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    西瓜化感作用及其化感物質(zhì)成分分析

    2011-08-14 03:25:12鄭陽(yáng)霞唐海東李煥秀賀忠群秦耀國(guó)
    中國(guó)蔬菜 2011年18期
    關(guān)鍵詞:提液水浸化感

    鄭陽(yáng)霞 唐海東 李煥秀 賀忠群 秦耀國(guó)

    (四川農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院,四川雅安 625014)

    西瓜〔Citrullus lanatus(Thunb.)Matsum. et Nakai〕是一種嚴(yán)忌重茬的蔬菜,極易發(fā)生連作障礙。其原因除了土傳病害和土壤理化性狀劣變外,自毒作用也是重要的因素之一(喻景權(quán)和杜堯舜,2000)。而且自毒作用可協(xié)同土傳病害發(fā)生,導(dǎo)致連作障礙嚴(yán)重發(fā)生(喻景權(quán)和杜堯舜,2000)。自毒作用是指植物向環(huán)境釋放某些化學(xué)物質(zhì)而影響自身的生長(zhǎng)和發(fā)育的化學(xué)生態(tài)現(xiàn)象和化感作用的表現(xiàn)形式(Singh et al.,1999)?;形镔|(zhì)主要是通過(guò)植物地上部的淋溶和揮發(fā)、根系的分泌以及植株殘?bào)w的分解等途徑向農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中釋放,從而影響周圍和后茬植物的生長(zhǎng)發(fā)育(章家恩,2007;覃逸明 等,2009)。目前有關(guān)西瓜連作障礙中的自毒作用已有一些報(bào)道。王倩(2002)、耿廣東等(2005)、楊廣超等(2005)證實(shí)西瓜根、莖葉殘?bào)w的水浸提液對(duì)西瓜的生長(zhǎng)有一定的毒害作用?;形镔|(zhì)廣泛存在于植物的各個(gè)組織,而且各組織中分布不同。但有關(guān)西瓜根、莖葉浸提液以及根系分泌物中化感物質(zhì)的檢測(cè)還未見(jiàn)報(bào)道,因此有必要深入研究西瓜的化感作用。本試驗(yàn)研究了不同濃度的西瓜根、莖葉水浸提液和根系分泌物對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的影響,并應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜儀(GC-MS)檢測(cè)化學(xué)物質(zhì),探討西瓜化感作用的機(jī)理,比較西瓜根、莖葉水浸提液及其根系分泌物化感作用的差異,分析其化感物質(zhì)的種類,為解決生產(chǎn)實(shí)踐中的西瓜連作障礙提供科學(xué)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)材料

    供試西瓜品種為早佳84-24,新疆葡萄瓜果研究開(kāi)發(fā)中心選育。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 供試材料的培養(yǎng) 試驗(yàn)在四川農(nóng)業(yè)大學(xué)蔬菜基地進(jìn)行。2010年5月3日播種西瓜,待幼苗長(zhǎng)至3~4片葉時(shí)移入內(nèi)徑為20 cm的塑料缽中,基質(zhì)為珍珠巖。每缽定植2株,共15缽。每7 d澆1次Hoagland營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng)。

    1.2.2 根、莖葉水浸提液母液的制備 6月15日將西瓜的根和莖葉用清水洗干凈,放在85 ℃的烘箱中殺酶30 min,再在65 ℃下烘干粉碎。分別稱取20 g干樣放入三角瓶中,加去離子水200 mL,放入超聲波振蕩儀中提取4 h,濾紙過(guò)濾即得濃度為100 g·L-1的水浸提液母液。

