愈骨膠囊鎮(zhèn)痛和抗炎活性的實驗研究Δ

王琴，邢茂，易美彤，敖利(.重慶市中醫(yī)院藥物研究部，重慶市40000；.第三軍醫(yī)大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科，重慶市400037)

愈骨膠囊是重慶市中醫(yī)院中醫(yī)骨傷驗方，由血竭、骨碎補、續(xù)斷、牛膝、紅花、元胡等組方而成。方中血竭活血化瘀、消腫止痛為君藥，骨碎補、續(xù)斷、牛膝補肝腎、接骨續(xù)筋為臣藥，紅花、元胡等活血化瘀、止痛為佐使。在臨床使用中，愈骨膠囊具有緩解腫痛、促進骨折愈合的作用，但尚缺乏動物實驗藥理數(shù)據(jù)證明。為此，本課題組研究不同劑量愈骨膠囊在鎮(zhèn)痛、抗炎方面的作用，為其在臨床合理使用提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

ME235s型電子天平(德國賽多利斯有限公司)；UV-2501型紫外分光光度儀(日本島津公司)；HWS24型電熱恒溫水浴箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；5430 R型臺式高速冷凍離心機(德國Eppendorf公司)。

1.2 試藥

愈骨膠囊(重慶市中醫(yī)院藥物研究部，批號:091215)；阿司匹林(山東新華制藥股份有限公司，批號:0702238)；吲哚美辛(山西亨瑞達制藥有限公司，批號:080501)；冰醋酸(分析純，上?；瘜W(xué)試劑有限公司)；二甲苯(分析純，重慶瑞平化工有限公司)；伊文思藍(國藥集團化學(xué)試劑有限公司)。

1.3 動物

清潔級昆明種小鼠，♀♂兼用，體重(20±2)g，由重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供(動物生產(chǎn)合格證號:SCXK(渝)2007-0001)。

2 方法與結(jié)果

2.1 小鼠熱板法觀察愈骨膠囊的鎮(zhèn)痛作用[1]

篩選在(55±0.5)℃恒溫?zé)岚宄霈F(xiàn)添后足反應(yīng)時間＞5 s且＜30 s的♀小鼠50只，隨機均分為5組，即生理鹽水、吲哚美辛(0.02 g·kg-1)和愈骨膠囊高、中、低劑量(0.8、0.4、0.2 g·kg-1)組。給藥前，將小鼠投入熱板以出現(xiàn)舔后足為疼痛反應(yīng)指標，間隔5 min測痛閾值1次，將3次測定值的平均值作為給藥前痛閾值。同法測定各組小鼠給藥后60、90、180 min的痛閾值。愈骨膠囊對熱刺激所致小鼠疼痛反應(yīng)痛閾值的影響見表1。

表1 愈骨膠囊對熱刺激所致疼痛反應(yīng)痛閾值的影響(±s，n＝10)Tab 1Effect of Yugu capsules on threshold of pain reaction in mice induced by heat stimulatio(n±s，n＝10)

表1 愈骨膠囊對熱刺激所致疼痛反應(yīng)痛閾值的影響(±s，n＝10)Tab 1Effect of Yugu capsules on threshold of pain reaction in mice induced by heat stimulatio(n±s，n＝10)

與生理鹽水組比較:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01vs.NS group:＊P＜0.05，＊＊P＜0.01

180 min 19.10±4.1119.04±4.0521.62±4.1421.31±4.21＊24.52±3.92＊分組生理鹽水組吲哚美辛組愈骨膠囊低劑量組愈骨膠囊中劑量組愈骨膠囊高劑量組劑量-20 mg·kg-1 0.2 g·kg-1 0.4 g·kg-1 0.8 g·kg-1給藥前痛閾值/s 18.20±4.3017.90±3.6019.34±3.5217.97±3.3619.85±4.22給藥后不同時間痛閾值/s 60 min 18.13±4.3328.28±3.57＊＊19.80±3.4219.06±3.5621.11±3.8590 min 18.84±4.0022.22±4.28＊21.46±4.1019.48±3.3122.94±4.20

