集合PCR方法在艾滋病自愿咨詢檢測(cè)（VCT）人群中的應(yīng)用研究

楊朝軍，楊 莉，馬艷玲，陳 玲，包佑紅，閆文云

（云南省疾病預(yù)防控制中心，云南 昆明 650022）

云南省自1989年首次發(fā)現(xiàn)成批HIV感染者以來(lái)，截止2009年10月底，全省共發(fā)現(xiàn)HIV感染者72939人（含外籍3192人）。近幾年由于加大監(jiān)測(cè)檢測(cè)力度，每年新發(fā)現(xiàn)HIV感染者近萬(wàn)人，值得一提的是，艾滋病自愿咨詢檢測(cè)（VCT）已經(jīng)成為發(fā)現(xiàn)HIV感染者的重要途徑和手段。

云南省疾病預(yù)防控制中心VCT門診自2002年開(kāi)展工作以來(lái)，共檢測(cè)20002人份，檢測(cè)出5106（25.5%）份HIV抗體陽(yáng)性，檢測(cè)陽(yáng)性率從2002年的15.6%逐漸上升到2009年的29.6%。在咨詢過(guò)程中，常常有許多求詢者的暴露時(shí)間不足3個(gè)月，尚不能采用常規(guī)的HIV抗體檢測(cè)的方法，而這部分求詢者急于知道感染情況，會(huì)謊稱已過(guò)窗口期。為了及時(shí)發(fā)現(xiàn)處于窗口期的感染者，本研究嘗試采用集合PCR的方法對(duì)VCT人群進(jìn)行HIV核酸檢測(cè)分析，現(xiàn)將情況報(bào)告如下。

1 材料與方法

先把50份HIV抗體篩查為陰性的樣本集合成一份樣本，每10份樣本各取130ul混合組成1個(gè)二級(jí)集合，在5個(gè)二級(jí)集合中各取210ul混合組成1個(gè)一級(jí)集合。再用RT-PCR方法（COBAS Amplicor HIV-1 Monitor 試劑）檢測(cè)一級(jí)集合的HIV RNA，如果結(jié)果為陽(yáng)性，則對(duì)5個(gè)二級(jí)集合檢測(cè) HIV RNA，如果有陽(yáng)性，則對(duì)該集合中的10個(gè)樣本分別檢測(cè)HIV RNA。如果為陰性則判為未檢測(cè)到HIV核酸。

2 結(jié)果

對(duì)2009年HIV抗體篩查為陰性的VCT人群樣本及時(shí)進(jìn)行集合PCR檢測(cè)，即每天分離陰性樣本的血漿并保存于零下20度冰柜中，每周進(jìn)行1次集合并檢測(cè)HIV RNA，以保證及時(shí)發(fā)現(xiàn)感染者并通知陽(yáng)性結(jié)果。在1600份集合樣本中檢測(cè)到1份HIV RNA陽(yáng)性樣本，發(fā)現(xiàn)1個(gè)處于窗口期的HIV感染者，病毒裁量高達(dá)70萬(wàn)copy/ml，對(duì)該人員的回訪調(diào)查中發(fā)現(xiàn)，他于檢測(cè)前2周有過(guò)1次高危性行為。在以后的追蹤隨訪中，我們連續(xù)觀察其HIV抗體、CD4和病毒載量變化情況，直到感染發(fā)生后6個(gè)月。通過(guò)6個(gè)月的追蹤隨訪，得到了新感染的各項(xiàng)指標(biāo)的趨勢(shì)圖。其抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)間約為1.5個(gè)月，窗口期內(nèi)病毒量極高，在抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)病毒量下降，隨后處于穩(wěn)定上升階段。在急性感染期 CD4細(xì)胞有急速下降，在抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)時(shí)回升，以后逐步平穩(wěn)。該例病人在感染HIV后6個(gè)月還有較高的病毒載量（60萬(wàn)C/ml）和較低的CD4細(xì)胞數(shù)（385個(gè)/ul），預(yù)示病程進(jìn)展可能較快，有待進(jìn)一步觀察，結(jié)果見(jiàn)表1，CD4數(shù)量和病毒載量走勢(shì)圖見(jiàn)圖1。

表1 1例HIV感染者感染發(fā)生后的檢測(cè)結(jié)果

圖1 1例HIV感染者感染發(fā)生后CD4計(jì)數(shù)和病毒載量走勢(shì)圖

3 討論

VCT的主要內(nèi)容是鼓勵(lì)有危險(xiǎn)行為的人進(jìn)行自愿的而不是強(qiáng)制的HIV檢測(cè)，并在檢測(cè)前后為受檢者提供咨詢以及相應(yīng)的支持和轉(zhuǎn)診服務(wù)，這樣不僅可以及時(shí)發(fā)現(xiàn)、治療和預(yù)防感染，以及為受檢者（特別是HIV感染者）提供心理、情感支持，而且還可促使受檢者減少危險(xiǎn)行為，采取和保持安全行為。

HIV抗體檢測(cè)是判斷是否感染艾滋病的常用方法，但是卻存在感染窗口期檢測(cè)不到抗體、對(duì)早期感染者很容易出現(xiàn)漏檢的問(wèn)題，而用PCR方法檢測(cè)HIV RNA 則可以發(fā)現(xiàn)早期的感染者[1]。雖然 PCR檢測(cè)技術(shù)有較高的敏感性，但是成本太高。由于窗口期的病毒量很高，稀釋100倍后也可以檢測(cè)到（最低檢測(cè)限為400copy/ml）[2]，而我們所采用的是50份樣本的集合，相當(dāng)于稀釋50倍，遠(yuǎn)高于檢測(cè)的敏感限。所以用集合PCR的方法既能有效地檢測(cè)到窗口期的感染者，也可以降低成本，這對(duì)于血液篩查，保證用血安全性也是有重要意義的。在本次調(diào)查中，集合PCR方法可以降低檢測(cè)費(fèi)用約96%。

核酸PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)HIV感染者的早期診斷具有重要意義。對(duì)懷疑有HIV感染但又缺乏確切的血清學(xué)依據(jù)的人群如HIV陽(yáng)性母親所生的嬰兒、陽(yáng)性患者的性伴侶、靜脈吸毒者和可疑的血清反應(yīng)者均可以用核酸PCR檢測(cè)技術(shù)來(lái)確診[3]。由于集合 PCR的方法對(duì)檢測(cè)窗口期的感染者具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、成本較低等優(yōu)點(diǎn)，因此適用于艾滋病流行地區(qū)的VCT人群，可以有效地發(fā)現(xiàn)及告知HIV早期感染者，從而控制艾滋病的進(jìn)一步傳播。

[1] 姚 均,邵一鳴,何忠平,等.核酸序列擴(kuò)增早期診斷人類免疫缺陷病毒感染[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2002,25(6):363.

[2] 潘品良,許文燕,張 麒,等.集合HIV RNA RT-PCR方法驗(yàn)證及其在 IDUs中窗口期檢測(cè)的應(yīng)用[J].中國(guó)艾滋病性病,2007,13(3):198-200.

[3] 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心.全國(guó)艾滋病檢測(cè)技術(shù)規(guī)范[S].北京：2009.