GC 法測定燒傷靈酊中右旋龍腦的含量

陳關鍵，陳爽（1.重慶市合川區(qū)中醫(yī)院，重慶市401519；.重慶市疾病預防控制中心，重慶市40004）

燒傷靈酊由虎杖、黃柏、冰片等多味中藥組成，具清熱燥濕、解毒消腫、收斂止痛之功效，用于治療各種原因引起的Ⅰ、Ⅱ度燒傷[1]。冰片為方中主藥之一，傳統(tǒng)醫(yī)學認為，冰片有開竅醒神、清熱止痛、生肌之功；現(xiàn)代醫(yī)學研究表明，冰片具有抗菌、抗炎、止痛的功效[2]。筆者采用氣相色譜（GC）法對燒傷靈酊中冰片的有效成分右旋龍腦進行含量測定，所建立的方法簡便、靈敏、重復性好，可用于該制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

6890N型GC儀，包括其化學工作站等（美國Agilent公司）。

右旋龍腦對照品（批號：111688-200701）、水楊酸甲酯（批號：110707-200708）均由中國藥品生物制品檢定所提供；燒傷靈酊（石家莊樂仁堂制藥有限責任公司，批號：20080521-1、20080521-2、20080521-3）；氮氣、氫氣和空氣為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：ZB-WAX毛細管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm），固定相為聚乙二醇，涂布濃度為100%；柱流量：2.0 mL·min-1；檢測器：氫火焰離子化檢測器（FID）；載氣：N2，流量為45 mL·min-1；燃氣：H2，流量為40 mL·min-1；助燃氣：空氣，流量為450 mL·min-1；進樣口溫度：200 ℃；檢測器溫度：280 ℃；進樣量：1 μL；分流進樣，分流比為10∶1；程序升溫：初始溫度120℃，保持10 min，以20℃·min-1升至200℃，保持4 min。在上述條件下，右旋龍腦峰與內(nèi)標峰及其他雜質峰達到基線分離，分離度均＞1.5，理論板數(shù)按右旋龍腦峰計算應不低于2 000[3～5]。

2.2 溶液的制備

2.2.1 內(nèi)標溶液 精密稱取內(nèi)標物水楊酸甲酯0.500 0 g，置于50 mL量瓶中，加無水乙醇定容，搖勻，即得。

2.2.2 對照品溶液 精密稱取右旋龍腦對照品0.125 0 g，置于25 mL量瓶中，加無水乙醇定容，搖勻，即得。

2.2.3 供試品溶液 精密移取樣品0.1 mL，置于10 mL量瓶中，加上述內(nèi)標溶液1 mL，再加無水乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.4 陰性對照溶液 精密移取缺冰片的陰性樣品0.1 mL，按“2.2.3”項下方法制備陰性對照溶液。

2.3 專屬性試驗

取無水乙醇、內(nèi)標溶液、對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液進行GC分析。結果表明，陰性對照溶液色譜圖中無干擾吸收峰，表明其對樣品測定無干擾，專屬性強。色譜見圖1。

2.4 線性關系考察

精密吸取上述對照品溶液0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL，分別置10 mL量瓶中，各加上述內(nèi)標溶液1 mL，再加無水乙醇至刻度，搖勻。取1 μL注入GC儀，以右旋龍腦濃度（Y）為縱坐標，右旋龍腦與內(nèi)標的峰面積比值（X）為橫坐標，制備標準曲線，得回歸方程為Y＝0.561 4X+0.008 9（r＝0.999 8，n＝6）。結果表明，右旋龍腦檢測濃度在0.2～0.7 mg·mL-1范圍內(nèi)同其與內(nèi)標的峰面積比值呈良好線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取上述對照品溶液1.0 mL，置10 mL量瓶中，加上述內(nèi)標溶液1 mL，再加無水乙醇至刻度，搖勻，取1 μL注入GC儀，重復進樣6次，測定峰面積。結果，平均峰面積為0.876 0，RSD＝1.08%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一供試品溶液適量，分別于0、1、4、8、12、18 h進樣分析，測定峰面積。結果，平均峰面積為0.909 2，RSD＝0.28%（n＝6），表明供試品溶液在18 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品適量，共6份，分別按“2.2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述色譜條件測定。結果，平均峰面積為0.899 1，RSD＝0.43%（n＝6），表明本方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取9份右旋龍腦濃度為50.0 g·L-1的樣品溶液0.05 mL，置于10 mL量瓶中，分別加濃度為50.0 g·L-1的對照品溶液380、380、380、480、480、480、580、580、580 μL，加上述內(nèi)標溶液1 mL，再加無水乙醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，進行GC分析，計算加樣回收率，結果見表1。

2.9 樣品含量測定

按上述色譜條件和方法測定3批樣品，分別進樣，記錄峰面積，計算樣品中右旋龍腦的含量，結果見表2。

3 討論

燒傷靈酊對多種細菌有較強的抗菌作用；可涼血、止血、止痛；能改善創(chuàng)面營養(yǎng)，促進新生肉芽組織生長，達到清創(chuàng)、去腐生肌和皮膚再生的目的；減少滲出，促使創(chuàng)面干燥等[6]。本試驗采用GC法，在上述色譜條件下測定燒傷靈酊中右旋龍腦的含量，以水楊酸甲酯為內(nèi)標物，以聚乙二醇為固定液，結果表明該方法專屬性強、靈敏度高；并且除固定相為聚乙二醇外，其他試驗條件均可作適當調整，測定結果不受影響，表明方法耐用性好。因此，該方法可用于本制劑的質量控制。

表2 3批中試樣品測定結果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of 3 batches of samples（n＝3）

[1] 彭如習，陳 樺，呂雪斌，等.HPLC法測定燒傷靈酊中虎杖苷的含量[J].中藥材，2005，28（6）：514.

[2] 孫曉萍，歐立娟，宓穗卿，等.冰片抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18（5）：353.

[3] 潘金火，嚴國俊.氣相色譜法測定潰可寧貼片中龍腦的含量[J].中成藥，2005，27（4）：469.

[4] 徐 華，劉偉華，楊少芳.氣相色譜法測定膚康軟膏中冰片的含量[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2005，25（8）：743.

[5] 張開蓮，葉 云，王 俊，等.毛細管氣相色譜法測定雪抑樂中龍腦的含量[J].中國藥房，2007，18（30）：2 355.

[6] 張蜀蕓，廖慧中.燒傷靈酊治療壓瘡39例療效觀察[J].齊魯護理雜志，2009，15（1）：123.