    1.2.3 根、莖葉化感作用的生物檢測(cè) 分別將西瓜根和莖葉水浸提液母液用去離子水稀釋成2.5、5.0、10.0、20.0 g·L-1進(jìn)行西瓜種子發(fā)芽試驗(yàn)。在直徑12 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)鋪兩層定性濾紙,放入經(jīng)55 ℃溫水浸種的西瓜種子25粒。分別取上述稀釋液7 mL加入培養(yǎng)皿中,以加入7 mL去離子水為對(duì)照,3次重復(fù)。然后置于(25±2)℃人工氣候箱中培養(yǎng)。每天補(bǔ)充適量的水分以保持濾紙濕度。每天觀察、記錄發(fā)芽數(shù),連續(xù)觀察5 d,計(jì)算發(fā)芽指數(shù)(GI)。第5天測(cè)定總發(fā)芽率。同時(shí)各處理隨機(jī)取樣10株,用直尺測(cè)量株高、根長(zhǎng),用電子天平稱量冠鮮質(zhì)量、根鮮質(zhì)量。

    式中Gt為第t天的發(fā)芽數(shù),Dt為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)。

    化感效應(yīng)分析參照 Willamson和 Richardson(1988)的化感效應(yīng)指數(shù)(RI)進(jìn)行。當(dāng) T≥C時(shí),RI=1-C/T;當(dāng)T<C時(shí),RI=T/C-1,其中T為測(cè)定值,C為對(duì)照值。RI值>0時(shí),為促進(jìn)作用;RI值<0時(shí),為抑制作用,絕對(duì)值的大小與作用強(qiáng)度一致。均以 RI作為原始數(shù)據(jù),采用DPS軟件進(jìn)行方差分析。

    1.2.4 根、莖葉中化學(xué)物質(zhì)的鑒定 分別取西瓜的根和莖葉研碎后的粉末20 g,加入正己烷100 mL,放入超聲波振蕩儀提取4 h。然后用定量濾紙過(guò)濾2次,再用0.45 pm微孔濾膜過(guò)濾,收集提取液。最后將提取液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40 ℃濃縮到2 mL,放入4 ℃冰箱中保存。

    應(yīng)用氣相色譜-質(zhì)譜儀(GC-MS)檢測(cè)根和莖葉中的化學(xué)成分。氣相色譜儀:Agilent 6890N;質(zhì)量選擇檢測(cè)器:Agilent Technologies 5973;分析軟件:Agilent Chemstation;色譜柱:30 m×0.25 mm×0.25 μm,HP-5MS毛細(xì)管柱。柱箱升溫程序:90 ℃(1 min),以10 ℃·min-1升溫至240 ℃。載氣流速:1.0 mL·min-1(He),進(jìn)樣量為1 μL。離子源:EI;離子源溫度:230 ℃;電極電壓:1 000 V;四極桿溫度:150 ℃,全掃描范圍30~600 m·Z-1。通過(guò)Agilent Chemstation化學(xué)工作站檢索Nist標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù),確定化合物。采用歸一法計(jì)算各種成分的相對(duì)含量。

    1.2.5 根系分泌物的收集、濃縮 6月15日將西瓜植株從基質(zhì)中取出,先后用自來(lái)水和去離子水充分清洗附著在根系上的基質(zhì)。然后將根系放在裝有Hoagland營(yíng)養(yǎng)液的黑色塑料桶中,每桶定植5株。連續(xù)通氣培養(yǎng)10 d,收集10株。10 d后將西瓜植株小心地從營(yíng)養(yǎng)液中取出,用定性濾紙過(guò)濾營(yíng)養(yǎng)液,再將營(yíng)養(yǎng)液以25 mL·min-1的流速經(jīng)過(guò)XAD-4吸附樹(shù)脂,然后用柱床10倍體積的去離子水多次沖洗柱床(除去營(yíng)養(yǎng)液成分),再用200 mL正己烷洗脫根系分泌物。最后將正己烷洗脫液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上40 ℃濃縮至1 mL,置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

    1.2.6 根系分泌物化感作用的生物檢測(cè) 將西瓜根系分泌物濃縮液分別稀釋成2.5、5.0、10.0、20.0 μL·L-1進(jìn)行生物檢測(cè)。準(zhǔn)確吸取不同濃度的稀釋液7 mL,加入鋪有濾紙的培養(yǎng)皿中。將培養(yǎng)皿放在50 ℃的烘箱中烘至正己烷完全揮發(fā)后加入7 mL去離子水做種子發(fā)芽試驗(yàn)。方法同1.2.3。

