丹參酮ⅡA的熒光分析法研究

林美玉，付 偉，龔曉斌，林錦明，王小燕

(1.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，上海 200433；2.第二軍醫(yī)大學(xué)研究生管理大隊(duì)學(xué)員14隊(duì)，上海 200433)

丹參酮ⅡA的熒光分析法研究

林美玉1，付 偉2，龔曉斌2，林錦明1，王小燕1

(1.第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心，上海 200433；2.第二軍醫(yī)大學(xué)研究生管理大隊(duì)學(xué)員14隊(duì)，上海 200433)

目的研究中藥材丹參有效成分丹參酮ⅡA的熒光光譜特性及其分析方法。方法分別研究濃度、酸度對(duì)丹參酮ⅡA熒光強(qiáng)度的影響，并研究丹參酮ⅡA的熒光穩(wěn)定性。結(jié)果丹參酮ⅡA在酸性(pH=2)環(huán)境具有很好的熒光特性，在紫外照射下熒光穩(wěn)定性良好。結(jié)論本方法簡(jiǎn)便、靈敏，能夠滿足藥物定性、定量分析的要求。

丹參；丹參酮ⅡA；熒光分析法

丹參酮ⅡA(tanshinone ⅡA)是中藥丹參中的菲醌類脂溶性成分之一，是丹參的主要有效成分，具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、改善心肌功能、降低血小板聚集等功效，常作為臨床治療冠心病的藥物[1～3]。其分子式為C19H18O3，相對(duì)分子質(zhì)量294.33，分子結(jié)構(gòu)式為：

圖1 TSSⅡA的分子結(jié)構(gòu)

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道[4～7]，用于檢測(cè)藥材中有效成分丹參酮ⅡA的方法有紫外分光光度法、薄層層析法、高效液相色譜法和薄層掃描法等。鑒于熒光分析法具有很高的靈敏度、選擇性和特異性以及高效、痕量，自動(dòng)化的特點(diǎn)，筆者嘗試研究丹參酮ⅡA在乙醇中的熒光光譜特性，并考察濃度、酸度等因素對(duì)丹參酮ⅡA熒光特性的影響，結(jié)果較為滿意，所顯示的信息為進(jìn)一步研究丹參酮ⅡA的提取和其它功能特效提供了理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1儀器 日立F-7000型熒光分光光度計(jì)；510型pH計(jì)(Cyber Scan Con)；微量進(jìn)樣器(上海求精玻璃儀器廠)。

1.2藥品與試劑 丹參酮ⅡA(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，用無(wú)水乙醇配成1×10-3mol/L 的丹參酮IIA儲(chǔ)備液。不同pH值的三酸(B-R)緩沖溶液的配制方法：在100 ml的三酸混合液(H3PO4-HAc-H3BO3，濃度均為0.04 mol/L)中，加入相應(yīng)體積的NaOH(0.2 mol/L)[1]。H3PO4、HAc、H3BO3、NaOH等試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

移取一定量的丹參酮ⅡA儲(chǔ)備液，以三酸緩沖溶液為稀釋液，配制成一系列不同濃度的溶液。將樣品液裝入石英比色皿中，置于F-7000型熒光分光光度計(jì)上，固定儀器的激發(fā)和發(fā)射狹縫均為5 nm，在所選的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)下，掃描熒光光譜(掃速2 400 nm/min)和三維譜圖(掃速60 000 nm/min)。

3 結(jié)果與討論

3.1丹參酮ⅡA的熒光光譜 按實(shí)驗(yàn)方法，以1×10-3mol/L 的丹參酮ⅡA溶液，進(jìn)行熒光激發(fā)、熒光發(fā)射和三維掃描。其激發(fā)光譜、發(fā)射光譜和三維光譜如圖2～5所示。

圖2 丹參酮ⅡA的激發(fā)光譜

圖3 丹參酮ⅡA的發(fā)射光譜

圖4 丹參酮ⅡA的三維等高線圖

圖5 丹參酮ⅡA的三維鳥(niǎo)瞰圖

丹參酮ⅡA分子是二萜醌類的四環(huán)化合物，具有共軛的芳香環(huán)體系。丹參酮ⅡA的游離π電子較容易被激發(fā)，從而產(chǎn)生熒光。由圖2～5可得，丹參酮ⅡA的最佳激發(fā)波長(zhǎng)(ex)和發(fā)射波長(zhǎng)(em)分別為330和410 nm。

