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    念慈庵川貝枇杷膏免疫功能的研究

    2011-11-01 03:57:00周華俊
    關(guān)鍵詞:廓清川貝環(huán)磷酰胺

    周華俊

    念慈庵川貝枇杷膏由川貝、枇杷葉、沙參、茯神、橘紅等十幾味中藥材提取制成的中成藥,主要用于止咳化痰,降氣平喘。有文獻(xiàn)報(bào)道其部分藥理學(xué)研究[1]。由于其藥材的組成可能有免疫的功效,目前未見(jiàn)該方面的研究報(bào)道。筆者對(duì)此進(jìn)行了研究,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠,雌雄各半,體重18~22 g,SPF級(jí),購(gòu)自中山大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物合格證號(hào):粵檢證字SCXK(粵)-2009-0070。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物與試劑 念慈庵川貝枇杷膏為深圳東方力藥業(yè)有限公司生產(chǎn),批號(hào):20091128;金水寶膠囊為金水寶膠囊由江西金水寶制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):091107。環(huán)磷酰胺:上海華聯(lián)制藥有限公司生產(chǎn),批號(hào):20090821。實(shí)驗(yàn)前用0.9%氯化鈉注射液配成濃度為5 mg/ml的溶液。印度墨汁:北京四中化工廠,批號(hào)900501,用時(shí)用0.9%氯化鈉注射液稀釋10倍。雞紅細(xì)胞懸液:無(wú)菌條件下雞翼下靜脈采血,放入相當(dāng)于雞血體積5倍的Alsever’s液,4℃保存。臨用時(shí)用0.9%氯化鈉注射液反復(fù)洗滌,離心3次,以恒定的血細(xì)胞比容數(shù)用0.9%氯化鈉注射液配成5%雞紅細(xì)胞混懸液(Alsever’s液的制備:葡萄糖 2.05 g,檸檬酸鈉 0.80 g,檸檬酸0.05 g,氯化鈉0.42 g,重蒸餾水加至1.0 L,高壓滅菌,4℃保存)。豚鼠血清:用心臟采血的方法取豚鼠全血,然后離心得到血清。其余試劑為分析純?cè)噭?/p>

    1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì):北京普析通用儀器有限責(zé)任公司,型號(hào):TU-1901。

    1.2 方法

    1.2.1 炭粒廓清法[2]取昆明種小鼠,隨機(jī)分為正常對(duì)照組、環(huán)磷酰胺造模組、受試藥物低、中、高劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組,每組10只,然后各組小鼠按0.1 ml/10 g體重灌胃給藥,1次/d,共7 d,其中正常對(duì)照組和環(huán)磷酰胺造模組給等體積蒸餾水。除正常對(duì)照組外,其余5組均于給藥的第3~5天腹腔注射環(huán)磷酰胺50 mg/kg,造成免疫功能低下模型。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水10 h,末次給藥后1 h,各小鼠尾靜脈注射印度墨汁0.1 ml/10 g體重,注射后第2 min(T1)、12 min(T2)分別從眼眶靜脈取血20 μl,溶于2 ml的0.1%碳酸鈉溶液中,搖勻,用雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于680 nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,最后將小鼠放血處死,取肝脾稱其質(zhì)量,計(jì)算廓清指數(shù)、校正廓清指數(shù)。

    1.2.2 血清溶血素法 小鼠分組,給藥同實(shí)驗(yàn)2.1在試驗(yàn)第1 d每鼠腹腔注射5%雞紅細(xì)胞懸液0.2 ml。末次給藥后1 h,摘取動(dòng)物眼球取血,3000r/min離心10 min,分離血清,用0.9%氯化鈉注射液將血清稀釋100倍。取稀釋血清1 ml,與5%雞紅細(xì)胞懸液0.5 ml、10%豚鼠血清(補(bǔ)體)0.5 ml混勻,在37℃水浴溫育30 min,然后置0℃冰箱中中止反應(yīng),將上述液體3000r/min離心10 min,取上清液,用雙光束紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)于540 nm處測(cè)定OD值,另設(shè)不加小鼠血清的空白對(duì)照管調(diào)零。以樣品的OD值代表血清溶血素水平。

