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    鹽度突變對半滑舌鰨血漿滲透壓和鰓絲Na+/K+-ATP酶活性的影響

    2011-09-24 08:11:36田相利王國棟董雙林房景輝
    海洋科學(xué) 2011年2期
    關(guān)鍵詞:舌鰨滲透壓鹽度

    田相利, 王國棟 董雙林 房景輝 劉 營

    (1. 中國海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院 教育部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗室, 山東 青島 266003; 2. 盤錦光合水產(chǎn)有限公司,遼寧 盤錦, 124200)

    鹽度突變對半滑舌鰨血漿滲透壓和鰓絲Na+/K+-ATP酶活性的影響

    田相利1,2, 王國棟1, 董雙林1, 房景輝1, 劉 營1

    (1. 中國海洋大學(xué) 水產(chǎn)學(xué)院 教育部海水養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗室, 山東 青島 266003; 2. 盤錦光合水產(chǎn)有限公司,遼寧 盤錦, 124200)

    研究了半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)由鹽度30突變至0、10、20、35和40鹽度后血漿滲透壓和鰓絲Na+/K+-ATP酶活性的變化。結(jié)果表明, 鹽度對半滑舌鰨血液滲透壓和鰓絲Na+/K+-ATP酶活性均有顯著影響(P<0.05)。鹽度突變后, 各處理組的血液滲透壓和鰓絲Na+/K+-ATP酶活性均隨鹽度的變化而相應(yīng)地上升和下降, 且其變化幅度與鹽度的變化幅度直接相關(guān)。各處理組血液滲透壓在經(jīng)歷鹽度變化6 d內(nèi)有峰值變化, 峰值出現(xiàn)在2 d時, 6 d后血液滲透壓趨于穩(wěn)定; 而鰓絲Na+/K+-ATP酶活性在經(jīng)歷鹽度變化9 d時調(diào)節(jié)至穩(wěn)定狀態(tài), 峰值則出現(xiàn)在6 d時, 峰值大小亦與鹽度的變化幅度正相關(guān)。本研究表明半滑舌鰨對鹽度可能具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力。

    半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis);鹽度; 血液滲透壓; 鰓絲Na+/K+-ATP酶活性

    生活在淡水或海水中的各種硬骨魚類, 其體液滲透濃度比較接近且相對穩(wěn)定, 而其生活的水環(huán)境鹽度卻相差很大, 魚類為了維持體內(nèi)一定的滲透濃度必須進(jìn)行滲透調(diào)節(jié), 這樣, 魚類調(diào)節(jié)滲透能力的大小就決定了它們對水環(huán)境鹽度變化的耐受力。不同魚類對于鹽度變化的耐受力差異很大:大菱鲆(Scophthalmus maximus)可以忍受較大而快速的環(huán)境鹽度波動, 但其適應(yīng)的鹽度低限在鹽度5左右[1], 而潘魯青等[2]的研究則表明褐牙鲆(Paralichthys olivaceu)對最低鹽度為 6的低滲環(huán)境具有較強(qiáng)的適應(yīng)能力。目前, 國內(nèi)外對魚類的滲透調(diào)節(jié)研究已有許多相關(guān)報道, 這些研究中, 大多以血漿滲透壓和鰓絲Na+/K+-ATP酶作為評價魚類滲透調(diào)節(jié)能力的指標(biāo)[1-6]。半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis)為中國近海常見的暖溫性底棲大型魚類[7], 主要分布在中國黃海和渤海。半滑舌鰨個體大, 生長速度快, 肉味鮮美, 是一種名貴經(jīng)濟(jì)海水魚類, 由于該魚具有廣溫、廣鹽等特點(diǎn), 因此是一種理想的增養(yǎng)殖種類。目前, 盡管國已內(nèi)有半滑舌鰨低鹽度養(yǎng)殖的實(shí)踐, 但國內(nèi)外關(guān)于其滲透調(diào)節(jié)的研究尚未見報道。本研究設(shè)定了不同的突變鹽度水平, 通過測定半滑舌鰨幼魚的血液滲透壓和鰓絲 Na+/K+-ATP酶活性, 對其滲透調(diào)節(jié)能力進(jìn)行了研究, 初步探討了半滑舌鰨對鹽度的適應(yīng)性, 從而可為其在不同鹽度下的養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗魚的來源

