雞腸狼毒植物中曼西醇型二萜成分的研究

李 杰，趙 維，鄧 亮，李向榮

(1.浙江大學(xué)城市學(xué)院醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，浙江 杭州 310015;2.昆明醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，云南 昆明 650031)

雞腸狼毒(Euphorbia prolifera Buch-Ham)屬大戟科(Euphorbiaceae)大戟屬(Euphorbia)植物，主要分布于中國云南，為多年生草本植物。雞腸狼毒以根入藥，具有利水消腫、瀉下通便的功效，主治各種水腫、便秘、外傷出血、瘡及無名腫毒等。吳大剛、陳道峰等曾對其進(jìn)行植化研究［1-5］。我們對該植物的石油醚萃取部分進(jìn)行了較詳細(xì)的研究，從中分離得到8個已知的曼西醇型二萜(圖1)。

圖1 雞腸狼毒植物中分離得到的曼西醇型二萜Fig.1 Myrsinane-type diterpenes from Euphorbia prolifera Buch-Ham

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 核磁共振譜用Varian Unity NOVA 400/54核磁共振儀(溶劑為CDCl3，TMS為內(nèi)標(biāo))。雞腸狼毒植物(2010年采集自云南)由云南大學(xué)蔡樂博士鑒定;層析用硅膠為青島海洋化工廠出品;TLC用溶劑系統(tǒng):S1氯仿-甲醇，S2石油醚-乙酸乙酯，S3甲醇-水，層析所用溶劑為分析純。

1.2 試驗方法 雞腸狼毒根粉2.5 kg，以約15 L乙醇反復(fù)提取得到乙醇提取物，減壓蒸餾得到浸膏，總浸膏用水分散后，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。石油醚萃取物(23.5 g)經(jīng)硅膠柱層析(100～200目，500 g粗硅膠)，石油醚-乙酸乙酯(10∶1～1∶1)梯度洗脫，洗脫液合并，減壓濃縮得到 A(1.6 g)、B(2.8 g)、C(4.4 g)、D(9.7 g)、E(2.5 g)五部分。A 部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得77 mg化合物7，B部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得25 mg化合物2和19 mg化合物5，C部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得到12 mg化合物6，D部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得到38 mg化合物1和23 mg化合物3，E部分經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析得到6 mg化合物4和15 mg化合物8。

2 結(jié)果

2.1 Proliferin A(1)無色晶體，熔點100～102℃，HR-ESI-MS顯示分子式為 C42H54O15(m/z821.3390 ［M+Na］+，calc. for 821.3355)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH6.19(1H，ddd，J=10.4，6.4，1.2 Hz，H-8)，5.94(1H，dd，J=10.8，1.2 Hz，H-5)，5.91(1H，dd，J=10.0，5.2 Hz，H-9)，5.80(1H，s，H-14)，5.44(1H，d，J=4.0 Hz，H-3)，4.84(1H，d，J=6.4 Hz，H-7)，4.12(1H，d，J=8.8 Hz，H-17α)，3.72(1H，dd，J=10.8，4.0 Hz，H-4)，3.51(1H，dd，J=8.8，1.2 Hz，H-17β)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)47.5(1)，86.4(2)，77.6(3)，47.7(4)，68.5(5)，53.4(6)，62.8(7)，125.8(8)，129.8(9)，85.8(10)，44.6(11)，37.0(12)，90.0(13)，73.5(14)，90.0(15)，18.9(16)，69.8(17)，25.1(18)，21.2(19)，24.1(20)，173.3(3-OPr)，27.9(2')，8.7(3')，169.1(5-OAc)，20.7(2')，170.6(7-OAc)，22.4(2')，170.3(10-OAc)，20.8(2')，168.4(15-OAc)，22.2(2')，165.6(14-OBz)，130.1(1')，130.0(2'，6')，128.3(3'，5')，133.2(4')，173.5(2-OMp)，34.3(2')，18.2(3')，18.8(4')。以上NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［6］基本一致。

