不同基質(zhì)的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿體外溶出研究Δ

胡立志，李靜，桂卉（湖南中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)沙市410007）

吳藿降壓滴丸為吳茱萸和淫羊藿提取物經(jīng)精制后制成的滴丸，主要治療高血壓兼有肝寒、濁氣上逆的病證。其主要成分為吳茱萸堿、淫羊藿苷等。目前滴丸的基質(zhì)種類很多，為了考察不同基質(zhì)（如聚乙二醇（PEG）4000、PEG6000、泊洛沙姆-188）制備的本制劑的差異，本試驗(yàn)以吳茱萸堿的累積溶出量為指標(biāo)，測(cè)定其在不同基質(zhì)制備的滴丸中的體外溶出情況，為選擇最佳的滴丸基質(zhì)提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與試藥

ZRS-8G型智能溶出度實(shí)驗(yàn)儀（天津大學(xué)無線電廠）；1200型高效液相色譜（HPLC）儀（美國Agilent公司）；KQ5200DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率：450 W）；AUY120型分析天平（日本島津公司）。

吳茱萸堿對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110802-200606）；吳藿降壓滴丸（湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥劑教研室自制）；人工胃液按2005年版《中國藥典》（二部）方法[1]配制；PEG4000、PEG6000（天津科密歐化學(xué)試劑有限公司）；泊洛沙姆-188（湖北恒碩化工有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 吳藿降壓滴丸的制備

吳茱萸經(jīng)提取純化、濃縮干燥得到浸膏后，粉碎，過100目篩，得吳茱萸浸膏粉，備用；淫羊藿經(jīng)40%乙醇提取過濾后，經(jīng)大孔吸附樹脂純化處理，同法干燥，粉碎，得到淫羊藿浸膏粉。將2種干浸膏粉按一定比例混合后分別與PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆-188作為基質(zhì)制成滴丸。

2.2 吳茱萸堿含量測(cè)定方法

2.2.1色譜條件色譜柱：NUCLEOSIL 100-5 C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-甲醇-水（38∶19∶43）；檢測(cè)波長(zhǎng)：225 nm；柱溫：30 ℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按吳茱萸堿峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000。

2.2.2 溶液的制備 （1）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取吳茱萸堿對(duì)照品適量，置于棕色量瓶中，加甲醇溶解，配成濃度為100.0 μg·mL-1的吳茱萸堿對(duì)照品貯備液。精密吸取此貯備液10 mL，置于50 mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。（2）供試品溶液的制備：分別精密稱取以PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆-188為基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸20粒，計(jì)算平均重量，研細(xì)后分別稱取與平均重量相應(yīng)的滴丸，置于100 mL量瓶中，用溶出介質(zhì)溶解，超聲1 h，冷卻至室溫，用溶出介質(zhì)定容，搖勻，分別作為供試品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取溶出介質(zhì)、吳茱萸堿對(duì)照品溶液和供試品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ各10 μL進(jìn)樣，考察溶出介質(zhì)對(duì)吳茱萸堿的含量測(cè)定有無干擾，色譜見圖1。

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取吳茱萸堿對(duì)照品貯備液0.1、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mL，置于10 mL棕色量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取10 μL，分別注入色譜儀，以吳茱萸堿進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)，吳茱萸堿的峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為Y＝129.17X+8.847 3（r＝0.999 8）。結(jié)果表明，吳茱萸堿進(jìn)樣量在1.0～100.0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取吳茱萸堿對(duì)照品溶液適量，進(jìn)樣10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄吳茱萸堿的峰面積。結(jié)果，RSD＝0.64%（n＝6），表明儀器精密度良好。

2.2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 分別精密吸取供試品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，于0、2、4、8、12、24 h進(jìn)樣，記錄吳茱萸堿的峰面積。結(jié)果，各供試品溶液中吳茱萸堿峰面積的RSD分別為0.47%、0.51%、0.40%（n均為6），表明各供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性均良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取以PEG4000、PEG6000、泊洛沙姆-188為基質(zhì)的吳藿降壓滴丸，按“2.2.2”項(xiàng)下方法各制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣，測(cè)定吳茱萸堿的峰面積。結(jié)果，RSD分別為2.27%、1.86%、1.57%（n均為6），表明方法重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸細(xì)粉6份，每份約20 mg，置于100 mL容量瓶中，分別加入?yún)擒镙菍?duì)照品貯備液10、15、20 mL各2份，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，測(cè)定每份溶液中吳茱萸堿的含量，每份測(cè)定3次，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

2.2.9 樣品含量測(cè)定 將每個(gè)取樣時(shí)間點(diǎn)取得的樣品液用0.45 μm的微孔濾膜濾過，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定樣品液中吳茱萸堿含量。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Tab 1 Results of recovery test

2.3 溶出度試驗(yàn)

2.3.1 溶出介質(zhì)的選擇 由于本試驗(yàn)所測(cè)得的指標(biāo)成分吳茱萸堿可溶于熱水，易溶于甲醇、乙醇等有機(jī)溶劑，為了選擇最佳的溶出介質(zhì)，筆者考察了吳藿降壓滴丸在水、10%的甲醇水溶液、人工胃液、人工腸液中的溶出情況。結(jié)果表明，在10%的甲醇水溶液中，不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的溶出最多，故選用10%的甲醇水溶液作為溶出介質(zhì)。不同溶出介質(zhì)中吳茱萸堿的溶出度見表2。

表2 不同溶出介質(zhì)中吳茱萸堿的溶出度（%）Tab 2 Dissolution of evodiamine in different dissolution mediums（%）

