丹陽市副豬嗜血桿菌病的診斷與防控

潘中順 朱 威 蔣愛萍

（1丹陽市呂城獸醫(yī)站，江蘇省丹陽市 212351；2丹陽市畜牧獸醫(yī)站，江蘇省丹陽市 212300；）

副豬嗜血桿菌 (Haemophilus parasuis，HPS)是一種存在于上呼吸道的共棲菌，在特定條件下引起多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎及高死亡率為特征的傳染性疾病，稱為副豬嗜血桿菌病[1]，又稱革拉澤氏病[2]。臨床上多見發(fā)燒、咳嗽、呼吸困難、發(fā)紺、疼痛、被毛粗亂、進行性消瘦，部分豬出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、跛行和中樞神經(jīng)癥狀。剖檢病變主要為纖維素性多發(fā)性漿膜炎、間質(zhì)性肺炎、心包炎、胸膜炎、腹膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎和腦膜炎。此外，HPS還可引起敗血癥。病豬在未出現(xiàn)典型的漿膜炎時就呈現(xiàn)發(fā)紺、皮下水腫和肺水腫，以致死亡；在急性感染后可能留下后遺癥，即母豬流產(chǎn)、公豬跛行[3]。

隨著規(guī)模養(yǎng)豬的普及，飼養(yǎng)密度不斷提高，本病的危害日益嚴(yán)重，成為全世界斷奶前后仔豬和保育豬頭號殺手。特別在有繁殖與呼吸綜合征 （俗稱藍耳病，PRRS） 和圓環(huán)病毒 2型 （PCV2）感染這兩種免疫抑制性疾病存在的豬場，更容易暴發(fā)本病，且該病發(fā)病快，確診和治療都有困難，死亡率大幅度上升，給豬業(yè)生產(chǎn)造成巨大損失。

1 發(fā)病情況

丹陽某豬場約有2 000頭豬，母豬約40頭，仔豬約1 000頭，斷奶保育豬約600多頭，在2011年3月到4月間，在保育舍內(nèi)的部分仔豬突然皮膚發(fā)紅，咳嗽，打噴嚏，體溫升高，持續(xù)高熱。數(shù)天后，保育舍內(nèi)的其他豬只相繼感染出現(xiàn)類似癥狀，大約有90多頭豬只發(fā)病，發(fā)病率15%。首先感染的豬只食欲不振，精神沉郁，消瘦，跛行，并且有豬只相繼死亡，死亡率10%。

2 臨床癥狀

根據(jù)對本豬場發(fā)病豬的觀察，副豬嗜血桿菌病的臨床癥狀取決于炎性損傷的部位，在本豬場的豬群，發(fā)病很快，接觸病原幾天后就發(fā)病。臨床癥狀包括發(fā)熱 (40～41℃)，食欲不振，厭食，咳嗽、呼吸困難、消瘦、跛行和被毛粗亂等主要臨床癥狀[4]。據(jù)觀察該病發(fā)病以2～8周齡仔豬居多，發(fā)病初期體溫升高可達41.5℃～42℃，呈持續(xù)高熱，發(fā)病較快，喜臥，不愿走動，皮膚發(fā)紅，隨后表現(xiàn)被毛粗亂，精神沉郁，耳朵、腹部皮下呈現(xiàn)出紫色點狀出血，腿關(guān)節(jié)腫脹，運動失調(diào)，消瘦。在病程前期仔豬表現(xiàn)出咳嗽，噴嚏，到中期呼吸似乎平穩(wěn)、沒有明顯癥狀，但豬在稍微運動后就表現(xiàn)出喘氣、咳嗽、呼吸困難等，后期體溫往往出現(xiàn)下降，體溫35℃～36℃，明顯表現(xiàn)出呼吸急促，1～2天后死亡[5]。

3 病理解剖

取本豬場已死亡患豬剖檢，可見全身淋巴結(jié)明顯水腫，尤其是腹股溝淋巴結(jié)最為明顯，其周圍充滿黃色液體，似“膠凍”樣，肺門淋巴結(jié)有充血，發(fā)黑[6]。豬肺臟表面和心臟表面布滿一層灰白色或黃色的纖維蛋白絨毛，肺臟瘀血、水腫，嚴(yán)重者整個腹腔粘連，心包積液，胸腔積液，呈淡黃色，較透明，略帶紅色。肝臟、脾臟、腸道等各臟器也布滿黃色的纖維蛋白，腹腔積液，呈黃色透明狀或灰白色渾濁狀；關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)液增多、渾濁；腦有大量積液，有瘀血。