2.2 Proliferin B(2)無色晶體，熔點156～158℃，HR-ESI-MS提示分子式為 C45H52O15(m/z855.3152 ［M+Na］+，calc. for 855.3204)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH6.19(1H，ddd，J=10.4，6.8，1.2 Hz，H-8)，6.02(1H，dd，J=10.8，1.2 Hz，H-5)，5.91(1H，dd，J=10.4，5.8 Hz，H-9)，5.83(1H，s，H-14)，5.51(1H，d，J=3.6 Hz，H-3)，4.87(1H，d，J=6.8 Hz，H-7)，4.19(1H，d，J=8.8 Hz，H-17α)，3.95(1H，dd，J=10.8，3.6 Hz，H-4)，3.53(1H，dd，J=8.8，1.2 Hz，H-17β)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)46.6(1)，87.6(2)，78.6(3)，47.8(4)，68.7(5)，53.6(6)，63.0(7)，125.9(8)，129.9(9)，85.8(10)，44.7(11)，37.1(12)，90.1(13)，73.3(14)，90.2(15)，18.3(16)，69.9(17)，25.2(18)，21.0(19)，24.3(20)，173.6(3-OPr)，28.1(2')，8.8(3')，169.3(5-OAc)，21.0(2')，170.4(7-OAc)，21.3(2')，170.7(10-OAc)，22.5(2')，168.5(15-OAc)，22.4(2')，164.8(2-OBz)，129.2(1')，129.8(2'，6')，128.2(3'，5')，132.8(4')，165.9(14-OBz)，128.4(1')，129.5(2'，6')，128.1(3'，5')，132.6(4')。以上 NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［6］基本一致。

2.3 Proliferin C(3)無色晶體，熔點196～198℃，HR-ESI-MS顯示分子式為 C38H48O13(m/z735.3004 ［M+Na］+，calc. for 735.2987)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH6.17(1H，ddd，J=10.0，6.4，1.2 Hz，H-8)，5.96(1H，dd，J=11.2，1.2 Hz，H-5)，5.90(1H，dd，J=10.0，5.6 Hz，H-9)，5.93(1H，s，H-14)，5.36(1H，t，J=3.2 Hz，H-3)，4.86(1H，d，J=6.4 Hz，H-7)，4.12(1H，d，J=8.4 Hz，H-17α)，3.50(1H，dd，J=8.4，1.2 Hz，H-17β)，3.48(1H，dd，J=11.2，3.2 Hz，H-4)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)45.6(1)，38.1(2)，76.8(3)，50.0(4)，68.9(5)，53.7(6)，63.3(7)，125.7(8)，129.9(9)，85.9(10)，44.9(11)，37.3(12)，90.0(13)，73.4(14)，89.2(15)，14.0(16)，70.0(17)，25.4(18)，21.1(19)，24.9(20)，174.1(3-OPr)，28.2(2')，9.1(3')，169.2(5-OAc)，21.1(2')，170.7(7-OAc)，22.7(2')，170.4(10-OAc)，21.0(2')，168.6(15-OAc)，22.5(2')，165.5(14-OBz)，130.0(1')，130.0(2'，6')，128.6(3'，5')，133.4(4')。以上NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［6］基本一致。

2.4 Proliferin D(4)無色晶體，熔點168～170℃，HR-ESI-MS顯示分子式為 C41H46O13(m/z769.2836 ［M+Na］+，calc. for 769.2831)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH5.79(1H，dd，J=11.2，1.2 Hz，H-5)，5.56(1H，d，J=5.2 Hz，H-8)，5.39(1H，t，J=4.0 Hz，H-3)，5.20(1H，s，H-14)，4.25(1H，d，J=9.6 Hz，H-17α)，3.69(1H，dd，J=9.6，1.2 Hz，H-17β)，2.76(1H，dd，J=11.2，4.0 Hz，H-4)。13C-NMR(100 MHz，CDCl3)50.6(1)，30.8(2)，78.9(3)，50.6(4)，69.3(5)，63.0(6)，205.4(7)，72.4(8)，35.5(9)，78.4(10)，41.4(11)，41.9(12)，89.3(13)，83.1(14)，81.3(15)，14.5(16)，67.2(17)，34.7(18)，25.4(19)，22.3(20)，173.1(3-OPr)，26.3(2')，8.7(3')，170.2(5-OAc)，22.6(2')，169.3(10-OAc)，22.0(2')，160.1(8-OBz)，130.3(1')，130.1(2'，6')，128.5(3'，5')，133.4(4')，167.0(14-OBz)，130.3(1')，129.9(2'，6')，128.4(3'，5')，133.4(4')。以上NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［6］基本一致。

