輕新西蘭十字花科根腫病的發(fā)生［51］。Lee等從韓國(guó)大白菜根部分離到81株內(nèi)生放線菌，其中有3株在室內(nèi)對(duì)十字花科根腫病有較好防效［52］。2株 Microbispor a rosea subsp．rosea防效分別為58%和33%，1株Streptomyces olivochromogenes防效達(dá)42%。

何月秋等從大白菜根際土壤中成功分離到一株枯草芽胞桿菌（Bacill us subtilis）XF－1（保藏號(hào)為CGMCC NO．2357）來防治根腫病［1，53］。XF－1菌株室內(nèi)防治效果達(dá)85%，田間防效68．6%～84．8%。

5 展望

日本19世紀(jì)30年代開始發(fā)生根腫病，由于土地面積小，很快無法生產(chǎn)，日本政府投入巨資建立根腫病的專門研究機(jī)構(gòu)，研究根腫病的發(fā)生發(fā)展規(guī)律性，特別是開展病菌的收集整理工作，篩選抗源。我國(guó)土地面積大，存在不同的氣溫土壤等條件，因此可能存在多個(gè)生理小種。為防止十字花科根腫病在我國(guó)大流行，應(yīng)盡快開展廣泛研究，主要包括：

1）開展全國(guó)性的根腫病調(diào)查工作，盡快搞清各地小種的分布情況，為篩選?；剐云贩N創(chuàng)造前提條件。

2）探索分子標(biāo)記的利用，建立快速進(jìn)行抗性品種鑒定的技術(shù)。

3）進(jìn)行抗源的收集和整理，并通過傳統(tǒng)的育種方法或分子技術(shù)育出抗病或耐病的品種。

4）分離并快速篩選土壤拮抗微生物和內(nèi)生菌，尋找高效的根腫病拮抗菌株，同時(shí)進(jìn)行提高生防菌株防效的試驗(yàn)并摸索工業(yè)化生產(chǎn)條件。

由于根腫病菌的休眠孢子可在土壤中存活20年，且該病發(fā)生初期地上部癥狀不明顯，不易檢測(cè)，因此，應(yīng)通過耕作、栽培措施，并結(jié)合化學(xué)防治及生物防治，形成綜合防治體系，在注重經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益、社會(huì)效益的同時(shí)將根腫病的損失降到最低。

［1］ 黃云．植物病害生物防治學(xué)［M］．北京：科學(xué)出版社，2010：291－292．

［2］ Howard R J，Strel kov S E，Harding M W．Clubroot of cruciferous crops－new perspectives on an old disease［J］．Can J Plant Pat hol，2010，32（1）：43－57．

［3］ Ludwig－Muller J，Bennett R N，Kiddle G，et al．The host range of Pl asmodiophor a br assicae and its relationship to endogenous gl ucosinolate content［J］．New Phytologist，1999，141（3）：443－458．

［4］ Devos S，Vissenberg K，Ver belen J P，et al．Infection of Chinese cabbage by Plasmodiophor a brassicae leads to a sti mulation of plant growth：i mpacts on cell wall metabolism and hormone balance［J］．New Phytologist，2005，166：241－250．

［5］ 王靖，黃云，胡曉玲，等．油菜根腫病癥狀、病原形態(tài)及產(chǎn)量損失研究［J］．中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2008，30（1）：112－115．

［6］ Ainsworth G C．Ainsworth and Bisby’s dictionary of the f ungi［M］．London：Commonwealth Mycological Institute，1995．

［7］ 楊文強(qiáng)．小白菜根腫病發(fā)生規(guī)律、發(fā)病條件及病菌生物學(xué)特性研究［D］．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2009．

［8］ 黃云，馬淑青，李曉琴，等．油菜根腫病菌的形態(tài)和休眠孢子的生物學(xué)特性［J］．中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，40（7）：1388－1394．

［9］ Williams P H．A system f or the deter mination of races of Pl asmodiophor a br assicae t hat infect cabbage and r utabaga［J］．Phyt opat hology，1966，56（5）：624－626．

［10］Buczacki S T，Toxopeus H，Matt usch P，et al．St udy of physiologic specialization in Pl asmodiophor a br assicae：Proposals for attempted rationalization through an international approach［J］．Trans Br Mycol Soc，1975，65：295－303．

［11］Jones D R，Ingra m D S，Dixon G R．Factors affecting tests for differential pathogenicity in populations of Plasmodiophor a br assicae［J］．Plant Pat hology，1982，31：229－238．

