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    苗藥觀音草正丁醇萃取工藝的研究

    2011-11-15 05:06:26羅海明
    中國民族民間醫(yī)藥 2011年20期
    關(guān)鍵詞:苗藥薯蕷觀音

    劉 亮 杜 江 姚 麗 羅海明

    1.貴州省遵義醫(yī)藥高等??茖W校,貴州 遵義 563002;2.貴州省貴陽中醫(yī)學院,貴州 貴陽 550002

    苗藥觀音草正丁醇萃取工藝的研究

    劉 亮1杜 江2姚 麗1羅海明1

    1.貴州省遵義醫(yī)藥高等??茖W校,貴州 遵義 563002;2.貴州省貴陽中醫(yī)學院,貴州 貴陽 550002

    目的:優(yōu)選觀音草總皂苷的正丁醇萃取工藝。方法:采用正交試驗法,以提取液中總皂苷的含量為考察指標。結(jié)果:試驗設計三因素中正丁醇用量及萃取次數(shù)有顯著影響,最佳的萃取工藝為:用30倍量的正丁醇萃取5次,每次振搖時間30s。結(jié)論:本法操作簡便,經(jīng)濟、可行。

    觀音草;正丁醇;萃取工藝

    觀音草Reineckia carnea(Andr.)Kunth為百合科植物吉祥草的帶根全草,又名結(jié)實蘭,竹葉草,佛頂珠,小青膽,是一味著名的苗藥。苗醫(yī)藥理論認為其藥性為性冷,質(zhì)征為氣微味甜,入熱經(jīng),走肺、肝二架,表、中、里三關(guān),治療肺熱咳嗽,跌打損傷,瘡毒等。本試驗旨在為正丁醇萃取法提取觀音草中總皂苷在工業(yè)生產(chǎn)中的應用積累參數(shù),為觀音草的進一步開發(fā)、利用提供試驗數(shù)據(jù)。

    1 儀器與試藥

    UV75-18可見分光光度計 (天津市拓普儀器有限公司);DHG 90AOA型電熱恒溫鼓風干燥箱 (寧波江南儀器廠);Senco R系列旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 (上海申生科技有限公司);FY130型藥物粉碎機 (天津市泰斯特儀器有限公司);DKS-26型電熱恒溫水浴鍋 (寧波江南儀器廠)。

    薯蕷皂苷對照品購于上海華壹生物科技有限公司 (批號:19057-60-4);觀音草藥材采集于貴州遵義,經(jīng)遵義醫(yī)藥高等??茖W校張學愈副教授鑒定為百合科植物觀音草Reineckia carnea(Andr.)Kunth;其它試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 正交試驗設計

    本試驗以觀音草中總皂苷的含量為指標,選擇正丁醇用量、萃取次數(shù)、振搖時間三因素為考察因素[1~3],采用L9(34)正交設計表進行試驗。正交因素水平表見表1。

    表1 正交試驗因素水平表

    2.2 供試品溶液的制備

    準確稱取觀音草藥材粗粉5克,共2份,置索氏提取器中,在78℃水浴中,用20倍甲醇回流提取4h,得到兩份提取液。分別將兩份提取液回收甲醇后加入蒸餾水溶解,并轉(zhuǎn)移至100mL的容量瓶中加蒸餾水稀釋至刻度,搖勻,合并兩份水溶液。準確吸取10mL水溶液于分液漏斗中,用石油醚分6次萃取 (15,10,10,10,10,10mL),棄去石油醚液,水液再用水飽和正丁醇按照正交表L9(34)安排進行萃取,正丁醇萃取液用正丁醇飽和的水20mL洗滌,減壓回收正丁醇至干,殘渣用甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中,作為供試品溶液[4]。

    2.3 對照品溶液的制備

    精密稱取薯蕷皂苷對照品1.2mg,置于10mL容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度,搖勻,作為對照品溶液。

    2.4 標準曲線的制備

    分別精密移取薯蕷皂苷對照品溶液0.0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0和1.2mL置于10mL具塞試管內(nèi),揮干甲醇,再分別加入5%的香草醛-冰醋酸溶液0.2mL和高氯酸0.8mL,搖勻,密塞,60℃水浴顯色15min,取出后立即用冰水冷卻5min,再加入5mL冰醋酸稀釋,搖勻,靜置10min,于460nm處測定其吸光度[5]。以吸光度 (A)為縱坐標,質(zhì)量濃度 (C)為橫坐標進行線性回歸。結(jié)果表明,薯蕷皂苷在4~24μg/mL與吸光度呈良好的線性關(guān)系?;貧w方程為A=0.019121C+0.006133,r=0.9995。標準曲線見圖1。

    圖1 標準曲線

    2.5 供試品溶液的測定

    分別精密吸取供試品溶液0.2mL,按2.4項下的操作方法顯色,于460nm處作含量測定,試驗設計及數(shù)據(jù)處理結(jié)果見表2,方差分析見表3。

    2.6 結(jié)果與方差分析

    由表2分析可知最佳的萃取工藝為A3B3C3。由表3方差分析可知,各因素對總皂苷得率的影響大小順序為A>B>C,結(jié)果顯示正丁醇用量及萃取次數(shù)對總皂苷的得率有顯著影響,萃取時間無顯著性。因此,考慮實際情況,提取工藝調(diào)整為A3B3C1,即用30倍量 (與藥材的比例)的正丁醇萃取5次,每次振搖時間30s。

    表2 L9(34)正交試驗結(jié)果

    3 討論

    由于皂苷類化合物在含水正丁醇中具有較大的溶解度,所以本試驗用水飽和的正丁醇作為純化提取皂苷的溶劑。正丁醇萃取法在工業(yè)生產(chǎn)中應用廣泛,與大孔樹脂吸附法比較,具有操作簡單、用時短、工藝成熟等優(yōu)點。本研究結(jié)果表明正丁醇的用量及萃取次數(shù)對總皂苷的含量有顯著性影響。故試驗的最佳工藝為用30倍量(與藥材的比例)的正丁醇萃取5次,每次振搖時間30s。

    表3 方差分析表

    [1]劉越,張旋,賈璞,等.珠子參薄層色譜鑒別方法的研究[J].西北藥學雜志,2010,25(3):182-184.

    [2]夏勇兵,李林珍,馬琳,等.響鈴草抗炎鎮(zhèn)痛活性部位的確定及其質(zhì)量控制方法的建立[J].藥物分析雜志,2010,30(9):1599-1603.

    [3]李少亮.天然甾體皂苷的提取分離現(xiàn)狀[J].遼寧化工,2010,39(4):428-430.

    [4]丁寧,杜江,賈憲生.黃褐毛忍冬總皂甙的含量測定[J].貴陽中醫(yī)學院學報,2001,23(2):39-40.

    [5]劉亮,杜江,潘爐臺,等.苗藥觀音草中總皂苷的含量測定[J].中國民族民間醫(yī)藥,2011,20(4):2-3.

    R284.2

    A

    1007-8517(2011)20-0005-02

    貴州省教育廳自然科學研究項目,黔教科 (2007)074號。

    劉亮 (1981~),男,漢,碩士研究生,主要從事中藥、民族藥化學成分及質(zhì)量研究。

    2011.09.20)

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