鹿茸水提物對小鼠抗疲勞功能的影響

張 睿，趙玉紅，王忠政

(東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江哈爾濱150040)

鹿茸水提物對小鼠抗疲勞功能的影響

張 睿，趙玉紅*，王忠政

(東北林業(yè)大學(xué)林學(xué)院，黑龍江哈爾濱150040)

目的:研究鹿茸水提物對小鼠抗疲勞功能的影響。方法:144只昆明種雄性小鼠平均分成4組，即空白組(灌胃生理鹽水)、高劑量組、中劑量組和低劑量組(多肽含量分別為80、40、8mg/kg·d)。灌胃30d，末次灌胃30min后測定其負(fù)重游泳時間，并測定其血乳酸(BLA)、血清尿素氮(BUN)、肝糖原(LG)、肌糖原(MG)含量及乳酸脫氫酶(LDH)活力。結(jié)果:鹿茸水提物能明顯延長小鼠負(fù)重游泳時間(p＜0.05，p＜0.01);降低小鼠血乳酸(p＜0.01)和血清尿素氮(p＜0.01)的含量;提高小鼠體內(nèi)肝糖原(p＜0.05，p＜0.01)和肌糖原(p＜0.01)的儲備量及運動后乳酸脫氫酶的活力(p＜0.05，p＜0.01)。結(jié)論:鹿茸水提物對小鼠具有明顯的抗疲勞作用。

鹿茸水提物，抗疲勞，小鼠

鹿茸為鹿科動物梅花鹿或馬鹿的雄鹿密生茸毛的未骨化幼角［1］，是哺乳動物界唯一存在的可快速重生的組織器官［2－3］，在生長季節(jié)其生長率約每天2cm［4］。《本草綱目》一書曾將鹿茸列為有極高價值的治療藥劑［5］。鹿茸中包括17種以上氨基酸，9種脂肪酸，10種磷脂及蛋白質(zhì)、激素樣物質(zhì)、生物胺、多肽類、硫酸軟骨素、前列腺素、核酸、維生素等有機成分，還包括大量的無機元素，其中有5種人體必需的常量元素和11種人體必需的微量元素［6］。目前，許多報道證明了鹿茸具有抗炎、抗損傷、抗老化［7］、抗氧化、抗腫瘤、保護心血管、增強免疫力、提高性功能等作用［8］，但對于鹿茸抗疲勞的研究并沒有系統(tǒng)化，僅有的研究也只限于對鹿茸多肽單一成分的研究［9］，并且提取工藝復(fù)雜。本研究通過改進提取方法，利用甘氨酸－NaOH緩沖溶液對鹿茸進行提取，并系統(tǒng)研究了鹿茸水提物對小鼠的抗疲勞功能。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

實驗動物 清潔級昆明種小鼠144只，雄性，體重(20±2)g，由哈爾濱腫瘤醫(yī)院提供;鹿茸水提物冷凍鮮茸切塊、凍干、粉碎，過40目篩，用甘氨酸－NaOH緩沖溶液浸提得到;血乳酸(BLA)、血清尿素氮(BUN)、乳酸脫氫酶(LDH)、肝(肌)糖原(LG、MG)試劑盒 均為南京建成生物工程研究所產(chǎn)品，批號20091124;甘氨酸、NaOH 天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠，均為分析純。

TGL－16G臺式離心機 上海安亭科學(xué)儀器廠;T6型紫外/可見分光光度計 北京普析通用儀器有限責(zé)任公司;ALPHA1－2冷凍干燥機 德國CHRIST公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組與灌胃劑量 將實驗動物隨機分為4組:即空白組(灌胃等劑量生理鹽水);高、中、低劑量組(多肽濃度分別為80、40、8mg/kg·d)，每組36只，連續(xù)灌胃30d。

1.2.2 負(fù)重游泳實驗及力竭游泳時間的測定 灌胃鹿茸水提物30d后，于末次灌胃30min后，各組小鼠置于游泳箱(50cm×40cm×60cm)中游泳，水深不低于30cm，水溫30℃，鼠尾根部負(fù)荷體重6%的鉛絲，記錄小鼠自游泳開始至沉入水中8s不能浮起的時間，為力竭游泳時間(min)［10］。

