新疆地區(qū)牛新孢子蟲病血清抗體檢測及結(jié)果分析

劉小蘭 ，張 軍 ，張 玲，季新成

（1.新疆出入境檢驗(yàn)檢疫局，新疆烏魯木齊 830063；2.哈密市伊吾縣獸醫(yī)站，新疆哈密 830000）

新孢子蟲病是由犬新孢子蟲（Neospora Caninum）寄生于牛、羊、犬等多種動物體內(nèi)引起的一種原蟲病。該病可垂直傳播，懷孕母?？梢詫⑿骆咦酉x經(jīng)胎盤傳染給子代乳牛，子代牛隨后的妊娠過程中，反復(fù)發(fā)生感染[1-2]。該病除可造成流產(chǎn)和產(chǎn)死胎、弱胎、木乃伊胎等直接的經(jīng)濟(jì)損失外，還會造成產(chǎn)乳量下降和繁殖能力降低等間接的經(jīng)濟(jì)損失[3]，已引起各國學(xué)者的廣泛關(guān)注。

為進(jìn)一步了解新疆地區(qū)牛新孢子蟲病的流行情況，本實(shí)驗(yàn)采用瑞典Svanova公司生產(chǎn)的N.Caninum抗體檢測試劑盒對采自新疆6個(gè)地區(qū)共327份牛血清進(jìn)行N.caninum抗體檢測，并且有代表性選擇20頭牛進(jìn)行了5次連續(xù)采樣檢測，對血清抗體消長情況進(jìn)行了分析。

1 材料與方法

1.1 被檢血清 被檢血清采自新疆6個(gè)不同地區(qū)和不同年齡的牛群，共采集血清327份。并根據(jù)檢測結(jié)果對伊犁、哈密、昌吉、奇臺4個(gè)地區(qū)的33頭牛連續(xù)進(jìn)行5次血清采集，每次間隔30~40天。所有血清分離后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 試劑及儀器 瑞典Svanova公司生產(chǎn)的N.caninum Antiboby Iscom ELISA Test Kit，批號為P06137。EXL800酶標(biāo)儀，eppendorf不同量程加樣器。

1.3 操作方法 按試劑盒說明書進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作和結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果與地區(qū)分布情況

通過對采自新疆6個(gè)地區(qū)（牛群）的327頭牛血清進(jìn)行新孢子蟲抗體檢測，共檢出陽性血清80份，各地區(qū)分布不一，最高感染率達(dá)47.2%，最低感染率為6.7%，平均感染率為24.5%，且在流產(chǎn)牛群中陽性率明顯偏高，見表1。

表1 被檢血清分布及檢測結(jié)果

2.2 新孢子蟲抗體陽性與牛年齡的關(guān)系

對伊犁、哈密、昌吉3個(gè)地區(qū)132頭年齡清楚的牛的檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，由檢測結(jié)果可以看出，各年齡的牛均可感染牛新孢子蟲，同一地區(qū)不同年齡階段的?？贵w陽性率差異明顯，且在年齡較大的牛群中較高，見表2。

表2 不同地區(qū)不同年齡牛新孢子蟲血清抗體結(jié)果

2.3 不同時(shí)期新孢子蟲病血清抗體水平消長情況

從2.1檢測結(jié)果中有代表性的選出20頭牛，每次間隔30~40天進(jìn)行了5次連續(xù)采樣檢測，見表3。

表3 同一牛不同時(shí)期抗體水平消長情況

從以上結(jié)果顯示，編號為 3，4，6，14，15，16，17，18，23，24，25，27，31，32，33 的 15 份血清抗體在檢測的時(shí)間段內(nèi)一直呈陽性。編號為 1，2，5，7，8，10，11，12，20，21，22，30 的 12 份血清抗體第一次或第二次檢測結(jié)果為陽性，其余檢測結(jié)果均為陰性。編號為13的血清抗體在第三次檢測結(jié)果由陰性轉(zhuǎn)為陽性。編號為29的血清抗體在第五次檢測結(jié)果由轉(zhuǎn)為陰性。9，19，26，28號樣品出現(xiàn)不規(guī)則的抗體轉(zhuǎn)變，是否由于采樣或?qū)嶒?yàn)操作所致，還有待于分析。跟蹤調(diào)查結(jié)果顯示，血清抗體陽性至少可以持續(xù)半年以上。