    實(shí)驗用半滑舌鰨幼魚購自江蘇省海洋水產(chǎn)研究所, 體質(zhì)量 12.67 g±2.87 g, 全長 13.52 cm±1.65 cm,均為健康個體。

    1.2 實(shí)驗魚的馴化

    實(shí)驗魚運(yùn)到后, 在室內(nèi)24℃±0.5 ℃馴養(yǎng)10 d左右, 使之適應(yīng)實(shí)驗室的條件。馴養(yǎng)期間每天于 7:00和17:00各投喂1次, 日換水率50%。

    1.3 實(shí)驗設(shè)計與管理

    1.3.1 實(shí)驗設(shè)計

    本實(shí)驗設(shè)置了 6個不同鹽度突變水平, 將馴養(yǎng)的半滑舌鰨幼魚按照隨機(jī)抽取的方式, 由鹽度30(以S30表示)分別突變到 0、10、20、35和 40(分別以S0、S10、S20、S35和S40表示), 每個處理分別設(shè)置3個重復(fù)。實(shí)驗過程中, 按照時間0、1、6、12 h、1、2、3、6、9和12 d的時間間隔取樣, 每次每個處理隨機(jī)取魚3尾。

    1.3.2 實(shí)驗管理

    實(shí)驗用水族箱為玻璃水族箱(規(guī)格為 55 cm×30 cm×35 cm, 50 L), 每箱隨機(jī)放魚30尾, 水族箱用紗窗蓋住, 防止魚跳出。實(shí)驗期間保持正常換水, 換水前一天調(diào)至適宜的鹽度。低鹽度水由經(jīng)過充分曝氣的砂濾海水(鹽度 30)和井淡水(鹽度為 0)調(diào)配而成,高鹽度水由砂濾海水加海水素調(diào)配而成。

    每天7:00和17:00各投喂一次日清紅丸配合飼料, 其營養(yǎng)成分見表1。每次投喂1.5 h后, 將殘餌和糞便吸出。實(shí)驗期間, 水溫控制在24℃左右, 光照周期為12 L:12 D, 24 h時連續(xù)充氣。

    1.4 血漿的取樣和滲透壓的測定

    用1 mL注射器從半滑舌鰨腹部尾靜脈插入抽取血液, 血液抽出后置于冷的 1.5 mL離心管中, 立即取20 μL用FISKE 210型冰點(diǎn)滲透壓計測定滲透壓。滲透壓用滲透濃度(即溶解顆粒數(shù)表示的濃度)來表示, 單位為mmol/kg。

    1.5 鰓絲Na+/K+-ATP酶活性的測定

    酶液的制備: 取魚兩側(cè)鰓絲, 用預(yù)冷蒸餾水(0~4℃)洗凈、濾紙吸干后置于10 mL冰冷酶提取液(0.25 mmol/L蔗糖, 6 mmol/LEDTA-Na2, 10 mmol/L tris, 0.1%脫氧膽酸鈉, pH為7.5)中, 用高速勻漿器在冰水浴中以20 000 r/min轉(zhuǎn)速勻漿5 min, 勻漿液在高速冷凍離心機(jī)(0~1℃, 10 000 r/min)中離心30 min,取上清液再離心 10 min, 將所得上清液冷藏(0~2℃)保存, 在8 h內(nèi)測定Na+/K+-ATP酶活力。