［12］沈向群，聶凱，吳瓊，等．大白菜根腫病主要生理小種種群分化鑒定初報(bào)［J］．中國(guó)蔬菜，2009（8）：59－62．

［13］Mac Farlane I．A sol ution cult ure technique for obtaining r oothair or pri mary infection by Pl asmodiophor a br assicae［J］．J Gen Myco Soc，1958，18：720－732．

［14］Castlebury L A，Maddox J V，Glawe D A．A technique f or t he extraction and purification of viable Pl asmodiophora brassicae resting spores fr o m host r oot tissue［J］．Mycologia，1994，86（3）：458－460．

［15］肖崇剛，郭向華．甘藍(lán)根腫病菌的生物學(xué)特性研究［J］．菌物系統(tǒng)，2002，21（4）：597－603．

［16］楊佩文，李家瑞，楊勤忠，等．十字花科蔬菜根腫病菌休眠孢子的分離與檢測(cè)［J］．云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2002，17（3）：301－306．

［17］鄧潔，程龍，劉誼，等．根腫（Plasmodiophor a br assicae）休眠孢子的純化和超聲波破碎方法研究［J］．應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2006，12（2）：269－272．

［18］Castlebury L A，Glawe D A．A comparison of three techniques for inoculating Chinese cabbage wit h Plasmodiophor a br assicae［J］．Mycologia，1993，85（5）：8666－8671．

［19］Wakeham A J，White J G．Ser ological detection in soil Pl asmodiophor a br assicae resting spores［J］．Physiol Mol Plant Pat hol，1996，48：289－303．

［20］Shoko O，Takashi Y．Detection of resting spores of Pl asmodiophor a br assicae fro m soil and plant tissus by enzy me i mmu－noassay［J］．Ann Phytopathol Soc Jpn，1998，64：569－577．

［21］Takahashi K，Yamaguehi T．Assessment of pathogenicity of resting spores of Pl asmodiophor a br assicae in soil by fl uorescence microscopy［J］．Ann Phytopathol Soc Japan，1989，55：621－628．

［22］Cao T，Tewari J，Strel kov S E．Molecular detection of Pl asmodiophor a br assicae，causal agent of clubroot of cr ucifers，in plant and soil［J］．Plant Dis，2007，91：60－87．

［23］Ito S，Mat hara T，Marund E，et al．Develop ment of a PCR－based assay f or the detection of Pl asmodiophor a brassicae in soil［J］．Jour nal of Phytopat hology，1999，147：83－88．

［24］Faggian R，Bul man S R，Lawrie A C，et al．Specific poly merase chain reaction pri mers f or the detection of Pl asmodiophora br assicae in soil and water［J］．Phytopat hology，1999，89：392－397．

［25］Manzanares－Dauleux M J，Divaret I，Bar on F，et al．Assessment of biological and molecular variability bet ween and wit hin field isolates of Pl asmodiophor a br assicae［J］．Plant Pat hology，2001，50：165－173．

［26］楊佩文，李家瑞，楊勤忠，等．根腫病菌核糖體基因ITS區(qū)段的克隆測(cè)序及其在檢測(cè)中的應(yīng)用［J］．云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，18（3）：228－233．

［27］尹全，宋君，劉勇，等．土壤根腫病菌休眠孢子PCR快速檢測(cè)方法的建立［J］．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2010，23（2）：390－392．

［28］馬淑青，黃云，王錚一，等．油菜根腫病菌形態(tài)及生物學(xué)特性研究［J］．四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，24（2）：161－165．

［29］Kole A P．So me observations on t he zoospores fro m t he zoosporangia of Plasmodiophor a br assicae Woron［J］．Tijdschr PL Ziekt，1955，61：159－162．

［30］李金萍，朱玉芹，李寶聚．十字花科蔬菜根腫病的傳播途徑［J］．中國(guó)蔬菜，2010（5）：21－22．

［31］Buczacki S T，Ockendon J B，F(xiàn)reeman G H．An analysis of some effects of light and soil temperature on cl ubroot disease［J］．Ann Appl Biol，1978，88（2）：229－238．

［32］Niwa R，Ku mei T，No mura Y，et al．Increase in soil p H due to Ca－rich organic matter application causes suppression of t he cl ubroot disease of cr ucifers［J］．Soil Biology and Biochemistry，2007，39（3）：778－785．

