鮑魚性腺多糖的體內(nèi)抗氧化活性

劉 娜， 朱 蓓 薇， 孫 黎 明， 劉 俊 榮

（1.大連工業(yè)大學(xué) 食品學(xué)院，遼寧 大連 116034；2.大連海洋大學(xué) 食品工程學(xué)院，遼寧 大連 116023）

0 引 言

鮑魚多糖是鮑魚重要的生理活性物質(zhì)之一。沈鳴［1］、陳倩 超［2］、許 東 暉［3］及 王 兵［4-5］等 研 究 發(fā)現(xiàn)，鮑魚多糖具有增強(qiáng)免疫力、抗腫瘤等作用。本課題組殷紅玲等［6］對鮑魚肉中多糖的提取工藝進(jìn)行了研究，李冬梅［7］、程婷婷［8-9］等研究了鮑魚臟器多糖的提取條件，李韜等［10］從鮑魚性腺中提取多糖并研究了其體外抗氧化活性，為鮑魚的綜合開發(fā)及深入研究奠定了理論基礎(chǔ)。本研究以鮑魚性腺為主要原料，采用酶促水解、乙醇醇沉等方法提取鮑魚性腺中的多糖并研究其體內(nèi)抗氧化活性，旨在為鮑魚性腺多糖類功能產(chǎn)品的開發(fā)提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 原料與試劑

皺紋盤鮑性腺，由大連獐子島漁業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供?？偪寡趸芰Γ═-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、單胺氧化酶（MAO）、過氧化氫酶（CAT）試劑盒，均由南京建成生物工程研究所提供。

昆明種小白鼠，30只，雌性，18～22g；SD 大鼠42只，雌性，180～220g；購自大連醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心。

1.2 試驗方法

1.2.1 鮑魚性腺多糖的提取

以新鮮鮑魚性腺為原料，加入3倍體積的水煮沸，用6mol／L 的NaOH 調(diào)pH 值為10.0，加入2.0%的堿性蛋白酶，45 ℃酶解3h后迅速升溫至90 ℃維持10 min滅酶，冷卻至室溫調(diào)pH為中性，離心10min（4 000r／min），取上清液即得多糖水溶液，然后加入3倍體積95%的乙醇醇沉12h，離心取沉淀。復(fù)溶后離心去雜質(zhì)。上清液冷凍干燥待用，即鮑魚性腺多糖（CAGP）。CAPG 中含糖37.1%、蛋白19.7%、硫酸根19.31%、糖醛酸14.69%。

1.2.2 CAGP對正常小鼠抗氧化能力的影響

30只昆明種小鼠隨機(jī)分成3組，生理鹽水對照組（NS組）、陽性對照組（VC1g／kg，用前新鮮配制）、CAGP 組（200 mg／kg）。連 續(xù) 灌 胃 給 藥15d。末次給藥后摘眼球取血制備血清，頸椎脫臼法處死小鼠，取肝臟和腦，檢測血清和肝臟MDA、肝臟T-AOC和CAT 及腦組織MAO。

1.2.3 CAGP對高脂血癥大鼠抗氧化損傷能力的影響

采用自行配制的高脂飲食（豬油15%+膽固醇6%+膽鹽3號2%+丙基硫氧嘧啶0.2%）給雌性SD 大鼠灌胃。每只大鼠灌胃2mL，連續(xù)灌胃20d。根據(jù)血清甘油三酯含量，取24 只雌性SD 大鼠，隨機(jī)分為3 組，陽性對照組（血脂康200mg／kg）、CAGP組（200 mg／kg）及陰性對照組（生理鹽水），另取同批次未飼喂高脂飲食大鼠8只作為正常對照組（生理鹽水）。各組腹腔注射連續(xù)給藥40d。

于第37天，除正常對照組外，其他3組大鼠均腹腔注射四氧嘧啶，200mg／kg。72h后，用乙醚麻醉，腹腔主動脈取血，檢測血清MDA 與SOD 以及肝臟的T-AOC。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)以（平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差）表示。采用SPSS 12.0統(tǒng)計學(xué)軟件對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（One-way AVOVA），P＜0.05 為有統(tǒng)計學(xué)差異，P＜0.01表示差異極其顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 CAGP對正常小鼠抗氧化能力的影響

