芡實殼提取物抗氧化能力研究

孫文凱，袁懷波，*，許 衛(wèi)，戚良號

(1.合肥工業(yè)大學生物與食品工程學院，安徽合肥230009;2.安徽省淮南市農業(yè)委員會，安徽淮南232001;3.淮南市豐浩水生蔬菜農民專業(yè)合作社，安徽淮南232001)

芡實殼提取物抗氧化能力研究

孫文凱1，袁懷波1，*，許 衛(wèi)2，戚良號3

(1.合肥工業(yè)大學生物與食品工程學院，安徽合肥230009;2.安徽省淮南市農業(yè)委員會，安徽淮南232001;3.淮南市豐浩水生蔬菜農民專業(yè)合作社，安徽淮南232001)

研究芡實殼不同提取物的抗氧化能力。測定不同芡實殼提取物溶液對超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH自由基的清除率，還原能力，抗脂質過氧化活性以及對羥基自由基引起的DNA損傷的保護作用。結果顯示，芡實殼提取物溶液能清除超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH自由基，有還原能力和抗脂質過氧化活性，對羥基自由基引起的DNA損傷有保護作用，說明芡實殼提取物具有抗氧化能力。

芡實殼，提取物，抗氧化

芡實是睡蓮科一年生水生草本植物芡(Euryale ferox Salisb.)的成熟種仁，是睡蓮科芡屬唯一的一種植物。芡實的種仁為藥食同源，藥用價值較高，近些年研究發(fā)現(xiàn)芡實種仁除具有祖國中醫(yī)認為的功效外，還具有抗氧化［1］、提高肌體免疫力［2］以及修復心肌局部缺血的多次灌注液傷害等功效［3］。芡實的芡米外面還包有芡實硬殼，生產中通過芡實脫殼機將芡實殼去除，但是如何利用芡實殼成為芡實加工企業(yè)頭痛的問題。芡實殼的硬度不足以生產活性炭，也難以作為其它有用材料，殼只能被農民作為家庭燃火取暖做飯使用，造成芡實殼資源的浪費。對于芡實外殼成分和功效的研究，國內外均為空白，沒有檢索到任何相關文章。在已有芡實種仁具有抗氧化能力報道的基礎上［1］，本研究對芡實殼提取物的抗氧化能力進行初步研究，為后續(xù)的芡實殼成分研究及芡實殼綜合開發(fā)利用提供實驗依據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

芡實殼 淮南市豐浩水生蔬菜農民專業(yè)合作社提供;其它化學試劑 均為分析純。

KDC－160HR離心機 科大創(chuàng)新股份有限公司;751紫外分光光度計 上海光譜儀器有限公司;R－201旋轉蒸發(fā)儀 上海申勝生物技術公司;LGJ－10真空冷凍干燥箱 北京四環(huán)科學儀器廠有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 芡實殼提取物的制備 500g芡實殼→粉碎獲得30目粉末→各加入不同溶劑(蒸餾水、100%乙醇、75%乙醇與50%乙醇溶液)60℃水浴加熱浸提2次→合并濾液→真空濃縮→冷凍真空干燥，制成干粉，得到芡實殼提取物→再用水稀釋獲得各個濃度梯度的樣品溶液

1.2.2 芡實殼提取物對超氧陰離子自由基的清除

采用鄰苯三酚自氧化法［4］。

1.2.3 芡實殼提取物對羥基自由基的清除 采用D－脫氧核糖－Fe體系法［5］。

1.2.4 芡實殼提取物對 DPPH·的清除［6］吸取1mL樣液，移入試管中，加1mL 0.1mmol/L DPPH的乙醇溶液，室溫靜置30min，于525nm波長測定吸光度。以空白作參比，按下式計算:

