牛蒡子水解后牛蒡苷元的含量測定△

侯薔，竇德強，康廷國

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116000）

牛蒡子水解后牛蒡苷元的含量測定△

侯薔，竇德強*，康廷國

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧 大連 116000）

目的：建立牛蒡子藥材水解后藥材中牛蒡苷元的含量測定方法。方法：采用HPLC，以牛蒡苷元的含量測定為指標(biāo)，測定牛蒡子藥材水解后藥材中牛蒡苷元的含量。Agilent1100液相色譜系統(tǒng)四元泵，色譜柱：Phenomsil PC-8025，（4.6mm×250 mm，5μm），流動相：甲醇－水（50∶55）；檢測波長：280 nm。結(jié)果：牛蒡苷元的線性方程Y＝905.74 X－90.113，r＝0.999 3，線性范圍0.81～4.86μg；平均回收率為100.09%，RSD＝2.244%。結(jié)論：采用HPLC含量測定的方法，精密度、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性皆良好，方法簡便、易行，可作為牛蒡苷元含量的測定方法。

牛蒡苷元；HPLC；含量測定

牛蒡子含有多種生物活性成分，具有抗腫瘤、抗糖尿病、增強免疫系統(tǒng)活性等多種藥理作用。其中以木脂素類化合物為主，主要成分是牛蒡苷（含量為5%左右）與牛蒡苷元（含量為0.5%左右）［1］。本文根據(jù)專利——一種牛蒡子苷元的制備方法［2］，將牛蒡子藥材水解，將含量較多的牛蒡苷脫糖轉(zhuǎn)化為牛蒡苷元，將牛蒡苷元的含量提高到3%左右，對轉(zhuǎn)化后的藥材進行牛蒡苷元的含量測定，該法簡便，重現(xiàn)性好，可用作牛蒡子水解轉(zhuǎn)化的定量分析，為其質(zhì)量控制提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent1100 series高效液相色譜儀；FA-1004電子天平（上海精科天平廠）；KQ-250DE型數(shù)控超聲微波清洗器。

1.2 試藥

牛蒡子藥材分別購自沈陽、成都、本溪、吉林，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)康廷國教授鑒定為菊科植物牛蒡的成熟果實。

牛蒡苷元（自制，純度為99.698%）。色譜甲醇（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，批號：20091002），水為三級水。

2 方法與結(jié)果

2.1 牛蒡苷元對照品溶液制備

精密稱取牛蒡苷元對照品適量，用甲醇制成每1 mL含0.324 mg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液制備

2.2.1 供試品溶液提取時間確定 精密稱取已水解干燥后的粗粉（過60目篩）各0.5 g，分別加入40 mL甲醇，分別超聲20，30，40 min（40 MHz），將提取后溶液定容至50 mL量瓶，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，分別進HPLC以測定含量。得到牛蒡苷元含量分別為3.07%，3.10%，3.11%。30 min與40 min無明顯差別，故將提取時間定為30 min。

2.2.2 供試品溶液制備 精密稱取不同地區(qū)的牛蒡子，按照專利，將牛蒡子水解，取水解干燥后的粗粉（過60目篩），各0.5 g，分別加入40 mL甲醇，超聲30 min（40 MHz），將提取后溶液定容至50 mL量瓶，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得，待用。

2.3 色譜條件、色譜行為與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱：Phenomsil PC-8025（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相：甲醇－水（50∶55）；檢測波長：280 nm；流速：1.0 mL·min－1，柱溫：30℃。分別按照供試品及對照品溶液制備項下方法制備供試品及對照品溶液，按上述色譜條件，各進樣10μL，根據(jù)色譜行為確定牛蒡苷元的峰。按牛蒡苷元峰計算，柱理論塔板數(shù)大于1 500。

2.4 線性關(guān)系考察

精密吸取牛蒡苷元對照品溶液（0.324 mg·mL－1）各2.5，5，7.5，10，12.5，15μL，分別注入高效液相色譜儀中，按上述色譜條件進樣，測定峰面積。以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制牛蒡苷元的標(biāo)準(zhǔn)曲線。牛蒡苷元的回歸方程為：Y＝905.74X－90.113，r＝0.999 3，線性范圍 0.81～4.86μg。

2.5 精密度試驗

精密吸取同一份供試品溶液，連續(xù)進樣5次，每次10μL，牛蒡苷元的平均含量為3.22%，RSD＝1.15%，說明精密度試驗符合有關(guān)規(guī)定。

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取本溪牛蒡子水解粗粉各0.5 g，按樣品測定方法，進行6次平行試驗，結(jié)果牛蒡苷元平均含量為3.18%，RSD＝1.24%，說明重復(fù)性試驗符合有關(guān)規(guī)定。

2.7 穩(wěn)定性試驗

在室溫條件下，精密吸取同一樣品溶液，按樣品測定方法在0，1，2，4，6 h進樣，測定峰面積，牛蒡苷元的RSD＝2.67%，說明樣品溶液在6 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗

精密稱取已知含量的樣品（牛蒡苷元含量為3.053%）各6份，分別精密加入牛蒡苷元對照品，按樣品測定方法進行測定，計算回收率，結(jié)果見表1。

表1 牛蒡苷元回收率試驗

2.9 樣品測定

吸取制備好的供試品溶液，進樣，按上述色譜條件測定，以標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法計算水解后牛蒡苷元的含量，結(jié)果沈陽、本溪、成都、吉林4個產(chǎn)地的牛蒡苷元含量分別為3.36%，3.12%，2.57%，3.11%。色譜圖見圖1～3。

圖1 牛蒡子藥材HPLC圖

圖2 牛蒡子藥材水解后HPLC圖

圖3 牛蒡苷元對照品HPLC圖

3 討論

以甲醇為溶劑，分別超聲處理20，30，40 min，然后分別測定各供試溶液中牛蒡苷元的含量，結(jié)果40 min的提取量較30 min無差別，故將提取時間定為30 min。

本文采用專利轉(zhuǎn)化牛蒡苷元，將牛蒡苷元的含量在生藥材中提高到3%左右，通過HPLC對水解后牛蒡苷元含量進行測定，方法重現(xiàn)性好，回收率高，準(zhǔn)確度高。

［1］米靖宇，汪志超，宋純清.高效液相色譜法測定不同采購地牛蒡子中牛蒡子苷和苷元的含量［J］.時珍國醫(yī)國藥，2004，15（11）：737-739.

［2］遼寧中醫(yī)藥大學(xué).一種牛蒡子苷元的制備方法：中國，200910220557.3（申請?zhí)枺跴］.審核中.

Determ ination of Arctigenin Hydrolyzed from Arctii Fructus

HOU Qiang，DOU De-qiang，KANG Ting-guo
（College of Pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116000，China）

Objective：To establish a HPLC method for determination of the content of arctigenin hydrolyzed from Arctii Fructus.Methods：The contentof arctigenin was determined by HPLC.The conditions for HPLC：Phenomsil PC－8025 column，eluting with methano1－water，detection wavelength at280 nm.Results：The linear equation wasY＝905.74X－90.113，r＝0.999 3.The average recovery was 100.09%，RSD ＝2.24%.Conclusion：The HPLC method is rapid and accurate and can be used for the quality control of the hydrolysis of Arctii Fructus.

Arctigenin；HPLC；Content determination

國家重大新藥創(chuàng)制計劃（2009ZX09103-423），遼寧省教育廳優(yōu)秀人才支持計劃——中藥及天然藥物活性成分及新藥開發(fā)研究（2008RC34）

*竇德強，E-mail：doudeqiang2003＠yahoo.com.cn

2010-04-01）