4 診斷

4.1 分離培養(yǎng)

采集到的肺臟病料在無菌條件下用接種環(huán)直接劃線接種于TSA平板上，在37℃培養(yǎng)24小時。分離到2株可疑菌株，分別命名為CZ1株、CZ2株。在麥康凱培養(yǎng)基和普通瓊脂培養(yǎng)基上不生長；巧克力培養(yǎng)基和V因子血平板上長成白色半透明細小露珠狀菌落，邊緣整齊、光滑、圓形隆起，菌落直徑約0.5～1.0 mm，具反光特性；普通血平板上長成細小針尖狀半透明菌落，均不溶血[7]。

4.2 細菌鏡檢

挑取疑似菌落涂片，革蘭氏染色后觀察細菌形態(tài)，2菌株鏡下形態(tài)相似，均為革蘭氏陰性細長至絲狀的菌體，無芽孢。

4.3 衛(wèi)星實驗

將TSA平板上純化的菌落接種到普通血平板上，然后在上面接種金黃色葡萄球菌，37℃培養(yǎng)18～24小時。金黃色葡萄球菌可產(chǎn)生V因子，需V因子的副豬嗜血桿菌可在其周圍生長呈 “衛(wèi)星現(xiàn)象”。結(jié)果見在金黃色葡萄球菌線兩側(cè)有針尖大小、圓形、邊緣整齊的菌落生長；而在未接種金黃色葡萄球菌的部分則未見菌落生成。

4.4 生化試驗

將純化好的液體培養(yǎng)物接種生化管中，同時加入適量NAD，觀察培養(yǎng)結(jié)果。37℃培養(yǎng)24小時后觀察生化試驗結(jié)果，結(jié)果見表1。

4.5 PCR擴增

PCR引物參考仇微紅等[7]的報道合 成 ： HPSF： 5’ -GTGATGAGGAAGGGTGGTGT-3’ ， HPSR： 5’ -GGCT TCGTCACCCTCTGT-3’ 擴增目的片段長度為850 bp。

在 25μL反應(yīng)體系中 PCR Mix 12.5 μL， HPSF （25 pmol/L） 0.5 μL，HPSR(25 pmol/L)0.5μL， 模板 2μL，ddH2O 9.5μL，混勻后瞬時離心。

PCR程序：94℃預(yù)變性 3分鐘；94℃變性 1分鐘，50℃退火 1分鐘，72℃延伸1分鐘，運行 30個循環(huán)；72℃延伸 10分鐘。PCR結(jié)束后，取5μL PCR產(chǎn)物于1%的瓊脂糖凝膠中進行電泳分析，紫外投射儀中觀察結(jié)果。結(jié)果均可獲得一條大小為850 bp的特異性片段，與預(yù)期產(chǎn)物大小相符，結(jié)果見圖1。

圖1 PCR檢測電泳圖

5 綜合防控

5.1 治療

仔豬或育肥豬可選用整群藥物拌料和個別患病注射給藥相結(jié)合的方法進行治療，哺乳仔豬可采用仔豬和母豬同時治療的方法。治療可選用氟本尼考、頭孢菌素、喹諾酮類、氨芐青霉素、磺胺類等藥物。

發(fā)病初期可選用口服拌料：復(fù)方新諾明拌料，劑量為1 g/kg飼料，連用7天；選用氟本尼考拌料，劑量為0.1 g/kg飼料，連用5天；泰樂菌素，2～6周齡仔豬40 mg/kg·bw拌料，連用5天。

注射給藥可選用抗菌素結(jié)合解熱類藥物進行治療?？咕幙蛇x用氟本尼考，l0 mg/kg·bw的劑量肌肉注射，每天1次，連用 5～7天；頭孢噻呋，5 mg/kg·bw的劑量進行肌肉注射，連用5天；克林霉素，按使用說明計算用量，進行肌肉注射。解熱類藥物可選用安乃近結(jié)合地塞米松肌肉注射，每天2次， 連用5～7天[8]。

