野葛葛根素積累動(dòng)態(tài)的研究

潘玲玲1，任江劍2，江建銘2*

（1.浙江省景寧縣鶴溪鎮(zhèn)農(nóng)技站，浙江 景寧 323500；2.浙江省中藥研究所，浙江 杭州 310023）

野葛葛根素積累動(dòng)態(tài)的研究

潘玲玲1，任江劍2，江建銘2*

（1.浙江省景寧縣鶴溪鎮(zhèn)農(nóng)技站，浙江 景寧 323500；2.浙江省中藥研究所，浙江 杭州 310023）

目的：研究野葛塊根中葛根素積累的動(dòng)態(tài)規(guī)律，為確定野葛藥材的最佳采收期以及野葛藤蔓的綜合利用提供理論依據(jù)。方法采用HPLC測定不同生長年限、不同采收時(shí)期的野葛塊根及藤蔓葛根素含量。結(jié)果：野葛塊根中葛根素動(dòng)態(tài)積累有一定規(guī)律，葛根素含量以4～5年生塊根最高，6年生塊根含量降低；每年的11～12月塊根中葛根素含量達(dá)到全年最高值；當(dāng)年生藤蔓含葛根素約1.4%。結(jié)論：野葛的最佳采收期為11月下旬至翌年3月中旬，采挖4年生塊根為宜；此時(shí)藤蔓葛根素含量不低，值得作為提取葛根素的另一重要原料綜合利用。

野葛；葛根素；積累動(dòng)態(tài)；高效液相色譜法

野葛Puerarialobata（Willd.）Ohwi為豆科葛屬植物，為藥材葛根的原植物，以干燥塊根入藥，具有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通經(jīng)活絡(luò)，解酒毒的功能。主治外感發(fā)熱頭痛，項(xiàng)背強(qiáng)痛，口渴，消渴，麻疹不透，熱痢，泄瀉，眩暈頭痛，中風(fēng)偏癱，胸痹心痛，酒毒傷中［1］。近年來的研究表明，其內(nèi)含的主要活性物質(zhì)葛根素具有擴(kuò)張血管和冠狀動(dòng)脈的作用，對高血壓、冠心病、高脂血癥等具有獨(dú)特的療效，并已廣泛應(yīng)用于心血管系統(tǒng)疾病的治療［2-3］。伴隨著藥材葛根用量的快速增加，野生資源已不能滿足生產(chǎn)所需，規(guī)范化種植日趨迫切。本研究以浙江省景寧縣的野葛生產(chǎn)用種為材料，對葛根素的積累動(dòng)態(tài)進(jìn)行了分析，以期確定最佳采收年限及采收時(shí)期，為野葛的規(guī)范化種植及藤莖的綜合利用提供理論依據(jù)。

1 儀器與試藥

安捷倫H P1100系列高效液相色譜儀及安捷倫化學(xué)工作站，DAD檢測器；葛根素對照品（中國藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)110752-200209）；乙醇為分析純，甲醇為色譜醇，重蒸餾水。測定樣品來自浙江省景寧縣鶴溪鎮(zhèn)野葛規(guī)范化種植試驗(yàn)基地，經(jīng)本所教授級(jí)高級(jí)工程師俞旭平鑒定為豆科葛屬植物野葛Pueraria lobata（Willd.）Ohwi的塊根與藤莖。

2 葛根素含量測定

參照《中國藥典》2010年版一部葛根標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下含量測定法測定［1］。色譜柱為迪馬公司C（4.6mm×18250mm，5μm）。

為了確保測定結(jié)果的準(zhǔn)確，同時(shí)進(jìn)行了線性考察、穩(wěn)定性試驗(yàn)和加樣回收試驗(yàn)，結(jié)果表明葛根素在0.176～0.880μg呈良好的線性關(guān)系，回歸方程Y＝3855.6X＋8.93，r＝0.99998；葛根素峰面積在10h內(nèi)穩(wěn)定，RSD＝1.1%；試驗(yàn)平均加樣回收率10 1.73%，R SD＝1.24%。測定色譜圖見圖1，樣品測定結(jié)果見表1、表2。

圖1 野葛樣品與葛根素HPLC圖

3 結(jié)果與分析

3.1 生長年限與植株部位對葛根素積累動(dòng)態(tài)的影響

表1為11月中旬采集的野葛不同生長年限與植株部位樣品葛根素含量測定結(jié)果。

表1 野葛不同生長年限與植株部位葛根素含量測定/%

從表1可以看出，野葛生長年限對其塊根葛根素的積累存在明顯的影響。一般在種植2年后其塊根葛根素含量即可達(dá)到《中國藥典》［1］規(guī)定。同時(shí)觀察到，在種植5年內(nèi)，塊根中葛根素含量隨種植年限的增加逐年提高，至種植第五年塊根葛根素含量達(dá)到最大值為3.95%；年度間塊根葛根素含量分別提高77.55%，28.74%，14.29%，2.86%，呈現(xiàn)前期增加較快，后期相對緩慢的提高過程。種植第六年，塊根葛根素含量開始下降，比種植第五年的塊根葛根素含量降低5.82%。

植株不同部位間，葛根素含量的積累也存在較大的區(qū)別。3年生塊根葛根素含量為3.36%，是3年生塊根當(dāng)年抽生的藤蔓葛根素含量1.35%的1.49倍，而3年生塊根當(dāng)年抽生的葉片中未檢測出葛根素；在塊根中，韌皮部的葛根素積累也明顯高于木質(zhì)部，其3年生塊根韌皮部的葛根素的含量比木質(zhì)部高99.0 7%，表明野葛葛根素主要積累于塊根，而塊根韌皮部又是葛根素積累的主要部位。