    酶蛋白含量采用考馬斯亮藍(lán)法測定。Na+/K+-ATP酶活力測定參考Whealty等[8]的方法, 通過測定全酶反應(yīng)體系和Na+/K+-ATP酶活力被抑制反應(yīng)體系中底物 ATP-Na2釋放出無機(jī)磷(Pi)量的差值來計算,酶活力單位采用mmol/(g·h)表示。

    1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

    所得數(shù)據(jù)用統(tǒng)計軟件SPSS13.0進(jìn)行分析, 不同處理組間使用單因素方差分析和Duncan多重比較進(jìn)行分析, 以P<0. 05作為差異顯著性水平。

    表1 飼料的含能量及營養(yǎng)組成Tab. 1 Energy content and composition of the experimental diet

    2 結(jié)果

    2.1 不同鹽度下半滑舌鰨血液的滲透壓變動

    鹽度對半滑舌鰨血液滲透壓的影響情況見圖 1,鹽度突變對半滑舌鰨的血液滲透壓有顯著影響(P<0.05)。鹽度變化后, 高鹽處理組下半滑舌鰨血液滲透壓顯著升高, 低鹽處理組的則明顯降低, 且變化幅度隨鹽度突變范圍的增大而增大, 在6 d內(nèi)有峰值變化, 峰值出現(xiàn)在2 d左右。6 d后各處理組半滑舌鰨血液滲透壓趨于穩(wěn)定。實(shí)驗結(jié)束時, 不同鹽度下半滑舌鰨血漿滲透壓數(shù)值呈現(xiàn)出 3個不同的水平,即鹽度35和40, 20和30以及0和10, 其數(shù)值相互之間差異顯著(P<0.05), 鹽度為35和40時其酶活性最高, 鹽度為0和10時其酶活性最低。

    圖1 鹽度對半滑舌鰨血液滲透壓的影響Fig. 1 The effect of salinity on the plasma osmotic pressure ofCynoglossus.semiliaevis

    2.2 不同鹽度下半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶的活性變動

    由圖 2可見, 鹽度對半滑舌鰨鰓絲 Na+/K+-ATP酶活性有顯著影響(P<0.05), 鰓絲 Na+/K+-ATP酶活性隨鹽度的升高和降低而相應(yīng)的升高和降低, 且變化幅度總體上隨鹽度變化范圍的增大而增大。鹽度突變9 d內(nèi), 各處理組鰓絲Na+/K+-ATP酶活性出現(xiàn)峰值變化, 且高鹽處理組和低鹽處理組的鰓絲Na+/K+-ATP酶活性在6 d左右時分別出現(xiàn)最大值和最小值, 在9 d之后各處理組半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶活性趨于穩(wěn)定。實(shí)驗結(jié)束時, 不同鹽度下半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶活性也呈現(xiàn)出3個不同的水平, 即鹽度35和40, 10、20和30以及0, 其數(shù)值相互之間差異顯著(P<0.05), 鹽度為35和40時其酶活性最高, 鹽度為0時其酶活性則最低。

    圖2 鹽度對半滑舌鰨鰓絲Na+/ K+-ATP酶活性的影響Fig. 2 The effect of salinity on gill Na+/ K+-ATPase activity ofCynoglossus semiliaevis