3 討論

新孢子蟲病呈世界性廣泛分布，目前已有70多個(gè)國家和地區(qū)有該病的發(fā)生和流行的報(bào)道，Sadrebazzaz等[4]采用間接熒光抗體試驗(yàn)（IFA）對伊朗馬什哈德地區(qū)的810份血清進(jìn)行了新孢子蟲檢測，結(jié)果15.18%的血清為陽性。Osawa[5]等采用ELISA對葡萄牙不同地區(qū)879頭奶牛和肉牛樣品進(jìn)行了檢測，血清抗體陽性率為29.8%。Koiwai[6]對日本18個(gè)地區(qū)的2 420份奶牛血清采用IFA進(jìn)行了檢測，血清抗體陽性率為5.8%。我國關(guān)于該病檢測的報(bào)道也很多，于晉海等[7]對來自國內(nèi)10個(gè)?。ㄊ小⒆灾螀^(qū)）的262份乳牛、10份肉牛和40份水牛血清進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，乳牛新孢子蟲的抗體陽性率為17.2%。丁德等[8]通過對吉林省4個(gè)地區(qū)153份黃牛血清樣本進(jìn)行了新孢子蟲病的流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果梅河、舒蘭、琿春、雙陽地區(qū)黃牛的新孢子蟲陽性率分別為45.5%，7.14%，10.53%和16.67%。沈莉萍等[9]對上海地區(qū)41個(gè)奶牛場1 239份奶牛血清中有63份抗體陽性，陽性率為5.08%，各場陽性率變幅較大（0~44.23%）。Xia[10]等對廣東地區(qū)5個(gè)奶牛場的370份血清進(jìn)行用ELISA法進(jìn)行了檢測，平均陽性率為18.9%，在流產(chǎn)牛群中的陽性率（22.7%）比非流產(chǎn)牛群陽性率（16.3%）偏高，但差異不顯著。本研究對采自新疆6個(gè)地區(qū)（牛群）的327頭牛血清進(jìn)行新孢子蟲抗體檢測，共檢出陽性血清83份，最高感染率達(dá)47.2%，最低感染率為6.7%，平均感染率為24.5%，且在流產(chǎn)牛群中陽性率明顯偏高（38.3%）。各地區(qū)陽性率差異較大。為了解血清抗體在體內(nèi)消漲情況，對20頭牛每次間隔30~40天進(jìn)行5次連續(xù)采樣檢測，結(jié)果表明，血清抗體陽性持續(xù)時(shí)間至少半年以上。

于晉海等[7]對212頭有年齡資料的牛血清檢測，結(jié)果表明血清抗體陽性率在不同年齡段的分布不同，乳牛在1歲、3歲和7歲時(shí)有3個(gè)波峰，7歲以后陽性率下降，其中以7歲乳牛為最多，陽性率為36.4%，各個(gè)年齡段乳牛的抗體陽性率差異不顯著。Wouda等[11]的研究結(jié)果顯示，大多數(shù)牛群各個(gè)年齡段的血清陽性率基本相近。Xia[10]等的結(jié)果也表明該病的血清抗體陽性率與年齡沒有顯著的聯(lián)系。而Jensen[12]則認(rèn)為，血清抗體陽性率隨著年齡的增加而增加。本研究對有年齡記錄的132份牛血清樣本按不同地區(qū)、年齡分別進(jìn)行比較統(tǒng)計(jì)，結(jié)果表明，昌吉地區(qū)12月齡以下牛的血清抗體陽性率為35%，12~24月齡為51.9%，伊犁和哈密地區(qū)12月齡以下，未發(fā)現(xiàn)血清抗體陽性牛，各年齡牛差異顯著，且與該地區(qū)整體陽性率呈正相關(guān)。這些12月齡以下牛是因先天感染或母原抗體所致，還是來自后天感染，因我們所采集的樣品數(shù)量和具體背景資料有限，尚需進(jìn)一步研究。

新疆是我國重要的畜牧業(yè)生產(chǎn)基地，養(yǎng)牛業(yè)又是主要支柱產(chǎn)業(yè)，近年來，在新疆地區(qū)的很多奶牛場每年有近20%的妊娠母牛發(fā)生不明原因的流產(chǎn)，經(jīng)檢測，布氏桿菌等感染性流產(chǎn)疫病的檢測結(jié)果均為陰性，這些流產(chǎn)病因很可能是由新孢子蟲病所致，在新疆地區(qū)對該病的防控還有待加強(qiáng)。近年來，有大批量奶?；蜻z傳物質(zhì)從國外進(jìn)入中國市場，在改良品種的同時(shí)，也進(jìn)一步增加了疫病的傳入風(fēng)險(xiǎn)，目前，進(jìn)口奶牛及遺傳物質(zhì)尚沒有對新孢子蟲病的檢測要求，進(jìn)一步增加了該病的傳入風(fēng)險(xiǎn)，鑒于該病的危害性，建議口岸加強(qiáng)對該病的檢驗(yàn)檢疫。

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