胎盤中FXR、BSEP的表達(dá)及其與ICP關(guān)系的研究

孟莉 徐建英

妊娠期肝內(nèi)膽汁瘀積癥(intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP)是一種妊娠中、晚期出現(xiàn)的以皮膚瘙癢、膽汁瘀積和黃疸為特征的并發(fā)癥。該病可引起胎兒窘迫、早產(chǎn)、死產(chǎn)，增加圍生兒發(fā)病率和死亡率，同時增加剖宮產(chǎn)率。現(xiàn)很少有從母胎之間的重要代謝器官一胎盤，對膽酸代謝的影響進(jìn)行探索。

研究發(fā)現(xiàn)，人胎盤中存在 FXR及 MRPs、OATP、MDR3、FIC1、BSEP等多種肝臟中類似的膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)。本研究通過測定ICP母、臍血清中甘膽酸水平，以及胎盤中FXR、BSEP的表達(dá)情況，以探討胎盤膽鹽載體的表達(dá)與ICP胎兒體內(nèi)高膽汁酸水平的關(guān)系，從胎盤角度研究ICP可能的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選自2007年01月至2008年12月在蘇州大學(xué)附屬一院住院擇期剖宮產(chǎn)分娩的ICP患者35例為ICP組。ICP診斷標(biāo)準(zhǔn)參考曹澤毅主編《中華婦產(chǎn)科學(xué)》第2版。另選40例同期住院正常晚期妊娠，因社會因素剖宮產(chǎn)分娩婦女作為對照組，均為單胎，無其他妊娠合并癥及并發(fā)癥。兩組孕婦的年齡、孕次、產(chǎn)次、胎兒出生時孕周均差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 材料與方法 母血采集：于剖宮產(chǎn)前30 min，抽取母體肘靜脈血4 ml置干燥管，2500 rpm離心15 min，分離血清，置-20℃保存統(tǒng)一待測。臍血采集：新生兒斷臍后，立即采臍靜脈血4 ml置干燥管，處理同上。胎盤采集：兩組孕婦均在剖宮產(chǎn)術(shù)中胎盤娩出5 min內(nèi)取胎盤標(biāo)本，切取新鮮胎盤母體面中央組織1 cm×1 cm×0.2 cm，注意避開蛻膜、胎膜組織、梗死及鈣化區(qū)。立即用10%中性福爾馬林固定，入脫水機(jī)和包埋機(jī)脫水、透明、浸蠟、包埋，制成蠟塊待用。采用放射免疫分析法測定甘膽酸。采用免疫組織化學(xué)SP法檢測中FXR及BSEP的表達(dá)。每例患者入院后即抽取空腹肘靜脈血5 ml測定肝功能指標(biāo)。

使用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，采用t檢驗，線性相關(guān)性分析，方差分析。P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

ICP組患者共35例，其中出現(xiàn)瘙癢者27例，黃疸2例;入院采取地塞米松、熊去氧膽酸等治療者31例;新生兒體重ICP組(3165.71±523.25)g與對照組(3181.25±302.70)g差異無統(tǒng)計學(xué)意義;ICP組早產(chǎn)5例(14.28%)，羊水Ⅰ～Ⅱ度污染者6例(17.14%)，胎兒宮內(nèi)窘迫者6例(17.14%)，發(fā)生新生兒輕度窒息1例，對照組無一例上述異常情況。

2.1 ICP組和對照組母、臍血清CG值的水平比較 檢驗結(jié)果顯示ICP組母、臍血清CG值(18507.14±6614.01)ng/ml、(6899.14±1823.05)ng/ml均高于對照組(1411.75±406.89)ng/ml、(2341.50 ± 633.62)ng/ml，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.01);且對照組臍血清CG高于母血清，而ICP組母血清CG水平顯著高于臍血清。同時ICP組母血清ALT、AST、ALP、T-BIL、D-BIL、I-BIL及TBA的測定值均明顯高于對照組，兩組比較均有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.2 兩組胎盤組織中FXR、BSEP表達(dá)水平 免疫組織化學(xué)顯示FXR及BSEP蛋白在ICP胎盤中的定位和正常妊娠胎盤組織中分布基本一致，均分布于合體滋養(yǎng)細(xì)胞胞膜上和胞漿中。其中FXR的表達(dá)水平ICP組(16.54±2.16)%較對照組(11.38±1.44)%高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.01);BSEP的表達(dá)水平 ICP(4.94±1.11)%低于對照組(7.53±1.04)%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，(P＜0.01)。

2.3 ICP胎盤組織中FXR、BSEP表達(dá)水平與CG值間的相關(guān)性 ICP組胎盤組織中FXR的表達(dá)與母血清、臍血清CG水平呈正相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為0.58、0.54，(P＜0.01)。BSEP的表達(dá)量與母血、臍血CG水平呈負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)分別為-0.42、-0.30，(P ＜0.05)。

3 討論

從妊娠12周起，胎兒肝臟就開始合成膽汁酸［1、2］，由于胎兒的肝膽分泌途徑尚不成熟［3、4］，為避免膽汁酸的蓄積，胎兒將這些物質(zhì)通過胎盤排入母體，最后經(jīng)母體肝臟進(jìn)行生物轉(zhuǎn)化和清除。