    3 討論

    3.1 鹽度對半滑舌鰨血液滲透壓的影響

    為了維持體液離子濃度和滲透壓平衡, 魚類形成了較高級的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制, 滲透壓調(diào)節(jié)主要由鰓、腎和腸對離子和水的轉(zhuǎn)運(yùn)來完成。在低鹽度水體中, 環(huán)境滲透壓低于魚體的體液滲透壓, 魚會被動吸收過多的水分并丟失離子, 此時魚類通過排出低滲尿和增加鰓對離子的攝入來維持體液滲透平衡。而在高鹽度水體中, 環(huán)境滲透壓高于體液滲透壓,魚會通過體表和鰓被動丟失水分, 此時魚會通過吞食高鹽水, 在保存水分的同時, 由鰓排除被動攝入的過多 Na+和 Cl-離子, 腎排除 Mg2+、SO42-、Ca2+離子和少量水分, 從而維持體液的滲透平衡[6,9-10]。在魚類對鹽度的適應(yīng)過程中, 一般分為兩個階段:一是鹽度變化后短期內(nèi), 魚類的血漿滲透壓與鹽度正相關(guān)地迅速升高或降低, 這一變化隨即刺激魚體滲透調(diào)節(jié)生理機(jī)制的改變; 二是滲透壓向變化前狀態(tài)的恢復(fù)的過程。但魚類滲透壓變化的程度和恢復(fù)所需要的時間受種間差異、鹽度變化范圍的大小以等多種因素的影響差異較大。如墨西哥灣鱘(Acipenser oxyrinchus)[11], 由淡水向鹽度25突變后24 h即開始滲透壓的恢復(fù), 96 h后基本達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài); 將黑棘鯛(Acanthopasgrus butcheri)[12]由鹽度 36變化至 12、24、48、60后3個月, 鹽度12、24、48組即處于穩(wěn)定狀態(tài), 而鹽度為6處理組在6個月時才恢復(fù)。而褐牙鲆幼魚由鹽度30向24、18、12、6適應(yīng)時, 6 d后血漿滲透壓達(dá)到穩(wěn)定狀態(tài)[2]。本實(shí)驗結(jié)果則顯示, 鹽度突變后2 d內(nèi), 半滑舌鰨血液滲透壓隨鹽度的升高和降低而迅速的相應(yīng)升高和降低, 這可能是其對水環(huán)境鹽度的被動適應(yīng), 之后魚體自身生理機(jī)制的作用下,血液滲透壓逐漸恢復(fù), 到6 d左右時則趨于穩(wěn)定。這一結(jié)果說明半滑舌鰨對鹽度有較強(qiáng)的適應(yīng)能力, 在很大范圍的鹽度突變后仍能調(diào)節(jié)機(jī)體適應(yīng)外界水環(huán)境。

    真骨魚類能夠調(diào)節(jié)體內(nèi)液體環(huán)境的離子濃度使之維持在一個很小的范圍內(nèi)[13], 廣鹽性魚類在這方面表現(xiàn)得尤為明顯。通常不同種類對內(nèi)環(huán)境滲透壓變化范圍的要求略有不同, 但普遍符合血漿滲透壓與鹽度之間呈正相關(guān)這一關(guān)系[11-14]。本研究結(jié)果與這一規(guī)律基本相似, 半滑舌鰨血漿滲透壓最終數(shù)值呈現(xiàn)出3個不同的水平, 即鹽度35和40、20和30以及 0和 10。這一結(jié)果表明, 盡管半滑舌鰨可以通過機(jī)體對血液滲透壓的調(diào)節(jié)來適應(yīng)外界環(huán)境的較大范圍的鹽度變化, 但其最終的調(diào)節(jié)程度還是與環(huán)境鹽度的變化范圍直接相關(guān)的。