清除率(%)=［1－(A－A1)/A0］×100%

式中:A0－DPPH與無水乙醇吸光度;A1－樣品與無水乙醇吸光度;A－樣品與DPPH吸光度。

1.2.5 芡實殼提取物的還原能力 采用六氰合鐵酸鉀法［7］。

1.2.6 芡實殼提取物抗脂質過氧化活性的測定 采用亞油酸體系法［8］。

1.2.7 芡實殼提取物對羥基自由基引發(fā)DNA氧化損傷的抑制作用 采用硫代巴比妥分光光度法［9］。

2 結果與分析

2.1 芡實殼提取物對超氧陰離子自由基的清除

采用鄰苯三酚自氧化法，測定芡實殼各提取物溶液對超氧陰離子自由基的清除率，其結果如圖1所示。

圖1 芡實殼提取物對超氧陰離子自由基的清除率

由圖1可看出，芡實殼的不同濃度醇提物均具有清除超氧陰離子自由基的作用，且具有量效關系，其清除能力小于同濃度的維生素C。其中50%乙醇提取物的清除能力高于75%乙醇提取物，而75%乙醇提取物的清除能力高于100%乙醇提取物。隨著水提物濃度的增加，其清除能力反而下降，說明濃度越高的乙醇提取獲得清除超氧陰離子物質越少，該物質可能為混合物。水提物隨著濃度的增加反而清除能力下降的原因可能與水提物的顏色影響實驗結果有關，這點還需要進一步的研究。

2.2 芡實殼提取物對羥基自由基的清除

采用Fenton反應生成羥基自由基，然后加入芡實殼提取物溶液，其對羥基自由基的清除率如圖2所示。

圖2 芡實殼提取物對羥基自由基的清除率

由圖2看出，對羥自由基的清除率隨著芡實殼各提取物濃度的增加而增加，但是清除能力低于同濃度的維生素C，但是其在1mg/mL濃度下對羥基自由基清除率可達83%以上。各提取物清除羥基自由基的能力是100%乙醇>50%乙醇>75%乙醇>水提物，其中100%乙醇的清除能力幾乎與50%乙醇的相等。

2.3 芡實殼提取物對DPPH·的清除

吸取1mL樣液，移入試管中，加入DPPH的乙醇溶液，于525nm下測定吸光度。芡實殼提取物溶液對DPPH·的清除率如圖3所示。

互聯(lián)網(wǎng)金融面臨著傳統(tǒng)金融具有的業(yè)務風險。一方面是流動性風險，資金的流動性決定了金融業(yè)務能否平穩(wěn)有序地開展，傳統(tǒng)金融通過準備金制度等來保證資金的流動性，而互聯(lián)網(wǎng)金融由于針對資金外流沒有有效地規(guī)制方法，使得資金的流動性缺乏保障，近年來大量的互聯(lián)網(wǎng)金融平臺由于資金鏈斷裂而倒閉，導致流動性不足的原因包括期限錯配、實際收益率與預期收益率不符和違規(guī)建立資金池等。另一方面是市場性風險，由于互聯(lián)網(wǎng)金融采取線上信息披露，容易產生投融資各方之間的信息不對稱現(xiàn)象，加之部分投融資主體利用平臺發(fā)布違規(guī)信息，缺乏道德素養(yǎng)進行詐騙，使得平臺內的金融項目可靠性大打折扣。

圖3 芡實殼提取物對DPPH·的清除率

由圖3可看出，對DPPH·清除率隨著芡實殼提取物濃度的增大，其量效關系不明顯，1mg/mL濃度提取物的清除能力達59%左右，其清除效果遠小于維生素C，且各提取物的清除效果差異不大。

2.4 芡實殼提取物還原能力的測定

不同濃度芡實殼提取物溶液的還原能力如圖4所示。

圖4 芡實殼提取物的還原能力

樣品提供的還原基團越多，F(xiàn)e3+被還原成Fe2+越多，吸光值就越大。由圖4看出，芡實殼提取物的還原能力隨其濃度的增加而增大，其中100%乙醇提取物的清除能力與維生素C的清除能力相當，遠高于其他提取物。各提取物清除能力為100%乙醇>50%乙醇>75%乙醇>水提物。

2.5 芡實殼提取物的抗脂質過氧化性實驗

抗脂質過氧化活性的測定采用亞油酸體系法，于234nm下測定吸光度，計算其抗氧化活性，其結果如圖5所示。

圖5 芡實殼提取物的抗脂質過氧化活性

2.6 芡實殼提取物對羥基自由基引發(fā)DNA氧化損傷的抑制作用

硫代巴比妥酸(TBA)可與丙二醛(MDA)類似物反應生成粉紅色物質，于532nm處測定其吸光度，結果如圖6所示。

圖6 芡實殼提取物對羥基自由基引發(fā)DNA氧化損傷的抑制率

由圖6看出，各提取物抑制率均隨著濃度的增加而增加，75%乙醇提取物的抑制效果高于同濃度維生素C，各提取物抑制效果為75%乙醇>水提物>50%乙醇，100%乙醇提取物的抑制效果最低。實驗說明75%芡實殼提取物最能有效抑制MDA生成，能夠對DNA上脫氧核糖的氧化損傷發(fā)揮抑制作用。