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5.2 預(yù)防

副豬嗜血桿菌病的流行與發(fā)病嚴(yán)重程度日益增加，尤其是大型養(yǎng)豬場，應(yīng)重視對其的防控。由于本病治療效果不好，要遵循 “養(yǎng)重于防，防重于治”的原則，以預(yù)防為主，采取綜合防控措施。

5.2.1 免疫預(yù)防

接種疫苗是預(yù)防副豬嗜血桿菌感染的最為有效的方法之一。市場上有若干種商品菌苗出售，有的菌苗中含有一些特定血清型的菌株，有的含未分型的菌株。自家菌苗也可被用來防制副豬嗜血桿菌感染，這些菌苗是由臨床發(fā)病豬分離的，盡管上述菌苗都可在某些豬群內(nèi)降低發(fā)病率和死亡率，自家菌苗的結(jié)果一般來說比較穩(wěn)定。在進行副豬嗜血桿菌免疫接種時，還有一個需要考慮的重要因素，即免疫接種實施時間的選擇。已證明，在母豬分娩前2周對其進行免疫接種，可保護仔豬到保育階段。對仔豬進行免疫接種可以取得更好的效果。仔豬進入保育舍時應(yīng)該對其進行免疫接種，2周后再加強免疫一次[9]。

5.2.2 藥物預(yù)防

以階段性投藥預(yù)防為主的群體防制方案：母豬產(chǎn)前7天或產(chǎn)后7天每噸飼料中連續(xù)添加支原凈100 g+阿莫西林250 g；仔豬斷乳前或斷乳后7天于每噸飼料中連續(xù)添加頭孢噻呋鈉150 g+TMP 150 g；個體治療方案：一般應(yīng)在發(fā)病初期盡早用藥，并適當(dāng)加大用量，以保證藥物及時滲透到腦脊髓液及關(guān)節(jié)中，可選用阿莫西林、氨芐西林等，每隔6～8小時用藥一次，有條件的最好先做藥敏試驗，以選擇敏感藥物[10]。

5.2.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)管理的改善可降低副豬嗜血桿菌病的發(fā)病率。早期斷奶不能完全控制該病，因為7日齡以前有的仔豬已經(jīng)被感染了。最關(guān)鍵的措施是減少應(yīng)激反應(yīng)的發(fā)生，如避免擁擠，減少產(chǎn)房和保育舍的賊風(fēng)，加強保溫通風(fēng)，確保飼料沒有霉菌毒素的污染，引進種豬時應(yīng)隔離，在進入種群前進行免疫或投藥消滅體內(nèi)的致病菌和寄生蟲[11]。

6 討論

副豬嗜血桿菌是一種革蘭氏陰性，有多種不同的形態(tài)從單個的球桿菌到細長的甚至絲狀的菌體，這種細菌在環(huán)境中普遍存在，甚至在健康的豬群當(dāng)中也能發(fā)現(xiàn)。本病有15個血清型，其中4、5、13最為常見，不同血清型的菌株，毒力差異很大。在我國當(dāng)前流行的血清型主要為4、5、12、13型。

患副豬嗜血桿菌病的豬和帶菌豬是主要傳染源，主要傳播途徑是呼吸道。與病豬接觸后，病菌通過鼻汁等分泌物接觸傳播，也可經(jīng)飛沫直接傳播，易引起群發(fā)，有時呈地方性流行[12]。

副豬嗜血桿菌對營養(yǎng)要求較高，而且在外界的死亡速度也很快[13]，生長時需要血液中存在生長因子，人工培養(yǎng)時必須供給含有V因子 (NAD或NADP)的新鮮血液才能生長。HPS可突破鼻黏膜的屏障， 引起全身性的感染[14]，包括仔豬漿液性、纖維蛋白性、化膿性、多發(fā)性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、腦膜炎、支氣管肺炎和敗血癥。本病只感染豬，一般多發(fā)生于斷奶前后的仔豬及保育豬，感染高峰期通常見于4～6周齡[15]。但以斷奶后仔豬和保育階段豬較易發(fā)病，尤以5～8周齡豬最易感（因HPS的母源抗體大約在仔豬4～6周齡時降低，保育豬很容易發(fā)病[16]；有的斷奶后1周就開始發(fā)?。?/p>

利用PCR方法診斷副豬嗜血桿菌快速、簡便、準(zhǔn)確。通過對臨床采集病料的檢測進一步證明了該種方法的實用性，對我們診斷和防制副豬嗜血桿菌病具有重要的意義。

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