野葛花解酒作用機(jī)理研究

劉 瑩，郁建平

(貴陽學(xué)院，貴州貴陽550003)

野葛花解酒作用機(jī)理研究

劉 瑩，郁建平*

(貴陽學(xué)院，貴州貴陽550003)

目的:探討野葛花提取物解酒作用機(jī)理，為中藥解酒保肝藥物的開發(fā)提供依據(jù)。方法:觀察比較野葛花提取物與解酒護(hù)肝膠囊對小鼠肝臟勻漿中ADH、ALDH、SOD、GSH－PX的酶活力的影響［1］。結(jié)果:野葛花提取物能夠明顯提高ADH、ALDH、SOD、GSH－PX活力。結(jié)論:野葛花提取物通過提高ADH、ALDH、SOD、GSH－PX活力以達(dá)到其解酒的作用，進(jìn)而對抗酒精性肝損傷。

野葛花提取物，ADH，ALDH，SOD，GSH－PX，解酒機(jī)理

近年來隨著人們生活水平的提高，飲酒成為部分人生活的一種方式，大量或長期飲酒，則易導(dǎo)致急慢性酒精中毒。野葛花又名葛條花，為豆科植物野葛Pueraria lobata(Wild)ohwi的干燥花蕾。野葛花用于解酒已有近千年的歷史，《神農(nóng)本草經(jīng)》、《本草綱目》等記載其具有解酒醒脾之功效［2］。目前關(guān)于野葛花的解酒效果研究的文獻(xiàn)比較多，但真正從解酒作用機(jī)制方面展開研究的還不多，所以本實(shí)驗(yàn)對野葛花提取物解酒作用機(jī)制進(jìn)行初步的探討。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

葛花藥材 購于貴州省貴陽市花果園藥材市場，經(jīng)貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物教研室廖海明教授鑒定為豆科植物野葛(Pueraria lobata(Willd.)Ohwi)的干燥花蕾;瀘州老窖二曲酒 45度，四川瀘州老窖股份有限公司，生產(chǎn)批號:0905150911;天天清護(hù)肝解酒膠囊 香港資美堂生物科技有限公司，批號:豫衛(wèi)食字(2004)第4098號;氯化鈉注射液貴州六枝工礦集團(tuán)大華藥業(yè)有限公司，批號:200906043;氧化型輔酶Ⅰ溶液 南京建成生物工程研究所，批號:20091008;5－二硫代－雙－2－硝基苯甲酸(DTNB) Sigma公司，批號:020413;SOD測定試劑盒 南京建成生物工程研究所，批號:20091023;GSH－PX測定試劑盒 南京建成生物工程研究所，批號:20091014;實(shí)驗(yàn)動物 昆明種小鼠，雄性，體重(18±2)g，由重慶市中藥研究院動物室提供，許可證號:scxk(渝)20070006。

數(shù)顯恒溫水浴鍋(KW－1000D) 上海梅香儀器有限公司;AR1140/C型電子天平 美國奧豪斯(上海)公司;GZX－9140電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海博達(dá)實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠;低溫冷凍干燥箱 上海杰技環(huán)境實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;紫外分光光度儀TU－1901 北京普析通用;臺式高速冷凍離心機(jī) 長沙平凡儀器儀表有限公司;組織勻漿器。

1.2 供試品制備

1.2.1 野葛花粗提物的制備 取野葛花藥材，于40℃干燥粉碎，采用70%乙醇加熱回流提取二次，每次回流2h，合并濾液，減壓回收乙醇至浸膏，冷凍干燥，得到野葛花乙醇粗提取物粉末，該粉末1g相當(dāng)于10g原生藥。

表1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH、ALDH活力的影響(±s)

表1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH、ALDH活力的影響(±s)

注:與模型組比較，bp＜0.01，ap＜0.05，n=10;表2同。

組別 劑量(g·kg－1)肝中ADH的活力(U·0.1mL－1)肝中ALDH的活力(U·0.1mL－1)空白組 —837.145±106.348 276.298±69.478模型組 — 568.685±364.391 234.620±117.413陽性對照組 2.400 866.130±490.052 372.945±161.281b野葛花粗提物組 45.400 978.740±208.011a 407.570±78.001a野葛花總異黃酮組 8.000 1113.342±332.486a 453.440±80.458a