    1.2.7 根系分泌物中化學(xué)物質(zhì)的鑒定 方法同1.2.4。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 西瓜根、莖葉水浸提液對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的影響

    西瓜根、莖葉水浸提液對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)有較大的影響(表1)。與對(duì)照相比,西瓜根、莖葉水浸提液的濃度為2.5 g·L-1時(shí),發(fā)芽率、發(fā)芽指數(shù)、株高、根長(zhǎng)、冠鮮質(zhì)量和根鮮質(zhì)量的化感效應(yīng)指數(shù)(RI)均為正值。當(dāng)濃度為5.0 g·L-1時(shí),RI值為負(fù)值。隨著濃度的增加,RI值逐漸降低。根、莖葉水浸提液濃度在20.0 g·L-1時(shí),對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的抑制作用最強(qiáng),說(shuō)明西瓜根、莖葉水浸提液對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)表現(xiàn)為低濃度促進(jìn)、高濃度抑制的雙重效應(yīng)。且同一濃度時(shí),多表現(xiàn)為西瓜莖葉水浸提液對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的抑制作用顯著大于根系。

    表1 西瓜根、莖葉水浸提液對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的影響

    2.2 西瓜根系分泌物對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的影響

    西瓜根系分泌物對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的影響因濃度而異(表2)。當(dāng)根系分泌物濃度為2.5 μL·L-1時(shí),對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)均表現(xiàn)為促進(jìn)作用。根系分泌物濃度為5.0 μL·L-1時(shí),開(kāi)始抑制西瓜種子的發(fā)芽和幼苗的生長(zhǎng);隨著濃度的升高,抑制程度加大,而且不同濃度之間差異顯著。同濃度時(shí),西瓜根系分泌物對(duì)西瓜幼苗根部的影響比地上部明顯。

    2.3 西瓜根、莖葉和根系分泌物中化學(xué)物質(zhì)的鑒定

    在西瓜根、莖葉和根系分泌物中共檢測(cè)出32種化學(xué)物質(zhì)(表3),且以酯類化學(xué)物質(zhì)最多,有14種,推測(cè)酯類化學(xué)物質(zhì)可能是西瓜主要的自毒物質(zhì)。在西瓜根中檢測(cè)到14種化學(xué)物質(zhì),莖葉中檢測(cè)到19種,根系分泌物種檢測(cè)到22種;而且同種化學(xué)物質(zhì)在西瓜根、莖葉和根系分泌物中的相對(duì)含量也不相同。說(shuō)明西瓜根、莖葉和根系分泌物中化學(xué)物質(zhì)的種類和含量存在差異。

    表2 西瓜根系分泌物對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)的影響

    表3 西瓜根、莖葉和根系分泌中化學(xué)物質(zhì)鑒定結(jié)果

    3 結(jié)論與討論

    3.1 西瓜根、莖葉和根系分泌物的化感效應(yīng)

    本試驗(yàn)結(jié)果表明,西瓜根、莖葉水浸提液和根系分泌物對(duì)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng)有較大的影響。低濃度時(shí),促進(jìn)西瓜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng);高濃度時(shí),抑制種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)。這與前人的研究結(jié)果一致(王倩,2002;耿廣東 等,2005;楊廣超 等,2005)。西瓜根、莖葉水浸提液濃度在2.5 g·L-1時(shí),促進(jìn)西瓜種子發(fā)芽和幼苗生長(zhǎng);濃度為5.0 g·L-1時(shí),開(kāi)始表現(xiàn)為抑制作用;且隨著濃度增大,抑制作用增強(qiáng)。根系分泌物濃度為 5.0 μL·L-1時(shí),西瓜種子的發(fā)芽和幼苗的生長(zhǎng)也開(kāi)始受到抑制。說(shuō)明西瓜根、莖葉和根系分泌物中存在抑制西瓜種子萌發(fā)和幼苗生長(zhǎng)的化學(xué)物質(zhì),具有較強(qiáng)的化感抑制作用。