結(jié)果表明，與給藥前比較，給藥后60 min時，吲哚美辛組小鼠熱刺激所致疼痛反應(yīng)痛閾值極顯著延長(P＜0.01)，但在180 min時作用減弱；在給藥后180 min時，愈骨膠囊高、中劑量組小鼠的痛閾值顯著延長(P＜0.05)。

2.2 扭體法觀察愈骨膠囊的鎮(zhèn)痛作用[2]

取♂小鼠60只，隨機均分為6組，即正常、模型、阿司匹林(0.2 g·kg-1)和愈骨膠囊高、中、低劑量(0.8、0.4、0.2 g·kg-1)組。在末次給藥30 min后，各組小鼠ip0.6%冰醋酸0.1 mL·10 g-1，扭體反應(yīng)表現(xiàn)為小鼠腹部收縮內(nèi)陷、軀體扭曲、后肢伸展及蠕動。記錄各組小鼠15 min內(nèi)發(fā)生扭體的次數(shù)，計算抑制率:抑制率(%)＝(模型組腫脹度－給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。愈骨膠囊對醋酸致小鼠扭體反應(yīng)的影響見表2。

結(jié)果表明，與正常組比較，模型組對醋酸致扭體反應(yīng)明顯，提示模型復(fù)制成功。與模型組比較，15 min內(nèi)，愈骨膠囊高、中、低劑量組小鼠的扭體次數(shù)顯著減少(P＜0.01或P＜0.05)。

2.3 二甲苯致小鼠耳腫脹模型觀察愈骨膠囊的抗炎作用

表2 愈骨膠囊對醋酸致扭體反應(yīng)的影響(±s，n＝10)Tab 2Effect of Yugu capsules on frequency of writhing response in mice induced by acetic aci(d±s，n＝10)

表2 愈骨膠囊對醋酸致扭體反應(yīng)的影響(±s，n＝10)Tab 2Effect of Yugu capsules on frequency of writhing response in mice induced by acetic aci(d±s，n＝10)

與正常組比較:＊P＜0.01；與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

分組正常組模型組阿司匹林組愈骨膠囊低劑量組愈骨膠囊中劑量組愈骨膠囊高劑量組劑量/g·kg-1抑制率/%----48.2218.0823.0129.040.20.20.40.815 min內(nèi)扭體次數(shù)-36.5±5.82＊18.9±4.38##29.9±6.22#28.1±7.48#25.9±6.10##

取♂小鼠60只，分組及給藥同“2.2”項下方法。在ig第7天末次ig給藥30 min后，將二甲苯均勻涂于小鼠右耳廓前后兩面，左耳不做任何處理，每只小鼠20 μL。20 min后，將小鼠脫頸椎處死，沿耳廓基線剪下兩耳，用直徑9 mm打孔器在耳部同一位置打下圓形耳片，用電子天平稱取耳片重量，右耳片重量減去左耳片重量即為腫脹度，計算抑制率:抑制率(%)＝(模型組腫脹度－給藥組腫脹度)/模型組腫脹度×100%。愈骨膠囊對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響見表3。

表3 愈骨膠囊對二甲苯致耳腫脹的影響(±s，n＝10)Tab 3Effect of Yugu capsules on degree of ear swelling in mice induced by xylene(±s，n＝10)

表3 愈骨膠囊對二甲苯致耳腫脹的影響(±s，n＝10)Tab 3Effect of Yugu capsules on degree of ear swelling in mice induced by xylene(±s，n＝10)

與正常組比較:＊P＜0.01；與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

45.889.8212.2614.39分組正常組模型組阿司匹林組愈骨膠囊低劑量組愈骨膠囊中劑量組愈骨膠囊高劑量組劑量/g·kg-1抑制率/%----0.20.20.40.8腫脹度/mg 0.21±0.1110.36±1.00＊5.61±0.80##9.34±1.01#9.10±1.12#8.88±1.52##