3 結論

通過測定芡實殼提取物溶液對超氧陰離子自由基、羥基自由基、DPPH自由基的清除率、還原能力、抗脂質過氧化活性以及對DNA氧化損傷抑制的影響，結果表明芡實殼提取物溶液具有較強的綜合抗氧化能力，但是不同提取物其具有不同的抗氧化能力，芡實殼具有進一步開發(fā)為抗氧化保健食品或藥品的可能，為芡實殼綜合開發(fā)利用提供新的領域。

［1］Lee Si Eun，Ju Eun Mi，Kim Jeong Hee.Antioxidant activity of extracts from Euryale ferox seed［J］.Exp Mol Med，2002，34(2):100－106.

［2］Anju Puri，R Sahai，Kiran L，et al.Immunostimulant activity of dry fruits and plant materials used in Indian traditional medical system for mothers after child birth and invalids［J］.Journal of Ethnopharmacology，2000，71:89－92.

［3］Samarjit Das，Peter Der，Utpal Raychaudhuri，et al.The effect of Euryale ferox(makhana)，an herb of aquatic origin，on myocardial ischemic reperfusion injury ［J］.Molecular and Cellular Biochemistry，2006，289:55－63.

［4］陳衛(wèi)軍，曹煒.麥胚提取物的抗氧化性研究［J］.食品科學，2004，25(10):294－300.

［5］Shu－YaoTsa，Shih－Jeng Huang，Jeng－Leun Mau.Anti oxidant properties of hot water extracts from Agrocybe cylindracea［J］.Food Chemistry，2006，98(6):670－677.

［6］朱振寶，田賓，易建華.金銀花不同提取物的油脂抗氧化效果研究［J］.食品與發(fā)酵工業(yè)，2008，34(2):69－72.

［7］Gow Chin Yen，Chen Hui Yin.Antioxidant activity of various tea extracts in relation to their antimutagenicity［J］.Agric＆Food Chem，1995，43(1):27－32.

［8］張赟彬，龔鋼明，戴妙妙.甘薯多酚粗提取液的抗氧化活性研究［J］.中國糧油學報，2007，22(5):76－79.

［9］曹煒，陳衛(wèi)軍，鄭曉暉，等.一種評價天然抗氧化劑對羥自由基致DNA損傷保護作用的改進方法［J］.營養(yǎng)學報，2008，30(1):74－77.

Study on anti－oxidative activity
of Euryale ferox Salisb.shells extracts

SUN Wen－kai1，YUAN Huai－bo1，*，XU Wei2，QI Liang－h(huán)ao3
(1.College of Biotechnology and Food Engineering，Hefei University of Technology，Hefei 230009，China;
2.Agriculture Committee of Huainan City，Huainan 232001，China;3.Huainan Fenghao Aquatic Vegetables Farmer Specialized Cooperative Society，Huainan 232001，China)

The research aimed to study anti－oxidative activity from Euryale ferox Salisb.shells extracts.The scavenging abilities on superoxide anion radicals，hydroxyl radicals，DPPH radicals，reducing activity，anti－lipid peroxidation activity were studied.The protection on the damage of DNA chain induced by hydroxyl radical was studied by thiobarbituric acid spectrophotometry.The results showed that Euryale ferox Salisb.shells extracts could eliminate free radical including·OH，O－2·，DPPH·，it had reducing activity.And it could also inhibit anti－lipid peroxidation and the damage of DNA induced by hydroxyl radical.Results indicated Euryale ferox Salisb.shells extracts possessed anti－oxidative activity.

Euryale ferox Salisb.shells;extracts;antioxidant

TS201.1

A

1002－0306(2011)04－0100－03

2010－01－29 *通訊聯(lián)系人

孫文凱(1986－)，男，碩士研究生，主要從事食品科學研究。

安徽省教育廳自然科學研究項目(KJ2009B063);安徽省淮南市科技攻關項目(2009A06022)。