    3.2 鹽度對半滑舌鰨鰓絲 Na+/K+-ATP酶活性的影響

    鰓是魚類滲透調(diào)節(jié)和離子運(yùn)輸?shù)闹饕鞴? 鰓上皮的泌氯細(xì)胞中含有大量Na+/K+-ATP酶, 該酶的含量和活力一般隨環(huán)境鹽度變化而發(fā)生變化[15-16]。無論是淡水魚還是海水魚, Na+/K+-ATP酶都是其氯細(xì)胞離子轉(zhuǎn)運(yùn)的關(guān)鍵酶[3]。在環(huán)境鹽度發(fā)生變化時,魚類鰓絲Na+/K+-ATP酶活力會升高或降低[3-5], 這種變化與鰓氯細(xì)胞的變化以及Na+/K+-ATP酶的分泌活動密切相關(guān), 是鰓對體內(nèi)外 Na+和 Cl-等離子運(yùn)輸需要的適應(yīng)[3-4,10,17]。本研究結(jié)果表明, 半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶活性也隨鹽度的變動而相應(yīng)的升高和降低, 且其升降程度隨鹽度變化范圍的直接相關(guān)。鹽度突變9 d內(nèi), 各處理組鰓絲Na+/K+-ATP酶活性出現(xiàn)峰值變化, 且高鹽處理組和低鹽處理組的鰓絲Na+/K+-ATP酶活性在6 d左右時分別出現(xiàn)最大值和最小值, 在 9 d之后各處理組半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶活性趨于穩(wěn)定。從時間進(jìn)程上看, 半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶活性的變化滯后于血漿滲透壓的變化。這可能由于半滑舌鰨的滲透調(diào)節(jié)并不完全是由鰓絲Na+/K+-ATP酶來完成的, 可能還有其他器官對滲透壓進(jìn)行調(diào)節(jié)。另外, 本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn),半滑舌鰨鰓絲Na+/K+-ATP酶活性穩(wěn)定后基本與環(huán)境中鹽度水平呈正相關(guān), 但呈現(xiàn)出3個不同的水平, 即鹽度35和40, 10、20和30以及0, 其數(shù)值相互之間差異顯著(P<0.05)。其中, 以鹽度 35和 40下Na+/K+-ATP酶活性最高, 鹽度 0下則為最低, 這一點(diǎn)與褐牙鲆的相關(guān)研究不同[2]。褐牙鲆幼魚在適應(yīng)相應(yīng)的鹽度后, 其鰓絲Na+-K+-ATP酶活力在高滲環(huán)境中與外界鹽度大小呈正比, 但在低滲環(huán)境中與鹽度卻呈反比。這一現(xiàn)象的出現(xiàn)可能與不同魚類的滲透調(diào)節(jié)能力和調(diào)節(jié)方式有著不同甚至是很大的種間差異有關(guān), 具體機(jī)制則尚待進(jìn)一步深入研究。

    3.3 廣鹽性魚類對環(huán)境鹽度的適應(yīng)機(jī)制

    當(dāng)水環(huán)境中鹽度升高時, 魚類面臨的主要問題是如何將吞飲海水而吸收的過多鹽分排除體外。此時廣鹽性魚類對低滲環(huán)境的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制被抑制,而對高滲環(huán)境的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制被激活。廣鹽性魚類進(jìn)入高滲環(huán)境后, 其大量吞飲海水所吸收的 Na+和 Cl-主要通過鰓上皮的氯細(xì)胞排出體外, 以維持體內(nèi)外離子和滲透壓平衡。此時氯細(xì)胞發(fā)生一系列的細(xì)胞學(xué)變化, 如細(xì)胞數(shù)量增多, 直徑增大, 線粒體數(shù)量增加等, 同時, 也包括某些蛋白質(zhì)種類的合成, 其中最重要的便是Na+/K+-ATP酶。隨著水環(huán)境中鹽度的增加, 伴有 Na+/K+-ATP酶活性的增加, 從而為廣鹽性魚類體內(nèi)大量 Na+和 Cl-的排出提供所需的能量。另外, 廣鹽性魚類在海水中對 Na+和 Cl-的外排還受激素的調(diào)控。血漿中皮質(zhì)醇可能是魚類對海水適應(yīng)的調(diào)節(jié)劑, 它可以增加鰓 Na+的轉(zhuǎn)運(yùn)和Na+/K+-ATP酶的活性[6]。