表2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD、GSH－PX活力的影響(±s)

表2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD、GSH－PX活力的影響(±s)

組別 劑量(g·kg－1)肝中SOD的活力(U·0.1mL－1)肝中GSH－PX的活力(U·0.1mL－1)空白組 —153.471±23.139 28.411±12.150模型組 — 145.026±48.295 26.439±10.460陽性對照組 2.400 174.820±47.285 32.312±13.349野葛花粗提物組 45.400 211.389±69.024b 35.693±18.502野葛花總異黃酮組 8.000 249.388±44.267a 41.624±8.287a

1.2.2 野葛花總異黃酮提取物 取一定量野葛花乙醇粗提取物粉末，加水溶解，配成4mg·mL－1的溶液，上樣于X－5型大孔樹脂，用70%乙醇洗脫并收集洗脫液，將所得到的洗脫液再經(jīng)減壓濃縮揮去乙醇，得到的浸膏冷凍干燥得到野葛花總異黃酮提取物粉末，該粉末1g相當(dāng)于100g原生藥。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH與ALDH活力的影響 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為野葛花粗提物組、野葛花總異黃酮提取組、陽性對照組、模型對照組、空白對照組。小鼠禁食12h后，除空白對照組ig生理鹽水外，其他各組均ig 45度瀘州老窖0.02mL·g－1。于ig 45度瀘州老窖前30min，給藥組分別ig給藥，劑量分別為:野葛花粗提物45.400g·kg－1，野葛花總異黃酮提取物8.000g·kg－1，陽性對照組灌胃天天清護(hù)肝解酒膠囊2.400g·kg－1，模型對照組灌胃等量的生理鹽水，空白對照組ig等量蒸餾水。酒后2h處死各組小鼠，取肝臟。按照1g肝臟∶4mL蔗糖溶液的比例量取蔗糖溶液。肝臟先用生理鹽水，后用蔗糖溶液沖洗，再放入已稱量好的蔗糖溶液中，在冰水浴中剪碎，勻漿，把勻漿液放入10mL離心管中。以4000r·min－1離心10min，以除去細(xì)胞碎片、紅細(xì)胞和核，小心地取出上清液，以9000r·min－1再次離心10min，得上清液用于ADH活力的測定，沉淀為線粒體，加入1mL蔗糖溶液，制成懸浮液后可以進(jìn)行ALDH活力的測定，整個離心過程保持在0～4℃溫度下進(jìn)行。

ADH活力單位的定義:于波長340nm處，每分鐘吸光度增大0.001所需酶量為一個ADH活力單位，計(jì)算公式為:

式中:ΔA為340nm處每分鐘吸光度的增大值;3.1為反應(yīng)液的總體積;0.1為加入反應(yīng)體系的ADH提取液體積。

ALDH活力單位的定義:于波長340nm處，每分鐘吸光度增大0.001所需ALDH的量為一個乙醛脫氫酶活力單位，計(jì)算公式為:

式中:ΔA為340nm處每分鐘吸光度的增大值;

3.5 為反應(yīng)液的總體積;0.1為加入反應(yīng)體系的ALDH提取液體積［3］。

1.3.2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD和GSH－PX的影響 取小鼠50只，隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為野葛花粗提物組、野葛花總異黃酮提取組、陽性對照組、模型對照組、空白對照組。每天早上定點(diǎn)給藥組分別ig野葛花粗提物45.400g·kg－1，野葛花總異黃酮提取物8.000g·kg－1，陽性對照組ig天天清護(hù)肝解酒膠囊2.400g·kg－1，模型對照組ig等量的生理鹽水，陽性對照組ig等量蒸餾水。下午定點(diǎn)各組分別ig 45度瀘州老窖0.02mL·g－1，空白對照組ig等量的蒸餾水。連續(xù)灌胃14d，最后1d灌酒1h后，處死各組小鼠，取肝臟。肝臟用冰冷的生理鹽水漂洗，除去血污，吸干水分，稱重，放入組織勻漿器中，然后按照體積重量比為1∶10的比例量取預(yù)冷的生理鹽水，在冰浴中用組織勻漿器勻漿，勻漿液轉(zhuǎn)移到10mL離心管中，置高速冷凍離心機(jī)中3000r·min－1離心10min，除去細(xì)胞核及膜碎片，上清液即為10%肝組織液。將其分別稀釋到1%和0.25%備用。小鼠肝臟組織SOD和GSH－PX的活力測定參照南京建成生物工程研究所試劑盒使用說明進(jìn)行。