結(jié)果表明，與正常組比較，模型組小鼠耳腫脹度顯著升高，提示模型復(fù)制成功。與模型組比較，阿司匹林組小鼠耳腫脹度顯著降低(P＜0.01)；愈骨膠囊高、中、低劑量組小鼠耳腫脹度顯著降低(P＜0.01或P＜0.05)。

2.4 醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加模型觀察愈骨膠囊的抗炎作用

取♂小鼠60只，隨機均分為6組，分組及給藥同“2.2”項下方法。第7天ig給藥后1 h，小鼠尾iv 0.5%伊文思藍生理鹽水溶液0.1 mL·10 g-1，隨即ip0.5%冰醋酸溶液0.1 mL·10 g-1，20 min后脫頸椎處死，打開腹腔，用6 mL生理鹽水分數(shù)次洗滌腹腔，吸管吸出全部洗滌液，合并后加入生理鹽水至10 mL，3000 r·min-1離心15 min，取上清液于590 nm波長處測定吸光度(OD)值。愈骨膠囊對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的影響見表4。

結(jié)果表明，與正常組比較，模型組小鼠腹腔毛細血管通透性顯著增強，提示模型復(fù)制成功。與模型組比較，阿司匹林組小鼠OD值顯著降低(P＜0.01)；愈骨膠囊高、中劑量組小鼠OD值顯著降低(P＜0.05)，但各劑量組間無統(tǒng)計學(xué)差異。

3 討論

骨折早期因局部筋脈損傷，血離經(jīng)脈，癖積不散，常伴有疼痛、腫脹、功能障礙等癥狀，治則以活血化癖、消腫止痛為主。愈骨膠囊處方中血竭、紅花、元胡等并用能起到活血化瘀、消腫止痛的功效，可達到上述骨折初期治療原則的要求。

表4 愈骨膠囊對醋酸致腹腔毛細血管通透性增加的影響(±s，n＝10)Tab 4Effect of Yugu capsules on the increase of capillary vessel permeability induced by acetic aci(d±s，n＝10)

表4 愈骨膠囊對醋酸致腹腔毛細血管通透性增加的影響(±s，n＝10)Tab 4Effect of Yugu capsules on the increase of capillary vessel permeability induced by acetic aci(d±s，n＝10)

與正常組比較:＊P＜0.01；與模型組比較:#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal group:＊P＜0.01；vs.model group:#P＜0.05，##P＜0.01

分組正常組模型組阿司匹林組愈骨膠囊低劑量組愈骨膠囊中劑量組愈骨膠囊高劑量組劑量/g·kg-1--0.20.20.40.8 OD 0.04±0.010.33±0.08＊0.18±0.06##0.28±0.080.26±0.05#0.27±0.06#

愈骨膠囊作為重慶市中醫(yī)院驗方已使用多年，本研究依據(jù)目前臨床使用劑量，設(shè)計高、中、低劑量研究愈骨膠囊的抗炎、鎮(zhèn)痛作用及量效相關(guān)性。結(jié)果表明，愈骨膠囊能抑制二甲苯致小鼠耳腫脹及醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性的增加，能延長熱刺激所致小鼠疼痛反應(yīng)的痛閾值和減少醋酸所致小鼠扭體次數(shù)，說明愈骨膠囊具有一定抗炎、鎮(zhèn)痛功效，能夠改善骨折初期疼痛、腫脹等癥狀。但在實驗劑量范圍內(nèi)愈骨膠囊對實驗動物的抗炎、鎮(zhèn)痛作用無明顯劑量相關(guān)性。說明在抗炎、鎮(zhèn)痛作用方面，愈骨膠囊目前臨床使用劑量是合理的。

[1]李菁，王穎莉，李鵬，等.高載藥量萘普生微乳的制備及其抗炎鎮(zhèn)痛作用實驗研究[J].中國藥房，2010，21(5):406.

[2]李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)[M].第2版.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，2006:245.