表3 鹿茸水提物對小鼠血乳酸含量的影響(±SD，n=10)

表3 鹿茸水提物對小鼠血乳酸含量的影響(±SD，n=10)

組別 游泳前(mmol/L)游泳后20min(mmol/L)游泳后50min(mmol/L)廓清率(μmol/L·min)空白組4.22±1.92 15.29±0.99 14.31±0.98 32.53±2.14低劑量組 4.85±1.86 13.61±1.80** 12.37±1.79* 41.27±3.68**中劑量組 5.76±2.00 12.13±2.38** 10.63±2.34** 49.83±2.11**高劑量組 4.99±1.45 7.11±1.63** 5.53±1.57** 52.50±3.45**

1.2.3 血乳酸(BLA)含量測定 小鼠末次灌胃30min后，各組小鼠置于30℃的游泳箱中不負(fù)重游泳60min;分別于游泳前、游泳后休息20min及游泳后休息50min采眼球血，用試劑盒測定血清乳酸(BLA)含量，計算廓清率［11］。

BLA廓清率=［泳后20min的BLA(μmol/L)－泳后50min的BLA(μmol/L)］/30min

1.2.4 血清尿素氮(BUN)含量測定 小鼠末次灌胃30min后，各組小鼠在溫度為30℃的游泳箱中不負(fù)重游泳90min，撈出小鼠擦干，分別于游泳前、游泳后立即及游泳后休息30min采眼球血，分離血清。用血清BUN試劑盒測定其含量，計算廓清率［11］。

BUN廓清率=［泳后即時的BUN(μmol/L)－泳后30min的BUN(μmol/L)］/30min

1.2.5 乳酸脫氫酶(LDH)活力測定 小鼠末次灌胃30min后，各組小鼠置于30℃的游泳箱中不負(fù)重游泳50min后采眼球血。用乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒測定酶活力［12］。

1.2.6 肝糖原(LG)和肌糖原(MG)含量測定 小鼠末次灌胃30min后，各組小鼠在溫度為30℃的游泳箱中不負(fù)重游泳90min，采血后即刻處死，取肝臟和后腿肌肉，用試劑盒測定肝糖原(LG)和肌糖原(MG)含量［13］。

1.3 統(tǒng)計方法

各項指標(biāo)均采用Minitab15軟件統(tǒng)計，并進行方差分析，實驗數(shù)據(jù)均以±SD表示。

2 結(jié)果與討論

2.1 對小鼠體重的影響

經(jīng)過連續(xù)30d的灌胃，各組小鼠實驗前后體重的增長無顯著性差異(p>0.05)，證明鹿茸水提物對小鼠體重?zé)o影響，結(jié)果見表1。

表1 鹿茸水提物對小鼠體重的影響(g，±SD)

表1 鹿茸水提物對小鼠體重的影響(g，±SD)

組別1d 30d空白組20.88±2.15 22.36±1.36低劑量組 20.40±1.43 22.10±2.91中劑量組 20.21±1.93 21.95±2.52高劑量組20.26±2.21 22.50±2.65

2.2 對小鼠負(fù)重游泳時間的影響

疲勞最直接最客觀的表現(xiàn)是運動耐力的下降，運動耐力的提高是緩解機體體力疲勞的一種宏觀表現(xiàn)。因此，負(fù)重游泳時間越長，證明抗疲勞功效越好，結(jié)果見表2。

表2 鹿茸水提物對小鼠負(fù)重游泳時間的影響(±SD，n=10)

表2 鹿茸水提物對小鼠負(fù)重游泳時間的影響(±SD，n=10)

注:*表示與空白組差異顯著(p＜0.05);**表示與空白組差異極顯著(p＜0.01);表3～表6同。

組別 游泳時間(min) 延長率(%)空白組 5.8±2.3—低劑量組 6.4±2.8 10.34中劑量組 7.4±2.2* 27.59高劑量組 8.6±2.5**48.28