1.3.3 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)結(jié)果用±s來表示，組間差異比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中ADH與ALDH活力的影響

結(jié)果見表1。

由表1數(shù)據(jù)可知，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮均可增強(qiáng)ADH、ALDH的活性。

2.2 野葛花提取物對急性酒精中毒小鼠肝臟中SOD與GSH－PX活力的影響

結(jié)果見表2。

由表2可知，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮均可提高小鼠肝臟中SOD、GSH－PX活力，并且野葛花粗提物組SOD活力與模型組相比，有顯著性差異(p＜0.01)。

3 討論

野葛花作為我國的傳統(tǒng)中藥，用于解酒已有千年的歷史。為探討其解酒機(jī)理進(jìn)行了上述研究，結(jié)果如下:在ADH和ALDH活力測定實(shí)驗(yàn)中，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮與模型組相比，活力顯著提高，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明野葛花通過提高ADH和ALDH的活性，加快乙醇的代謝速率，起到解酒作用。通過對SOD和GSH－PX活力的測定，野葛花粗提物與野葛花總異黃酮與模型組相比要高，說明野葛花通過增強(qiáng)SOD和GSH－PX的活性，加強(qiáng)清除具有毒性的超氧離子，從而達(dá)到保肝的作用。

［1］湯子春，鄒坤，汪鋆植.開口箭與筒鞘蛇菰提取物醒酒作用機(jī)制的研究［J］.時珍國醫(yī)國藥，2007，18(12):2958－2960.

［2］尹俊亭，仲英，孫敬勇.葛花的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2005，36(12):1905－1906.

［3］雷雨.絞股藍(lán)、麥飯石有效成分解酒作用及其抗酒精性肝損傷的研究［D］.廣州:廣州工業(yè)大學(xué)，2001.

［4］苑隆國，李旭，王曉輝.護(hù)肝膠囊對人和小鼠體內(nèi)乙醇脫氫酶活性的影響［J］.中國新醫(yī)藥，2003，2(4):28.

［5］任發(fā)政，羅云波，蔣箐莉.枳椇子影響乙醇代謝機(jī)理研究［J］.食品科學(xué)，2002(12):60.

Mechanism for the extracts from flower of Pueraria lobata to inhibit alcoholism

LIU Ying，YU Jian－ping*
(Guiyang University，Guiyang 550003，China)

Objective:To elucidate the mechanism for the extracts from flower of Pueraria lobata to inhibit alcoholism in order to provide the basis on new medicine.Methods:Compared the effect of the extracts of Pueraria lobata flower and an agent“Anti－alcoholic Liver capsule”on the activities of ADH，ALDH，SOD and GSH－PXin liver homogenate.Results:The extracts of Pueraria lobata flower can markedly increase the activities of ADH，ALDH，SOD and GSH－PX.Conclusion:The extracts from flower of Pueraria lobata can markedly enhance the activities of ADH，ALDH，SOD and GSH－PXto against alcohol－induced liver injury.

extracts from flower of Pueraria lobata;ADH;ALDH;SOD;GSH－PX;inhibit alcoholism

TS201.4

A

1002－0306(2011)04－0355－03

2010－03－22 *通訊聯(lián)系人

劉瑩(1985－)，女，碩士研究生，主要從事天然藥物成分及生理活性的研究。

資源植物草珊瑚二次開發(fā)及種植基地建設(shè)項(xiàng)目基金支撐(黔科合縣市(2009)7012－1)。