    相反, 當(dāng)水環(huán)境中鹽度降低時, 廣鹽性魚類對高滲環(huán)境的滲透壓調(diào)節(jié)機(jī)制受到抑制, 而對低滲環(huán)境的調(diào)節(jié)機(jī)制則被激活, 從而維持體內(nèi)的較高的滲透壓。當(dāng)廣鹽性魚類進(jìn)入低滲環(huán)境后, Ca2+、Mg2+、SO42-等的排出迅速減少。同時, 鰓上皮排出的 Na+和Cl-亦迅速下降到較低水平。魚體的這些反應(yīng)可能是由某些機(jī)體調(diào)節(jié)機(jī)理影響氯細(xì)胞排出NaCl所致。同時, 某些激素, 如生長激素能通過提高Na+/K+-ATP酶的活性和泌氯細(xì)胞的數(shù)目, 抑制血漿滲透壓和離子濃度的提高, 從而幫助魚類適應(yīng)海水環(huán)境[18-19]; 而催乳激素對魚類適應(yīng)低鹽度環(huán)境起關(guān)鍵作用, 它可以抑制 Na+的排出和 Na+/K+-ATP酶的活性[20]。Persson等[21]研究了成熟的大西洋鮭從海洋到江河產(chǎn)卵洄游過程中各階段的滲透壓調(diào)節(jié)狀況,發(fā)現(xiàn)河口捕獲的鮭魚鰓絲 Na+/K+-ATP酶活性不高,表明該魚已經(jīng)適應(yīng)了低滲環(huán)境, 而在河上游捕獲的鮭魚鰓絲Na+/K+-ATP酶活性則更低, 表明鮭魚在淡水中鰓絲滲透調(diào)節(jié)能力已經(jīng)受到抑制。本研究結(jié)果表明, 半滑舌鰨通過機(jī)體的一系列生理調(diào)節(jié)后, 可以很好適應(yīng)較高鹽度(40)和較低鹽度(0), 是一種典型的廣鹽性魚類。不過, 由于本研究鹽度設(shè)置所限,關(guān)于半滑舌鰨對高鹽度耐受的上限尚待進(jìn)一步研究。

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    Received: Mar., 23, 2010

    Key words:Cynoglossus semilaevis; salinity; plasma osmolality; gill Na+/K+-ATPase activity

    Abstract:Changes in plasma osmolality and gill Na+/K+-ATPase activity of the juvenile tongue sole (Cynoglossus semilaevis) were studied by abruptly shifting the of salinity from 30 to 0, 10, 20, 35 or 40. The results showed that the effects of the salinity on plasma osmolality and activity of gill Na+/K+-ATPase of the fish were significant(P<0.05). The peak values of plasma osmolality appeared on day 2 after the changes of salinity, and the plasma osmolality in each group was stablized on day 6. The similar trends were observed in the changes of gill Na+/K+-ATPase activity. The peak values of gill Na+/K+-ATPase activity appeared on day 6 after the changes of salinity, and was dimished gradually to the stable leve1 at day 9. The results of this study indicated that the tongue sole might have a great capability of acclimation to different salinities.

    (本文編輯:譚雪靜)

    Effects of salinity on plasma osmolality and gill Na+/K+-ATPase activity of the tongue Sole (Cynoglossus semilaevis)

    TIAN Xiang-li1,2, WANG Guo-dong1, DONG Shuang-lin1, FANG Jing-hui1,LIU Ying1
    (1. Key Laboratory of Mariculture, Ministry of Education, Ocean University of China, Qingdao 266003, China;2. Panjin Guanghe Fisheries Company Ltd., Panjin 124200, China)

    S965.215

    A

    1000-3096(2011)02-0027-05

    2010-03-23;

    2010-05-24

    國家“十一五”科技支撐計劃課題項目(2006BAD09A01);國家 863計劃項目(2006AA10Z409); 山東省優(yōu)秀中青年科學(xué)家科研獎勵基金項目(2005BS07004); 新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計劃項目(NCET-08-0503)

    田相利(1971-), 男, 內(nèi)蒙古赤峰人, 副教授, 主要從事養(yǎng)

    殖生態(tài)學(xué)研究, E-mail: xianglitian@ouc.edu.cn

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