3.2 塊根中葛根素積累動(dòng)態(tài)年內(nèi)變化

表2為野葛種植第三年不同月份采收的塊根葛根素含量測定結(jié)果。

從表2中可以發(fā)現(xiàn)，塊根中葛根素的積累有一個(gè)相對平穩(wěn)、稍降、上升、再稍降、再上升、再平穩(wěn)的動(dòng)態(tài)變化過程。在植株休眠期的1～3月份，塊根中葛根素的含量處于平穩(wěn)期，其最大變幅僅為1.42%；4～5月，隨著植株新芽的萌動(dòng)，藤蔓、葉的生長，塊根中葛根素的含量出現(xiàn)下降，月下降幅度分別為5.30%和4.10%；進(jìn)入6月，植株地上部藤蔓、葉的生長基本定型，塊根中葛根素的含量也呈明顯的上升趨勢；6、7月，塊根中葛根素的含量比5月份月均提高13.0 4%；9月中旬后，植株生長進(jìn)入塊根快速膨大期，塊根中葛根素的含量又出現(xiàn)了輕微的下降；11月，隨著氣溫的下降，植株又進(jìn)入休眠狀態(tài)，塊根中葛根素的含量又處于一個(gè)相對穩(wěn)定期。同時(shí)，也可以看出，3年生野葛植株經(jīng)過1年的生長，其塊根中葛根素的含量平均提高了19.96%。

表2 不同采收時(shí)間野葛塊根中葛根素含量測定/%

4 討論

4.1 最佳采收年限的確定

本試驗(yàn)結(jié)果表明，野葛塊根中葛根素年間積累呈現(xiàn)快速增長、緩慢提升、逐步下降的動(dòng)態(tài)變化過程。1～4年生塊根葛根素含量年間增長幅度均在14%以上，提高幅度顯著；5年生塊根雖然葛根素含量達(dá)到最高值3.95%，但僅比4年生塊根提高2.86%，差異不明顯；而6年生塊根葛根素含量反而有所下降，因此，從葛根素積累動(dòng)態(tài)變化規(guī)律與經(jīng)濟(jì)性考慮，野葛塊根的最佳采收年限以4年生較為適宜。

4.2 最佳采收時(shí)期的確定

試驗(yàn)結(jié)果表明，野葛塊根中葛根素的積累在年內(nèi)有一個(gè)相對平穩(wěn)、稍降、上升、再稍降、再上升、再平穩(wěn)的動(dòng)態(tài)變化過程。在植株休眠期的11月下旬～3月中旬，塊根中葛根素的含量處于平穩(wěn)期；而在4～10月的生長期，塊根中葛根素的積累呈現(xiàn)稍微波動(dòng)但總體上升的動(dòng)態(tài)變化。因此，野葛塊根最佳采收時(shí)期以葛根素含量相對穩(wěn)定的11月下旬～翌年3月中旬為宜。

4.3 藤蔓的綜合利用

野葛以塊根入藥，中藥名為葛根。目前，以葛根為原料提取制備的葛根素注射劑已廣泛應(yīng)用于臨床。本試驗(yàn)結(jié)果表明，野葛當(dāng)年生藤蔓中葛根素含量約為1.4%，雖然含量不及塊根，但因來源廣、采收方便，且每年可收。因此，利用野葛藤蔓來提取制備葛根素不失為一種有效途徑，既可充分利用資源，同時(shí)也可提高野葛種植農(nóng)戶的經(jīng)濟(jì)收益，值得關(guān)注。

［1］國家藥典委員會(huì).中國藥典［S］.一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：312-313.

［2］趙新芳，邊文貴，張俊卿.葛根素治療心血管疾病的藥理和臨床研究［J］.陜西中醫(yī)，2006，27（8）：10 18-10 20.

［3］吳慧軒.葛根素注射液治療高血壓（肝陽上亢癥）臨床研究［J］.天津中醫(yī)藥，2004，21（2）：15-17.

Study on the Regulation of Dynamic Accumulation of the Puerarin of Pueraria lobata

PAN Ling-ling1RENJiang-jian2，JIANG Jian-ming2
（1．Jingning Hexi Agricultural Technology Station，Jingning 323500，China；2.Zhejiang Institute of Chinese materia medica，Hang zhou 310023，China）

Objective：To study the dynamic accumulation regulation of the puerarin of Pueraria lobata，so to provide the scientific basis for optimal harvest time and use of the vine of Pueraria lobata.MethodsPuerarin of the vine and the block-root from different growth years and gathering season were determined by HPLC.Results：The dy-namic accumulation of puerarin in the block-root of Pueraria lobata is had regularity in the certain ext end.The contents of puerarin in samples were the highest in4～5 year old block-root，and that was decreasing in 6-year old block root.The content of puerarin was mostly the highest in November and December in every year.For one-year old vine，the contents of puerarin were1.4%.Conclusion：According to the accumulation pattern of the puerarin in Pueraria lobata，the optimal harvest time is from the late November to mid-March the following，the 4 year old block-root.

Puerari alobata；Puerarin；Dynamic accumulation；HPLC

國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2006BAI06A11-04）

*江建銘，Tel：（0571）85241074，E-mail：jmboat＠163.com

2011-0 5-26）