2.1.1 血清及肝組織中的MDA 含量

丙二醛是氧自由基損傷組織或細(xì)胞導(dǎo)致脂質(zhì)過氧化的代謝產(chǎn)物，因此丙二醛濃度越低，脂質(zhì)過氧化程度越低，機(jī)體抗氧化能力就越強(qiáng)。由表1可以看出，多糖組和VC組血清和肝組織中的丙二醛濃度均明顯低于NS組（P＜0.01）。上述結(jié)果表明，CAGP 可有效降低血清及肝組織中MDA 的形成，減少細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化。

表1 CAGP對正常小鼠抗氧化能力的影響Tab.1 The effect of CAGP on the antioxidant capability of normal mice

2.1.2 腦組織中的MAO 活力

腦組織勻漿中單胺氧化酶數(shù)據(jù)分析如表1所示。MAO 是催化芳香族、脂肪族單胺類氧化脫氨基反應(yīng)的酶，主要是調(diào)節(jié)單胺類遞質(zhì)的含量。隨著年齡的增長，體內(nèi)MAO 活性逐漸增強(qiáng)，繼而氧自由基生成增多，促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)老化［12］。如表1 所示，多糖組的MAO 活力明顯低于NS 組（P＜0.01），證明CAGP 可有效降低腦組織中單胺氧化酶的活力，具有抗氧化活性。

2.1.3 肝臟T-AOC

體內(nèi)具有還原能力的抗氧化物質(zhì)可將Fe3+還原成Fe2+，后者與菲啉類物質(zhì)形成穩(wěn)定的絡(luò)合物，其含量可反映出機(jī)體總抗氧化能力的高低。如表1所示，CAGP 組及Vc組的T-AOC 較NS組顯著增強(qiáng)。

2.1.4 肝組織中CAT 活力

過氧化氫酶是一種酶類清除劑，是以鐵卟啉為輔基的結(jié)合酶。它可促使H2O2分解為分子氧和水，清除體內(nèi)的過氧化氫，從而使細(xì)胞免于遭受H2O2的毒害，是生物防御體系的關(guān)鍵酶之一。如表1所示，多糖組中CAT 活力明顯高于NS組和陽性對照組，表明CAGP可顯著提高體內(nèi)CAT 活力。

2.2 CAGP對高脂血癥大鼠抗氧化損傷能力的影響

2.2.1 血清中SOD 活力

機(jī)體代謝過程中會產(chǎn)生各種自由基，過量的自由基可造成細(xì)胞和組織損傷。生物進(jìn)化過程中，為消除過多自由基，機(jī)體已經(jīng)產(chǎn)生了一套完整而精細(xì)的防護(hù)體系。首要防御體系為生物體內(nèi)的各種抗氧化酶，例如SOD，其活力的高低可以表征機(jī)體抗氧化損傷能力的強(qiáng)弱。如表2所示，陰性對照組血清SOD 活性明顯低于正常對照組（P＜0.01），說明四氧嘧啶可明顯降低機(jī)體抗氧化酶的活力。CAGP 組的SOD 活性明顯高于陰性及陽性對照組（P＜0.01），提示CAGP對氧化損傷具有一定的防御作用。

表2 CAGP對高脂血癥大鼠體內(nèi)抗氧化能力的影響Tab.2 Protective effect of CAGP against oxidative damage in hyperlipidemia rats

2.2.2 血清中MDA 含量

由表2可以看出陰性對照組血清MDA 濃度明顯高于正常對照組（P＜0.01），說明四氧嘧啶造成大鼠氧化損傷，產(chǎn)生大量脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物。CAGP組MDA 濃度明顯低于陰性對照組（P＜0.01），而與正常對照組的濃度接近。這說明CAGP可抵御四氧嘧啶造成的氧化損傷。

2.2.3 血清T-AOC

如表2 所示，陰性對照組T-AOC 明顯低于正常對照組（P＜0.01），說明四氧嘧啶造成大鼠T-AOC 顯著降低。CAGP 組的T-AOC 明顯高于陰性及陽性對照組（P＜0.01），表明，CAGP還可以提高氧化損傷大鼠的T-AOC，從而抵御氧化劑造成的氧化損傷。

3 結(jié) 論

研究結(jié)果顯示，CAGP 可以顯著提高正常小鼠肝組織CAT 活力及T-AOC，降低其血清及肝臟MDA 含量及腦組織MAO 活力。此外，CAGP還可以顯著降低四氧嘧啶致高脂大鼠的氧化損傷程度，可提高其血清SOD 活力及肝臟T-AOC，并降低其血清MDA 含量。因此，CAGP 具有較強(qiáng)的體內(nèi)抗氧化作用。

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