各劑量組與空白組相比游泳時間均有延長，其中中劑量組與空白組相比有顯著差異(p＜0.05)，高劑量組與空白組相比有極顯著差異(p＜0.01)，延長率由低劑量組到高劑量組分別為10.34%、27.59%、48.28%，其作用效果由強到弱依次為高劑量組>中劑量組>低劑量組。羅翔丹［9］等在研究鹿茸多肽對小鼠的抗疲勞功能時，檢測了小鼠負(fù)重游泳時間，與本實驗相比，其游泳時間相對較長，這可能是由于本實驗小鼠尾部負(fù)荷體重6%的鉛絲，而羅翔丹［9］等負(fù)重5%導(dǎo)致的。

2.3 對血乳酸含量的影響

肌乳酸是供能體系的中產(chǎn)物，長時間劇烈運動會使機體相對缺氧，糖酵解加快，產(chǎn)生大量肌乳酸，是導(dǎo)致疲勞的重要原因。乳酸在肌肉中堆積越多，疲勞程度越嚴(yán)重。肌乳酸會在5～15min內(nèi)迅速滲入血液，使血乳酸含量上升，最終二者達到平衡，所以可以通過測定血乳酸含量反映肌乳酸的情況。因此，運動后血乳酸含量越低，證明抗疲勞功效越好，且從血乳酸的廓清率上來看，抗疲勞效果越好，血乳酸清除速度應(yīng)該越快，結(jié)果見表3。

在泳后20min時，與空白組比，各劑量組BLA含量均有所降低，且都有極顯著差異(p＜0.01)。在泳后50min時，與空白組比，各劑量組BLA含量亦均有降低，其中低劑量組有顯著差異(p＜0.05)，中、高劑量組有極顯著差異(p＜0.01)，其作用效果由強到弱依次為高劑量組 >中劑量組 >低劑量組。泳后20min到50min的BLA廓清率，與空白組比，各劑量組均有極顯著差異(p＜0.01)，表明各劑量組均能明顯減少小鼠運動后體內(nèi)BLA的含量，能在一段時間內(nèi)快速清除體內(nèi)的BLA，高劑量組清除效果最強。與羅翔丹［9］等研究的血乳酸含量相比，本實驗BLA含量相對較高，除了灌胃成分和劑量不一致外，還可能是由于本實驗游泳時間較長，產(chǎn)生的血乳酸較多導(dǎo)致的。

2.4 對血清尿素氮含量的影響

血清尿素氮含量的變化可說明體內(nèi)含氮物質(zhì)分解代謝狀況，也是評價抗疲勞效果的重要指標(biāo)。機體BUN含量隨勞動及運動負(fù)荷的增加而增加。機體對負(fù)荷適應(yīng)能力越差，血清尿素氮含量增加越明顯，且從血清尿素氮的廓清率上來看，抗疲勞效果越好，血清尿素氮的清除速度應(yīng)該越快，結(jié)果見表4。

表4 鹿茸水提物對小鼠血清尿素氮含量的影響(±SD，n=10)

表4 鹿茸水提物對小鼠血清尿素氮含量的影響(±SD，n=10)

組別 游泳前(mg/L)游泳后(mg/L)游泳后30min(mg/L)廓清率(mg/L·min)空白組110.3±8.71 276.4±17.3 262.3±17.0 0.64±0.04低劑量組 112.7±4.01 220.4±24.4** 195.8±23.3** 0.80±0.04**中劑量組 115.4±2.92 179.7±24.9** 155.7±19.6** 0.97±0.07**高劑量組 114.4±5.06 175.9±30.4** 141.8±29.0** 1.14±0.10**

小鼠泳后立即采血，與空白組比，各劑量組BUN含量均有極顯著差異(p＜0.01)，在游泳后30min時采血，各劑量組BUN含量與空白組相比亦均有極顯著差異(p＜0.01)，其作用效果由強到弱依次為高劑量組>中劑量組>低劑量組。泳后30min內(nèi)的BUN廓清率，與空白組比，各劑量組均有極顯著差異(p＜0.01)，表明各劑量組均能明顯減少小鼠運動后體內(nèi)BUN的含量，能在一段時間內(nèi)快速清除體內(nèi)的BUN，高劑量組清除效果最強。

2.5 對乳酸脫氫酶活力的影響

乳酸脫氫酶是催化乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸的酶，與乳酸的清除代謝相關(guān)，可減少乳酸的堆積。由此可見，血清乳酸脫氫酶活力是反映乳酸清除速度的指標(biāo)，其活力越高抗疲勞效果越明顯，結(jié)果見表5。