3.1 1ICP患者肝細(xì)胞結(jié)構(gòu)或功能受損 ALT主要存在于肝細(xì)胞漿中，AST存在于肝細(xì)胞的線粒體中，在常規(guī)肝功能檢測中，其可靈敏地反映肝細(xì)胞的損傷情況［5］。本研究顯示ICP組母血中 ALT、AST、ALP水平均明顯高于對照組，(P＜0.05)，兩組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。提示ICP組患者肝細(xì)胞受到一定程度的損害。

3.2 FXR、BSEP在ICP胎盤中的表達(dá)特點(diǎn)及其與ICP胎盤中膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能受損的關(guān)系 本研究結(jié)果顯示：正常妊娠時胎盤上存在著FXR與BSEP的陽性表達(dá)，免疫組化染色顯示其主要位于滋養(yǎng)細(xì)胞包膜和胞漿中，說明FXR和BSEP在胎盤上可能參與了膽汁酸從胎兒向母體側(cè)的轉(zhuǎn)運(yùn)。

ICP時，患者胎盤上FXR陽性表達(dá)數(shù)量兩組間存在統(tǒng)計學(xué)意義，然而BSEP的陽性表達(dá)并未上調(diào)，反而降低，與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義。表明ICP時血清膽汁酸濃度誘導(dǎo)了FXR的表達(dá)，但卻未能刺激其靶基因 BSEP的表達(dá)增多，BSEP的表達(dá)反而減少，從而可能導(dǎo)致胎兒側(cè)膽汁酸向母體側(cè)的轉(zhuǎn)運(yùn)異常，引起胎兒膽汁瘀積。而本研究結(jié)果提示ICP時胎盤FXR的表達(dá)與母、胎血CG值呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)r為0.58、0.54，(P＜0.01)。BSEP的表達(dá)量與母、胎血 CG水平呈負(fù)相關(guān)性，相關(guān)系數(shù) r為-0.42、-0.30，(P＜0.05)，由于統(tǒng)計學(xué)上認(rèn)為相關(guān)系數(shù)絕對值大于0.6時所得出的相關(guān)性才較為可靠，故本研究尚不能得出胎盤組織FXR、BSEP的表達(dá)量與母體內(nèi)膽汁酸水平存在相關(guān)性的肯定結(jié)論，Serrano等［6］研究發(fā)現(xiàn)在未經(jīng)UDCA治療的ICP患者中，其胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞母體面頂膜的ATP-依賴的膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)的轉(zhuǎn)運(yùn)效率與母血中總膽汁酸水平成負(fù)相關(guān)，其相關(guān)系數(shù)高達(dá)-0.88，而使用UDCA治療的ICP患者則不存在這種相關(guān)性。本研究結(jié)果也顯示出正常晚期妊娠胎盤中BSEP的表達(dá)呈現(xiàn)低水平，可能反映了正常妊娠情況下胎兒膽汁酸水平的低下;或者生理妊娠情況下，BSEP不是胎盤上排泌膽汁酸的主要載體。而國內(nèi)徐洲［7］、劉玉玲等［8］研究發(fā)現(xiàn)妊娠各期胎盤均有 ATP-依賴的膽鹽載體MDR3、FIC1 mRNA的表達(dá)，而ICP患者胎盤組織中該表達(dá)量均低于正常晚孕婦女，可部分協(xié)助解釋胎兒膽汁瘀積的發(fā)生與維持。由此，胎盤排泌膽汁酸過程是一個復(fù)雜的過程，也是一個多膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)載體共同作用的過程，ICP胎盤膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)功能異常有待進(jìn)一步研究。

3.3 ICP與胎兒宮內(nèi)窘迫 目前為止，引起ICP不良妊娠結(jié)局的原因尚未徹底明了。但人們已逐漸認(rèn)識到該病主要危害胎兒。本研究中ICP組早產(chǎn)5例(14.28%)，羊水Ⅰ～Ⅱ度污染者6例(17.14%)，胎兒宮內(nèi)窘迫者6例(17.14%)，發(fā)生新生兒輕度窒息1例，而對照組無一例發(fā)生上述并發(fā)癥。證實(shí)ICP組對胎兒存在著一定的危害。故應(yīng)在診斷ICP后密切監(jiān)測胎兒情況，適時作好終止妊娠的準(zhǔn)備以減少胎嬰兒并發(fā)癥發(fā)生的可能。

本實(shí)驗發(fā)現(xiàn)高膽汁酸刺激FXR的表達(dá)增加，但其靶基因BSEP在ICP胎盤組織中的表達(dá)卻未能相應(yīng)增加，對理解其不良妊娠結(jié)局的發(fā)生機(jī)制提供基礎(chǔ)，同時為該疾病的治療提供一新思路，是否可采取BSEP激動劑從而增加其在胎盤中的表達(dá)，提高胎盤對膽汁酸的排泌能力，從而降低胎兒不良妊娠結(jié)局。

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［8］劉玉凌，喬福元，劉海意，等.妊娠期肝內(nèi)膽汁瘀積癥患者M(jìn)DR3基因突變的研究．中華婦產(chǎn)科雜志，2006，41(4)：266-267．