為了探究外界條件對(duì)丹參酮ⅡA熒光的影響，分別考察了酸度，濃度，紫外光照時(shí)間對(duì)其熒光強(qiáng)度的影響。

3.2酸度的影響 為了考察不同酸度介質(zhì)對(duì)丹參酮ⅡA分子熒光光譜的影響，用B-R緩沖溶液分別配制一系列不同pH值的溶液丹參酮ⅡA溶液(1.0×10-4mol/L)，在最佳的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)下，測(cè)定它們的熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，在pH=2時(shí)熒光強(qiáng)度最大，在堿性條件下，熒光強(qiáng)度降低(圖6)。這可能是由于在pH=2時(shí)，丹參酮ⅡA呋喃環(huán)和羰基上的氧容易被質(zhì)子化，降低了呋喃環(huán)和羰基氧的電子云密度，致使分子的共軛π鍵的離域性增強(qiáng)，因而體系的熒光強(qiáng)度呈現(xiàn)最強(qiáng)。在堿性條件下呋喃環(huán)容易發(fā)生開(kāi)環(huán)反應(yīng)，導(dǎo)致體系共軛性有所減弱，熒光強(qiáng)度降低[8]。因此選擇測(cè)定丹參酮ⅡA的最佳pH值為2。

圖6 丹參酮IIA在不同pH值下的熒光發(fā)射光譜

3.3濃度的影響 丹參酮ⅡA標(biāo)準(zhǔn)溶液(1×10-3mol/L)用pH=2的三酸緩沖溶液配制成不同濃度的稀釋液，濃度分別為1.0×10-3mol/L ，1.0×10-4mol/L，1.0×10-5mol/L，1.0×10-6mol/L，1.0×10-7mol/L，在最佳的激發(fā)和發(fā)射波長(zhǎng)下，測(cè)定它們的熒光強(qiáng)度。結(jié)果表明，隨著溶液濃度的增大，熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)(圖7)。

圖7 不同濃度對(duì)熒光強(qiáng)度的影響

3.4穩(wěn)定性研究 為了考察時(shí)間因素對(duì)丹參酮ⅡA溶液的熒光強(qiáng)度的影響，在光路中紫外光照射下放置不同時(shí)間，測(cè)量熒光強(qiáng)度，并繪制熒光強(qiáng)度(IF)和時(shí)間(t)關(guān)系曲線(圖8)。結(jié)果表明，丹參酮ⅡA分子的熒光強(qiáng)度在所放置的時(shí)間內(nèi)幾乎沒(méi)有改變，穩(wěn)定性良好，能夠滿足實(shí)際分析要求。

圖8 丹參酮IIA 穩(wěn)定性曲線

4 結(jié)論

用熒光分析法研究了丹參酮ⅡA的光譜特性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參酮ⅡA經(jīng)三酸緩沖溶液稀釋后，在一定的酸度范圍內(nèi)有較強(qiáng)的熒光，且在pH=2時(shí)熒光強(qiáng)度最強(qiáng)；在一定的濃度范圍內(nèi)，丹參酮ⅡA隨著溶液濃度的增大，熒光強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)；在所放置的時(shí)間內(nèi)，丹參酮ⅡA熒光強(qiáng)度幾乎不發(fā)生變化，穩(wěn)定性良好，因此，可以滿足定性、定量分析要求。

[1] 曾令杰,梁 暉,陳 悅,等.丹參酮IIA與丹酚酸B在丹參藥材中的分布研究[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2006, (2):7.

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2010-06-08

[修回日期] 2010-07-08

DeterminationofTanshinoneIIAbyFluorescenceSpectrophotometry

LIN Mei-yu1, FU Wei2, GONG Xiao-bin2, LIN Jin-ming1, WANG Xiao-yan1

(1. Experiment Teaching Center, School of Pharmacy, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China; 2. Graduates Management Brigade, Second Military Medical University, Shanghai 200433, China)

ObjectiveTo study the fluorescence properties and analysis method of Tanshinone IIA.MethodsInfluencial factors including acidic media, the concentrations of substrate on the fluorescence intensity were studied. The stability of fluorescence of Tanshinone IIA was studied.ResultsTanshinone IIA had good fluorescent characteristic in pH 2, which had an emission of fluorescence steadily under ultra-vioket radiation.ConclusionThe method is simple, sensitive and could be suitable for the qualitative and quantitative analysis.

Tanshin; Tanshinone IIA ; Fluorescence Spectrophotometry

第二軍醫(yī)大學(xué)大學(xué)生創(chuàng)新能力培養(yǎng)基金資助項(xiàng)目的部分內(nèi)容(2009011).

林美玉(1982-)，女，碩士，助理實(shí)驗(yàn)師.E-mail:linmeiyu18@126.com.

王小燕.Tel:(021)81871340,E-mail:syjxzx325@126.com.

R917

A

1006-0111(2011)01-0038-03