    雖然植物體內(nèi)含有大量的化感物質(zhì),但由于化感物質(zhì)在植物組織中分布不均衡,導(dǎo)致了各組織化感作用強(qiáng)度不同。苜蓿的根、莖葉、花、種皮均具有化感作用,但以葉片的化感作用最強(qiáng)(Miller,1983;Chung et al.,2000)。辣椒、茄子和棉花的葉片化感效應(yīng)也大于根系(張啟發(fā)等,2007;李彥斌 等,2008;王廣印 等,2009)。本試驗(yàn)也得出相似的結(jié)論,西瓜莖葉的化感作用大于根系。這可能與其根系、莖葉中化感物質(zhì)組成不同有關(guān)。

    3.2 西瓜根、莖葉和根系分泌物中的化感物質(zhì)

    植物根、莖葉和根系分泌物中含有許多化學(xué)物質(zhì),既有化感抑制物質(zhì)(自毒物質(zhì)),也有化感促進(jìn)物質(zhì)。迄今為止,在西瓜、番茄、黃瓜、辣椒、茄子等蔬菜作物根系分泌物和植物殘?bào)w中已經(jīng)分離出苯甲酸、肉桂酸、水楊酸、香草醛等多種自毒物質(zhì)(Kim,1989;Yu & Matsui,1994;王茹華 等,2006)。本試驗(yàn)從西瓜根、莖葉和根系分泌物中共檢測(cè)出32種化學(xué)物質(zhì),其中酯類化學(xué)物質(zhì)最多,有14種;在西瓜根中檢測(cè)到14種化學(xué)物質(zhì),莖葉中檢測(cè)到19種,根系分泌物中檢測(cè)到22種,其中一些曾被報(bào)道為化感物質(zhì)(韓麗梅 等,2000;何海斌 等,2005;廖薇 等,2006;劉娜 等,2008;耿廣東 等,2009)。

    近幾年有研究證明,脂肪酸酯是一類潛在的化感物質(zhì),如鄰苯二甲酸二乙酯以及鄰苯二甲酸衍生物等(Macias,1995;何海斌 等,2005)。Rumex janonicus是亞熱帶地區(qū)多年生草藥,能夠分泌鄰苯二甲酸二乙酯,對(duì)周圍植物產(chǎn)生化感作用(Keire et al.,2001)。柴強(qiáng)和馮福學(xué)(2007)報(bào)道,玉米根系分泌物中的鄰苯二甲酸是一種自毒作用較強(qiáng)的化感物質(zhì)。本試驗(yàn)在西瓜的根、莖葉和根系分泌物中均檢測(cè)到鄰苯二甲酸二辛酯、鄰苯二甲酸二異丁酯。至于哪些化感物質(zhì)是西瓜的主要自毒物質(zhì)及其作用機(jī)理還需進(jìn)一步探討。

    研究中還發(fā)現(xiàn),西瓜的化感抑制作用存在濃度效應(yīng)。在同一塊土地上,連續(xù)種植西瓜,由于其化感物質(zhì)積累的過(guò)多,抑制西瓜生長(zhǎng),造成連作障礙。因此西瓜栽培應(yīng)避免連作,采用輪作。輪作后土壤微生物活性得到改善,化感物質(zhì)在較長(zhǎng)的時(shí)間內(nèi)揮發(fā)、分解或被土壤吸附固定,使自毒物質(zhì)濃度降低,減輕自毒作用。另外,增施有機(jī)肥,可以改善根系分泌物種類,提高土壤微生物活性,促進(jìn)化感物質(zhì)的分解。同時(shí)建議在西瓜生產(chǎn)中,應(yīng)及時(shí)將西瓜的殘株、落葉清理掉,避免其通過(guò)淋溶或腐解的形式進(jìn)入土壤,以減輕化感抑制作用。

    柴強(qiáng),馮福學(xué).2007.玉米根系分泌物的分離鑒定及典型分泌物的化感效應(yīng).甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),42(5):43-48.

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