2.5 Euphorprolitherin B(5)無色針晶，ESI-MS顯示分子式為C40H50O15(m/z 793.4［M+Na］+)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH6.19(1H，dd，J=10.4，6.4 Hz，H-8)，5.95(1H，d，J=10.8 Hz，H-5)，5.91(1H，dd，J=10.0，5.6 Hz，H-9)，5.82(1H，s，H-14)，5.41(1H，d，J=4.0 Hz，H-3)，4.85(1H，d，J=6.4 Hz，H-7)，4.16(1H，d，J=8.4 Hz，H-17α)，3.74(1H，dd，J=11.2，4.0 Hz，H-4)，3.52(1H，dd，J=8.4，0.8 Hz，H-17β)。以上 NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［5］基本一致。

2.6 Euphorprolitherin D(6)無色方晶，ESI-MS顯示分子式為C36H44O13(m/z 707.4［M+Na］+)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH5.78(1H，dd，J=11.2，1.2 Hz，H-5)，5.54(1H，d，J=5.6 Hz，H-8)，5.36(1H，t，J=4.0 Hz，H-3)，4.96(1H，s，H-14)，4.92(1H，d，J=12.0 Hz，H-12)，4.21(1H，d，J=9.6 Hz，H-17α)，3.65(1H，dd，J=9.6，1.2 Hz，H-17β)，2.73(1H，dd，J=11.2，4.0 Hz，H-4)。以上 NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［5］基本一致。

2.7 SPr 5(7) 無色晶體，ESI-MS顯示分子式為 C38H46O14(m/z 749.3［M+Na］+)。1HNMR(400 MHz，CDCl3)δH6.09(1H，dd，J=11.2，1.2 Hz，H-5)，5.46(1H，t，J=4.0 Hz，H-3)，5.18(1H，d，J=7.2 Hz，H-8)，5.04(1H，s，H-14)，4.31(1H，d，J=10.0 Hz，H-17α)，4.06(1H，d，J=12.8 Hz，H-12)，3.65(1H，dd，J=10.0，1.2 Hz，H-17β)，3.03(1H，dd，J=11.2，4.0 Hz，H-4)。以上 NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［3］基本一致。

2.8 14-desoxo-3-O-propionyl-5，15-di-O-acetyl-7-O-nicotinoyl-myrsinol-14β-acetate(8)無色晶體，ESI-MS顯示分子式為C35H43O11N(m/z 676.3 ［M+Na］+)。1H-NMR(400 MHz，CDCl3)δH6.29(1H，ddd，J=10.0，6.4，1.2 Hz，H-8)，5.97(1H，dd，J=11.2，1.6 Hz，H-5)，5.94(1H，dd，J=9.6，6.0 Hz，H-9)，5.27(1H，t，J=3.6 Hz，H-3)，5.07(1H，d，J=6.4 Hz，H-7)，5.03(1H，s，H-14)，4.75(1H，br s，H-18)，4.63(1H，br s，H-18')，4.06(1H，d，J=8.8 Hz，H-17)，3.59(1H，dd，J=8.8，1.6 Hz，H-17')，3.32(1H，d，J=2.8 Hz，H-12)，3.14(1H，m，H-11)，3.12(1H，dd，J=11.2，3.6 Hz，H-4)。以上NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)值［7］基本一致。

3 討論

雞腸狼毒是國產(chǎn)大戟屬植物中民間應(yīng)用較為廣泛的一個種，因其具有重要生理活性而被數(shù)次進(jìn)行植化研究。本研究從雞腸狼毒根的石油醚提取物中分離得到8個已知的曼西醇型二萜，不同課題組分離得到的化合物具有較大差異，但是，所有二萜化合物在類型和結(jié)構(gòu)上具有很大的相似性，由此說明同一植物的化學(xué)成分會因為環(huán)境、采集時間的不同而具有一定的差異。此外，通過分離得到的化合物Proliferin A(1)、Proliferin B(2)、Proliferin D(4)對人癌細(xì)胞(HCT-8、Bel-7402、BGC-823、A549、A2780)的增殖抑制活性研究，發(fā)現(xiàn)Proliferin A對卵巢癌細(xì)胞 A2780 具有細(xì)胞毒性(IC507.7 μmol/L)。這是曼西醇型二萜中首個對卵巢癌細(xì)胞A2780具有增殖抑制活性的化合物，確切的構(gòu)效關(guān)系尚未明確。

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