表5 鹿茸水提物對乳酸脫氫酶活力的影響(±SD，n=10)

表5 鹿茸水提物對乳酸脫氫酶活力的影響(±SD，n=10)

組別 脫氫酶活力(U/g蛋白)空白組4152±498低劑量組 4975±124*中劑量組 5110±216*高劑量組 5355±321**

各劑量組與空白組相比LDH活力均有提高，其中中、低劑量組與空白組相比有顯著差異(p＜0.05)，高劑量組與空白組相比有極顯著差異(p＜0.01)，其作用效果由強到弱依次為高劑量組>中劑量組>低劑量組，證明高劑量組LDH活力最強，清除運動后產(chǎn)生乳酸的速度最快。

2.6 對肝糖原和肌糖原含量的影響

大量研究表明，運動導(dǎo)致的體力衰竭總是和肌糖原的耗竭同時發(fā)生。隨著肌糖原消耗的不斷增加，機體為維持血糖水平，將動用肝糖原而導(dǎo)致肝糖原減少。因此，運動后肝糖原和肌糖原含量越高，證明抗疲勞功效越好，結(jié)果見表6。

表6 鹿茸水提物對小鼠肝(肌)糖原含量的影響(±SD，n=10)

表6 鹿茸水提物對小鼠肝(肌)糖原含量的影響(±SD，n=10)

組別 肝糖原(mg/g) 肌糖原(mg/g)空白組17.32±1.88 2.43±0.18低劑量組 18.33±0.77 2.84±0.11**中劑量組 20.35±1.10* 3.17±0.13**高劑量組 24.19±1.85** 3.68±0.27**

從肝糖原的數(shù)據(jù)看，各劑量組與空白組相比均有差異，其中中劑量組與空白組相比有顯著差異(p＜0.05)，高劑量組與空白組相比有極顯著差異(p＜0.01)，其作用效果由強到弱依次為高劑量組>中劑量組>低劑量組，證明高劑量組的肝糖原儲備量最高。從肌糖原數(shù)據(jù)看，各劑量組與空白組相比均有極顯著差異(p＜0.01)，其作用效果由強到弱依次為高劑量組>中劑量組>低劑量組，證明高劑量組肌糖原儲備量最高。

3 結(jié)論

鹿茸水提物對小鼠的自然生長情況無影響。鹿茸水提物能夠顯著延長小鼠力竭游泳時間、降低游泳后血乳酸和血清尿素氮含量、增強乳酸脫氫酶活力、提高肝糖原和肌糖原含量。鹿茸水提物能快速清除疲勞所產(chǎn)生的血乳酸和血清尿素氮，加速疲勞的消除。鹿茸水提物對小鼠具有很好的抗疲勞效果，以高劑量組(80mg/kg·d)效果最強。

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Anti－fatigue effects of antler velvet water extract in mice

ZHANG Rui，ZHAO Yu－h(huán)ong*，WANG Zhong－zheng
(Northeast Forestry University，Harbin 150040，China)

Objective:To study the anti－fatigue effects of antler velvet water extract in mice.Method:144 male mice were randomized into 4 groups(3 antler velvet water extract intervention groups and the control group).The control group was given saline and the 3 intervention groups were given various doses of water extract(80，40，8mg/kg·d)for 30 consecutive days，respectively.Then burden swimming time，BLA，BUN，LG，MG and LDH were tested by experiment.Result:The results showed that the antler velvet water extract can increase the swimming time(p＜0.05，p＜0.01)，the content of LG(p＜0.05，p＜0.01)，MG(p＜0.01)and the effect of LDH(p＜0.05，p＜0.01)，and decrease the content of BLA(p＜0.01)，BUN(p＜0.01)obviously.Conclusion:The antler velvet water extract has the function of anti－fatigue obviously.

water extract of deer velvet antler;anti－fatigue;mice

TS201.4

A

1002－0306(2011)04－0365－03

2010－05－10 *通訊聯(lián)系人

張睿(1985－)，女，碩士研究生，研究方向:鹿茸活性成分的提取及功能活性研究。

東北林業(yè)大學(xué)研究生論文資助項目(gram09)。