    廓清指數(shù)K=(logA1-logA2)/(T2-T1),式中A1、A2分別為第2 min、12 min的OD值。

    1.3 2,4-二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)試驗(yàn) 小鼠分組,給藥同實(shí)驗(yàn)2.1隨機(jī)分為免疫正常+DTH陽(yáng)性組、Cy+DTH陰性組、Cy+DTH陽(yáng)性組、Cy+DTH陽(yáng)性+受試藥物低劑量組、Cy+DTH陽(yáng)性+受試藥物中劑量組、Cy+DTH陽(yáng)性+受試藥物低劑量組、Cy+DTH陽(yáng)性+金水寶組。實(shí)驗(yàn)前小鼠禁食不禁水10 h,然后各組小鼠按0.1 ml/10 g體重灌胃給藥,1次/d,共7 d,其中免疫正常+DTH陽(yáng)性組、Cy+DTH陰性組和Cy+DTH陽(yáng)性組給予等體積蒸餾水。除免疫正常+DTH陽(yáng)性組外,其余6組均于給藥的第3~5天腹腔注射環(huán)磷酰胺50 mg/kg,造成免疫功能低下模型。同時(shí)在第3天,除Cy+DTH陰性組以外,其他各組每鼠腹部去毛,將1%的2,4-二硝基氟苯丙酮液50 μl涂于脫毛處致敏,次日再?gòu)?qiáng)化一次。第7天各組小鼠用1%的2,4-二硝基氟苯液10 μl均勻涂于小鼠右耳進(jìn)行攻擊,攻擊24 h后,處死小鼠,剪下左右耳,用直徑9 mm打孔器打下相應(yīng)的圓耳片,稱重,并計(jì)算左右耳的耳腫差。

    2 結(jié)果

    2.1 炭粒廓清法 由表1可見(jiàn):受試藥物低、中、高劑量組校正廓清指數(shù)與環(huán)磷酰胺造模組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,P <0.01)。

    表1 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(±s)

    表1 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠碳粒廓清的影響(±s)

    注:*與陰性對(duì)照組的比較P<0.05;**與陰性對(duì)照組比較P<0.01

    組別 動(dòng)物數(shù)(只)給藥劑量 廓清指數(shù) 校正廓清指數(shù)正常對(duì)照組 10 - 0.063±0.187** 8.357±2.143**環(huán)磷酰胺造模組 10 - 0.042±0.011 5.826±1.143受試藥物低劑量組 10 3.0 ml/kg 0.050±0.021 6.552±1.265*受試藥物中劑量組 10 6.0 ml/kg 0.057±0.023** 7.150±1.163**受試藥物高劑量組 10 12.0 ml/kg 0.059±0.017** 7.163±1.277**陽(yáng)性對(duì)照藥(金水寶膠囊)組 10 0.50 g/kg 0.061±0.012** 7.361±0.992**

    2.2 血清溶血素法由表2可見(jiàn):受試藥物中、高劑量組校正廓清指數(shù)與環(huán)磷酰胺造模組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    2.3 DTH試驗(yàn) 由表3可見(jiàn):受試藥物高劑量組校正廓清指數(shù)與DTH陽(yáng)性造模組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

    表2 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(±s)

    表2 受試藥物對(duì)免疫功能低下小鼠血清溶血素的影響(±s)

    注:*與陰性對(duì)照組的比較P<0.05;**與陰性對(duì)照組比較P<0.01

    組別 動(dòng)物數(shù)(只) 給藥劑量 血清溶血素水平(OD值)正常對(duì)照組 10 - 0.288±0.057**環(huán)磷酰胺造模組 10 - 0.159±0.047受試藥物低劑量組 10 3.0 ml/kg 0.196±0.054受試藥物中劑量組 10 6.0 ml/kg 0.212±0.051*受試藥物高劑量組 10 12.0 ml/kg 0.241±0.051*陽(yáng)性對(duì)照藥物(金水寶膠囊)組 10 0.50 g/kg 0.312±0.108**

    表3 受試藥物對(duì)2.4-二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)(DTH)的影響

    3 討論

    通過(guò)實(shí)驗(yàn)可提示念慈庵川貝枇杷膏對(duì)碳粒廓清法,低劑量就表現(xiàn)出了良好的免疫效果,而在血清溶血素試驗(yàn)是中劑量,表現(xiàn)出了良好的免疫功能,DTH試驗(yàn)只有在較高劑量時(shí),表現(xiàn)出一定的提高免疫功能。綜上所述,念慈庵川貝枇杷膏對(duì)免疫低下小鼠具有一定的細(xì)胞免疫和體液免疫功能。

    [1] 曉龍,蔣偉哲,林自中.龍眼參提取物對(duì)環(huán)磷酰胺所致小鼠免疫功能低下的影響.中國(guó)藥房,2004,15(6):334.

    [2] 吳克明,曾婧,曾南,等.清宮止血顆粒對(duì)免疫低下小鼠免疫功能的影響.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報(bào),2004,2(3):203-204.

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