二乙基亞硝胺誘導(dǎo)大鼠肝癌模型的建立及評價

王誠剛

(山西生物應(yīng)用職業(yè)技術(shù)學(xué)院，山西太原 030031)

原發(fā)性肝癌是由肝細胞或肝內(nèi)膽管細胞發(fā)生而成的癌癥，是我國較為常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤［1］。肝癌具有高度惡性、進展快、侵襲性強、預(yù)后差、死亡率高等特點。深入研究肝癌的成因與介入治療是我國癌癥防治的重要課題，也是基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究和臨床醫(yī)學(xué)研究的熱點課題。但在病理學(xué)方面，人類肝癌的發(fā)病機制直到今天尚未闡明，所以建立基于人類的肝癌發(fā)病機制類似的活體動物模型，不但對肝癌的發(fā)病機制的研究有重要的輔助意義，而且能為肝癌的防治提供可靠的實驗?zāi)Ｐ汀?/p>

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

選取 Wistar大鼠 120只，雄性，體重為150～200 g。以每籠飼養(yǎng)5只的方式分籠飼養(yǎng)，飼養(yǎng)過程光照模式為標(biāo)準(zhǔn)化，喂食方式為自由進食，定期更換墊料，環(huán)境適應(yīng)期為7 d。將大鼠隨機分為2組，分別為建模組及對照組，每組60只。

1.2 藥品

注射藥品成分為二乙基亞硝胺(DENA)，比重為0.95 g/mL，純度≥99.9%，為美國Sigm公司生產(chǎn)。以0.4 mL二乙基亞硝胺與生理鹽水100 mL混合，經(jīng)過振蕩搖勻后，配制成為濃度為4 mg/mL的二乙基亞硝胺溶液，并置于陰暗處保存。

1.3 實驗方法

建模組實驗大鼠以二乙基亞硝胺溶液腹腔注射，給藥劑量為25 mg/kg，每周3次注射，并喂飼含30%酪蛋白和0.05%苯巴比妥鈉的飼料［2］。對照組大鼠以建模組的劑量和注射頻率用生理鹽水進行腹腔注射。觀察實驗動物精神狀態(tài)、飲食狀況、被毛變化及體重波動。在實驗的第10周進行影像檢查，篩查實驗大鼠肝臟的腫瘤發(fā)病情況。將影像檢查結(jié)果為陽性的大鼠處死做解剖分析，開腹對肝臟進行觀察后，取出實驗體肝臟，以10%的甲醛溶液固定標(biāo)本24 h，將標(biāo)本切片為2 mm的厚度制成組織片，HE染色鏡下觀察;檢查結(jié)果為陰性的大鼠繼續(xù)飼養(yǎng)。此后每隔2周進行一次影像檢查［3］至第18 周止。

2 結(jié)果

建模組大鼠的飲食量隨著給藥的次數(shù)增加而逐漸下降，對于刺激的反應(yīng)遲緩，外體被毛雜亂失去光澤，體重增長較為緩慢。對照組大鼠正常自由飲食，大鼠反應(yīng)靈活敏捷，外體被毛柔順且有光澤，體重增長較快。實驗過程中建模組大鼠肝癌發(fā)病46只，其中第10周發(fā)病4只，第12周發(fā)病8只，第16周發(fā)病24只。影像檢查、解剖及病理結(jié)果顯示，第10周與第12周動物為肝臟炎癥，第16周為肝臟癌腫。對照組動物無肝癌發(fā)生。至第18周，建模組誘癌成功率為76.67%(46/60)。

3 討論

肝癌發(fā)病率僅次于胃癌，而且隨著人民生活水平的提高，飲食中脂肪和酒精的攝入量過高，發(fā)病率呈現(xiàn)持續(xù)增高的狀態(tài)。肝癌的死亡率僅次于胃癌與食道癌，在各種癌癥致死率中排第三位［4］。20世紀(jì)以來，全世界每年的新發(fā)肝癌患者約26萬，我國的患者占42%左右。且平均每年由于肝癌致死的患者將近11萬人，在全球肝癌死亡患者數(shù)中占45%。二乙基亞硝胺(DENA)為強烈的化學(xué)誘癌劑，其靶器官主要是肝臟。所誘發(fā)的大鼠肝癌為肝細胞癌，與人體肝癌的發(fā)生過程相似。因為具有良好的專一性和較高的成功率，DENA性肝癌模型迄今仍然是應(yīng)用最廣泛的一種肝癌模型。通過致癌物質(zhì)可誘發(fā)實驗動物產(chǎn)生肝癌。與移植性肝癌模型不同的是，此類動物的腫瘤是在致癌因子的作用下，通過自身細胞的突變、轉(zhuǎn)化和增殖形成的。這種模型在研究腫瘤的發(fā)病機制、組織學(xué)和生物學(xué)特性，以及腫瘤與宿主的相互關(guān)系等方面，較移植性肝癌模型更加合適［5］。

相比之前的化學(xué)誘發(fā)動物肝癌模型，本實驗?zāi)Ｐ陀幸韵绿攸c:a)操作較為簡便，藥物劑量準(zhǔn)確;b)相比灌胃法與飲水法，便于控制二乙基亞硝胺的誘導(dǎo)劑量，能夠有效減少模型差異，可控性和可重復(fù)性較好;c)模型誘癌周期較短，成癌率較高，本實驗18周時成癌率為76.67%。本研究通過長時間多次小劑量二乙基亞硝胺腹腔注射的方法，成功建立了二乙基亞硝胺的大鼠肝癌模型，此模型是研究人體肝癌成因及發(fā)展的理想可靠的活體動物模型。

［1］ 翟鋼軍.原發(fā)性肝癌52例臨床分析［J］.中外健康文摘，2010，21(17):30-31.

［2］ 謝勝學(xué)，許戈良，莢衛(wèi)東.二乙基亞硝胺聯(lián)合N-亞硝基嗎啉誘導(dǎo)大鼠肝癌模型的實驗病理研究［J］.肝膽外科雜志，2008，34(2):35-36.

［3］ 楊立娟，齊乃新，趙彩蕾.二乙基亞硝胺誘發(fā)SD大鼠原發(fā)性肝細胞癌形成過程中CD68的表達與MRI表現(xiàn)的相關(guān)性實驗研究［J］.實用放射學(xué)雜志，2008，52(12):51-53.

［4］ 李笑巖，白咸勇，劉同慎，等.二乙基亞硝胺誘發(fā)大鼠肝癌模型的建立及病理學(xué)改變［J］.濱州醫(yī)學(xué)學(xué)報，2007，33(6):35-36.

［5］ 金星林，千昌石，杜希臣，等.改良法建立大鼠原發(fā)性肝癌變模型與病理形態(tài)學(xué)研究［J］.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2009，41(17):189.