2.3.2 溶出方法的選擇 以10%的甲醇水溶液100 mL為溶出介質(zhì)，溫度（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100 r·min-1。首先比較了轉(zhuǎn)籃法和漿法，45 min內(nèi)，轉(zhuǎn)籃法平均溶出量為87.4%，漿法平均溶出量為98.2%，因此宜選用漿法。另外，還比較了100、80、50 r·min-13種轉(zhuǎn)速，45 min平均溶出量分別為98.6%，94.1%，93.7%，因此選用轉(zhuǎn)速100 r·min-1。因?yàn)閰寝浇祲旱瓮柚袇擒镙菈A的含量較少，故選用小杯法。

2.3.3 100%溶出量測(cè)定 取“2.2.2”項(xiàng)條件下供試品溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，按“2.2.9”項(xiàng)下方法測(cè)定吳茱萸堿的含量，作為不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的100%溶出量。

2.3.4 溶出曲線的制備 按2005年版《中國藥典》（一部）項(xiàng)下[1]規(guī)定，采用漿法測(cè)定藥物的溶出度。溶出介質(zhì)為100 mL的10%的甲醇水溶液，溫度（37±0.5）℃，轉(zhuǎn)速100 r·min-1。分別精密稱取不同基質(zhì)制得的吳藿降壓滴丸，投入溶出杯中后，分別于1、3、5、10、15、20、30、45、60 min抽取溶出介質(zhì)2 mL（同時(shí)加補(bǔ)2 mL的空白介質(zhì)），用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液作為樣品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣10 μL，測(cè)定吳茱萸堿峰面積，計(jì)算出各個(gè)時(shí)間點(diǎn)吳茱萸堿的溶出量，再與100%溶出量比較計(jì)算溶出度，每種基質(zhì)滴丸測(cè)定6粒，求出各時(shí)間下的累積溶出百分?jǐn)?shù)[2，3]，以平均累積溶出度（%）為縱坐標(biāo)，時(shí)間（t，min）為橫坐標(biāo)，制備溶出度曲線。不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的累積溶出度見表3；不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸的溶出曲線見圖2。

2.3.5 溶出度比較 將表3中的累積溶出度數(shù)據(jù)按威布爾公式在Excel中計(jì)算[4]，分別求出累積溶出參數(shù)m、t0.3、t0.5、td、t0.8，并對(duì)其進(jìn)行方差分析[5]。結(jié)果，各溶出參數(shù)都具有顯著性差異（P＜0.05或P＜0.01），表明不同基質(zhì)的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的體外溶出特性存在極顯著性差異。不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的溶出參數(shù)見表4；溶出參數(shù)的方差分析結(jié)果見表5。

表3 不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的累積溶出度（±s，n＝6）Tab3 Theaccumulativedissolutionofevodiaminein Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

表3 不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的累積溶出度（±s，n＝6）Tab3 Theaccumulativedissolutionofevodiaminein Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

時(shí)間/min 累積溶出度/%泊洛沙姆-188PEG4000PEG6000 1 3 51 0 15 20 30 45 60 4.84±0.90 10.87±1.66 33.98±1.41 80.57±3.43 92.92±3.49 95.48±3.54 98.62±1.12 99.02±0.45 99.14±0.34 8.60±0.77 31.01±1.34 65.61±1.17 85.74±1.39 92.97±2.03 93.21±1.24 93.40±1.47 95.17±1.33 95.24±1.47 8.23±0.30 28.02±0.77 56.12±1.26 81.24±3.27 88.44±1.09 90.35±1.30 92.44±1.65 93.01±1.23 93.60±0.96

圖2 不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸的溶出曲線Fig 2 The dissolution profiles of the evodiamine in Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix

表4 不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的溶出參數(shù)（±s，n＝6）Tab 4 The dissolution parameters of the evodiamine in Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

表4 不同基質(zhì)制備的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的溶出參數(shù)（±s，n＝6）Tab 4 The dissolution parameters of the evodiamine in Wuhuo antihypertensive dropping pills with different matrix（±s，n＝6）

基質(zhì)泊洛沙姆-188 PEG4000 PEG6000溶出參數(shù)m 1.25±0.05 0.85±0.01 0.85±0.01 t0.3/min 4.56±0.29 2.47±0.18 2.87±0.14 t0.5/min 7.75±0.53 5.39±0.41 6.30±0.33 td/min 10.38±0.76 8.29±0.65 9.70±0.53 t0.8/min 15.19±1.23 14.53±1.17 17.03±1.03

表5 溶出參數(shù)的方差分析Tab 5 Analysis of variance of dissolution parameters

3 討論

由于本滴丸中吳茱萸堿的含量相對(duì)較低，而溶出含量測(cè)定方法中線性范圍和檢查靈敏度要求指標(biāo)成分必須達(dá)到一定的量，經(jīng)參考文獻(xiàn)[6]，本試驗(yàn)中溶出度測(cè)定方法選用小杯法，且僅加入100 mL的溶出介質(zhì)，避免了溶出度測(cè)定時(shí)溶液中吳茱萸堿含量低的問題。

試驗(yàn)結(jié)果表明，3種基質(zhì)的吳藿降壓滴丸中吳茱萸堿的體外溶出t0.8均在20 min以內(nèi)，

其累積溶出量均達(dá)到90%以上，說明吳茱萸堿在10%的甲醇水溶液介質(zhì)中溶出情況較好。其中，吳茱萸堿在泊洛沙姆-188為基質(zhì)的滴丸中累積溶出量（99.1%）高于PEG類基質(zhì)的滴丸（95.2%，93.6%），提示可能是滴丸中的基質(zhì)（泊洛沙姆-188、PEG類）均為非離子型表面活性劑，對(duì)吳茱萸堿的溶出起增溶劑的作用，且泊洛沙姆-188增溶效果強(qiáng)于PEG類基質(zhì)所致。

[1] 國家藥典委員會(huì)編.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄72、附錄73.

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