［33］Murakami H，Tsushi ma S，Kuroyanagi Y，et al．Reduction of resting spore density of Plasmodiophor a br assicae and clubr oot disease severity by li ming［J］．Soil Science and Plant Nutrition，2002，48（5）：685－691．

［34］戴玉華，楊蓮，李順德，等．調(diào)節(jié)土壤p H防治白菜根腫病技術(shù)探索［J］．中國(guó)植保導(dǎo)刊，2004，24（8）：20－22．

［35］李妍，謝學(xué)文，石延霞，等．防治白菜根腫病的藥劑篩選［J］．農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2010，12（1）：93－96．

［36］楊佩文，尚慧，董麗英，等．大白菜根腫病發(fā)病因素分析與防治技術(shù)［J］．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2009，22（3）：663－666．

［37］張日波．成都市十字花科根腫病調(diào)查及防治藥劑篩選［D］．雅安：四川農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010．

［38］孫道旺，楊家鶯，楊明英，等．75%達(dá)克寧防治白菜根腫病產(chǎn)量損失測(cè)定及殘留分析［J］．西南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2002，17（2）：189－191．

［39］Brabshaw J E，Gemell D J，Wilson R N．Transfer of resistance to clubroot（Pl asmodiophora br assicae）to Swedes（Br assica napus L．var．napobr assica Peter m）fro m B．r apa［J］．Ann Appl Biol，1997，130：337－348．

［40］Manzanares－Dauleux M J，Delour me R，Baron F，et al．Mapping of one major gene and of QTLs involved in resistance to clubroot in Br assica napus［J］．Theoretical and Applied Genetics，2000，101：5－6．

［41］孫保亞，沈向群，郭海風(fēng)，等．大白菜抗根腫病遺傳規(guī)律初探［J］．中國(guó)蔬菜，2005（6）：15－17．

［42］劉勇，黃小琴，柯紹英，等．四川主栽油菜品種根腫病抗性研究［J］．中國(guó)油料作物學(xué)報(bào)，2009，31（12）：90－93．

［43］司軍，李成瓊，宋洪元，等．結(jié)球甘藍(lán)對(duì)根腫病的抗性鑒定與評(píng)價(jià)［J］．西南大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，31（6）：26－30．

［44］胡靖鋒，吳麗艷，林良斌，等．用菌土接種法鑒定云南省主要十字花科作物對(duì)根腫病的抗性［J］．中國(guó)蔬菜，2010（14）：71－74．

［45］Mac Farlane I．Ger mination of resting spores of Plasmodiophor a br assicae［J］．Trans Br Mycol Soc，1970，55：97－112．

［46］Friberg H，Lagerlof J，Ramert B．Usef ulness of nonhost plants in managing Plasmodiophor a br assicae［J］．Plant Pat hol，2006，55：690－695．

［47］Narisawa K，Toku masu S，Hashiba T．Suppression of clubroot f or mation in Chinese cabbage by t he r oot endophytic f ungus，Heteroconiu m chaetospir a［J］．Plant Pat hology，1998，47（2）：206－210．

［48］Narisawa K，Ohki K T，Hashiba T．Suppression of clubroot and Verticillium yellows in Chinese cabbage in the field by the root endophytic f ungus，Heter oconiu m chaetospir a［J］．Plant Pathology，2000，49（1）：141－146．

［49］Arie T，Kobayashi Y，Okada G，et al．Control of soil borne clubroot disease of cr ucifer ous plants by epoxydon fro m Phoma glomer ata［J］．Plant Pat hology，1998，47（6）：743－748．

［50］Joo G J，Ki m Y M，Ki m J W，et al．Biocontrol of cabbage clubroot by t he organic fertilizer using Streptomyces sp．AC－3［J］．Korean Jour nal of Micr obiology and Biotechnology，2004，32（2）：172－178．

［51］Cheah L H，Veerakone S，Kent G．Biological control of clubroot on cauliflower with Trichoder ma and Streptomyces spp．［J］．New Zealand Plant Pr otection，2000，53：18－21．

［52］Lee S O，Choi G J，Choi Y H，et al．Isolation and characterization of endophytic actino mycetes fro m Chinese cabbage r oots as antagonists to Plasmodiophor a br assicae［J］．J Micr obiol Biotechnol，2008，18（11）：1741－1746．

［53］何月秋，熊國(guó)如，范成明．防治十字花科根腫病的生物制劑及其應(yīng)用：中國(guó)，200810058919．0［P］．2008－9－12．