黃連與甲氧芐啶聯(lián)合體外抗菌作用的實(shí)驗(yàn)研究

牛美蘭(通訊作者) 張偉 何雄文

(1.河南黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院; 2.河南省中醫(yī)藥研究院附屬醫(yī)院外科 鄭州 450063)

黃連具有清熱燥濕,瀉火解毒之功效[1]。黃連還具有對抗細(xì)菌毒素,降低金黃色葡萄球菌凝固酶、溶血素效價(jià),降低大腸桿菌的毒力的解毒作用?，F(xiàn)代藥理研究表明：黃連具有廣譜抗菌作用,對多種細(xì)菌、結(jié)核桿菌及真菌等有抑制或殺滅作用,是目前臨床應(yīng)用較為廣泛的抗菌中藥之一。甲氧芐啶(TMP)別名磺胺增效劑,本品為白色或類白色結(jié)晶性粉末,無臭,味苦。本品在氯仿中略溶,在乙醇或丙酮中微溶,在水中幾乎不溶;在冰醋酸中易溶。TMP是合成抗菌藥,抗菌譜與磺胺藥類似,有抑制二氫葉酸還原酶的作用,但細(xì)菌較易產(chǎn)生耐藥性,很少單獨(dú)使用?；前匪巹t抑制二氫葉酸合成酶。其抗菌作用較弱,一般不單獨(dú)使用。但甲氧芐啶是強(qiáng)大的細(xì)菌二氫葉酸還原酶抑制劑[2]。臨床上TMP常與SMZ合用治療呼吸系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、消化等部位的感染[3]。本組實(shí)驗(yàn)采用瓊脂稀釋法對比研究黃連、TMP及黃連與TMP聯(lián)用的體外抗菌作用。

表1 各供試液抗菌作用結(jié)果(試管號)

1 材料

1.1 藥品及配制

(1)取干燥黃連生藥(購于河南中醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院中藥房)10g,常規(guī)煎煮成50mL藥液。取10mL加入無菌普通肉湯培養(yǎng)基10mL,搖勻即得200mg/mL的黃連供試藥液。

(2)TMP購自焦作市醫(yī)藥原料貿(mào)易有限公司,質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：CP2005/BP2002/USP26/EP4。稱取50mg TMP置于試管中,加入10mL肉湯微熱溶解、搖勻,得5mg/mL的TMP藥液供實(shí)驗(yàn)備用。

(3)取上述黃連煎劑10mL,加入100mg TMP及10mL肉湯培養(yǎng)基,微熱溶解后搖勻得含黃連與TMP分別為200mg/mL、5mg/mL的復(fù)方供試藥液。

1.2 實(shí)驗(yàn)中所用菌種,如綠膿桿菌、金葡萄菌、福氏痢疾桿菌、大腸桿菌、肺炎球菌均采用中央標(biāo)準(zhǔn)株(購于中國藥品生物制品檢定所)。分別取上述菌株的普通瓊脂平板24h培養(yǎng)物,用無菌生理鹽水將菌液濃度調(diào)整為1cfu/mL×108cfu/mL,備用。

2 方法

采用試管內(nèi)藥液稀釋法試驗(yàn)：無菌試管3排,每排15管,除每排的第14管外,其余各管中均加入5mL的無菌肉湯,在每排試管的第1管分別加入5mL上述3種供試藥液;混勻后吸取5mL加入到第2個(gè)試管中,照此類推第13個(gè)試管;混合搖勻后吸出5mL藥液加入到第14管中。取每排的第14管作無菌陰性對照;第15管作無藥陽性對照。然后在各管中加5mL熱無菌肉蛋白胨瓊脂,搖勻趁熱依次傾入到同一型號的無菌培養(yǎng)皿中,放置使瓊脂冷凝。將其余1～15號培養(yǎng)皿分別劃分為5分近等的區(qū)域并分別進(jìn)行編號(14培養(yǎng)皿除外),然后在每個(gè)區(qū)域中分別加入5種經(jīng)10h培養(yǎng)的各含菌培養(yǎng)液0.03mL,在37℃的環(huán)境下培養(yǎng)18～24h,觀察細(xì)菌培養(yǎng)結(jié)果,其判定指標(biāo)是有無細(xì)菌的生長。接種區(qū)光滑無可見菌落表明具有抗菌作用;接種區(qū)可見大片細(xì)菌生長則表明吳抗菌作用。

3 結(jié)果

黃連、TMP及黃連和TMP復(fù)方液對5種細(xì)菌的抗菌作用,見表1。

4 討論

體外試驗(yàn)證明,黃連對溶血性鏈球菌、腦膜炎球菌、肺炎雙球菌、霍亂弧菌、炭疽桿菌、痢疾桿菌、白喉?xiàng)U菌、枯草桿菌等均有抑制作用。本組實(shí)驗(yàn)表明：對于金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、痢疾桿菌、福氏痢疾桿菌和肺炎雙球菌,聯(lián)合運(yùn)用黃連與TMP后較單用黃連或但用TMP抗菌作用明顯增大,黃連聯(lián)合TMP后,對實(shí)驗(yàn)的5種細(xì)菌抗菌活性均明顯增強(qiáng),表明說明黃連與TMP聯(lián)合運(yùn)用用具有明顯抗菌作用。

[1] 凌一揆.中藥學(xué)[M].上海：上?？萍汲霭嫔?2008：553.

[2] 顏光美.藥理學(xué)[M].北京：高等教育出版社,2009：432.

[3] 王開貞.藥理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社,2010：257.