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    針刀干預(yù)下小白鼠正常骨骼肌及筋膜微觀結(jié)構(gòu)變化的實(shí)驗(yàn)研究

    2011-07-30 09:08:02齊丹丹李殿寧李開(kāi)平
    針灸臨床雜志 2011年10期
    關(guān)鍵詞:小白鼠針刀骨骼肌

    齊丹丹,李殿寧,李開(kāi)平,蘆 娟,王 丹

    (南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京210046)

    自1976年朱漢章發(fā)明針刀以來(lái),應(yīng)用針刀治療軟組織損傷性疾病取得了良好的臨床療效。朱漢章認(rèn)為[1]針刀醫(yī)學(xué)是一種精密的體外操作的微創(chuàng)手術(shù)方法。但是,對(duì)于針刀干預(yù)下骨骼肌及筋膜的組織學(xué)微觀結(jié)構(gòu)變化,目前尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。筆者在南京中醫(yī)藥大學(xué)李殿寧導(dǎo)師指導(dǎo)下,觀察針刀干預(yù)下?lián)p傷組織自發(fā)的一系列炎癥修復(fù)過(guò)程,以及探討針刀醫(yī)學(xué)治療學(xué)的基礎(chǔ)機(jī)理,采用組織學(xué)HE染色方法,從骨骼肌及筋膜微觀結(jié)構(gòu)入手進(jìn)行了相關(guān)的實(shí)驗(yàn)研究?,F(xiàn)將實(shí)驗(yàn)研究情況報(bào)告如下。

    1 資料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1.1 研究對(duì)象 選擇小白鼠(18 g±2 g)26只,均由南京中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,隨機(jī)分為5組:空白對(duì)照組2只,針刀干預(yù)組1、針刀干預(yù)組2、針刀干預(yù)組3和針刀干預(yù)組4各6只,并對(duì)每組小白鼠依次進(jìn)行編號(hào)。

    1.1.2 實(shí)驗(yàn)器材 針刀0.4 mm×40 mm、飼養(yǎng)籠5個(gè)、無(wú)菌手套若干、飼料、墊料、照相機(jī)(像素1 000萬(wàn))、剪刀、碘酒、75%酒精、創(chuàng)可貼、自制固鼠板2個(gè),無(wú)水乙醇(分析醇)、10%福爾馬林溶液(4%甲醛溶液),TSJ-Ⅱ型全自動(dòng)脫水機(jī)、BMJ-Ⅲ型包埋機(jī)、BMJ-Ⅲ病理組織包埋冷凍臺(tái)、石蠟切片機(jī)、QP-9切片漂烘溫控儀(常州郊區(qū)中威電子儀器廠)。

    1.2 實(shí)驗(yàn)方法

    1.2.1 空白對(duì)照組 將該組小白鼠捆綁固定,對(duì)股部大轉(zhuǎn)子下定點(diǎn)部位去毛、消毒后,取該處肌肉組織一塊,其長(zhǎng)、寬約為0.5~1.0 mm、厚度約為1.0 mm,制作出石蠟切片后,于顯微鏡下觀察切片中骨骼肌的正常形態(tài)。

    1.2.2 針刀干預(yù)組 參照人體針刀治療四步操作法[2]進(jìn)行針切。以針刀干預(yù)組1為例,先將針刀干預(yù)組1的小白鼠依次固定于固鼠板上(腹部向下,背部向上),然后按照:定點(diǎn)——在小白鼠后腿伸直位股骨大轉(zhuǎn)子下定位為進(jìn)針點(diǎn)標(biāo)記后消毒;定向——針刃方向與局部骨骼肌纖維、血管神經(jīng)走向一致,避免針刃損傷深部組織結(jié)構(gòu);加壓——以左手拇指為押指,在進(jìn)針點(diǎn)下按壓;進(jìn)針與針切——用針刀(型號(hào)為0.4 mm×40 mm)迅速刺入進(jìn)針點(diǎn)皮下組織層達(dá)骨骼肌部位,并對(duì)病變部位行使縱向稍有間隔的連續(xù)切割3~5次后出針。比照針刀干預(yù)組1的干預(yù)方法,對(duì)針刀干預(yù)組2、針刀干預(yù)組3和針刀干預(yù)組4的小白鼠依次進(jìn)行針刀干預(yù)。

    1.2.3 針刀干預(yù)后的HE染色 將針刀干預(yù)組1、針刀干預(yù)組2、針刀干預(yù)組3和針刀干預(yù)組4小白鼠分別于針刀干預(yù)1 d、2 d、5 d和10 d后拉頸斷髓處死。然后,以各小白鼠針刀針切進(jìn)針點(diǎn)為中心,取相同部位肌肉組織一塊,其長(zhǎng)、寬約為0.5~1.0 mm,厚度約為1.0 mm,將組織塊放于4%甲醛溶液內(nèi)固定24 h后制作出石蠟切片,顯微鏡下觀察針切部位骨骼肌切片中組織結(jié)構(gòu)改變情況。

    2 結(jié)果

    利用組織學(xué)HE染色技術(shù)[3],觀察到正常骨骼肌經(jīng)針刀干預(yù)后在不同時(shí)間段所呈現(xiàn)的微觀結(jié)構(gòu)變化如圖1~圖4所示。其中:圖1針刀干預(yù)組1(針刀干預(yù)1 d后),在損傷部位可以觀察到:針切部位有肌纖維斷裂,肌組織與肌組織之間的結(jié)締組織即筋膜出現(xiàn)大量與肌細(xì)胞核大小、嗜堿性程度、部位均不同的炎癥細(xì)胞,且以成纖維細(xì)胞和巨噬細(xì)胞為主,并伴有紅細(xì)胞存在;圖2針刀干預(yù)組2(針刀干預(yù)2 d后),在損傷部位可以觀察到:肌纖維損傷,且在受損的肌細(xì)胞之間結(jié)締組繼續(xù)產(chǎn)生以巨噬細(xì)胞為主的炎癥反應(yīng),并伴有紅細(xì)胞存在;圖3針刀干預(yù)組3(針刀干預(yù)5 d后),在損傷部位可以觀察到:結(jié)締組織出現(xiàn)的巨嗜細(xì)胞處于消退狀態(tài),有新生成的毛細(xì)血管、紅細(xì)胞存在;圖4針刀干預(yù)組4(針刀干預(yù)10 d后),在損傷部位可以觀察到:結(jié)締組織填充在針切部位,并沒(méi)有形成肉芽組織或瘢痕組織。

    圖1 40倍 針刀干預(yù)組1(針切后1天)

    圖2 40倍 針刀干預(yù)組2(針切后2天)

    將空白組(如圖5所示)與針刀干預(yù)組(如圖1~圖4所示)比較,可以將觀察結(jié)果概括為:小白鼠股部大轉(zhuǎn)子下定點(diǎn)部位的正常骨骼肌及筋膜組織經(jīng)針刀干預(yù)后,出現(xiàn)了以血管為中心、巨噬細(xì)胞聚集的反應(yīng)性炎變,以及之后發(fā)生的一系列修復(fù)過(guò)程,修復(fù)結(jié)果趨向于正常骨胳肌及筋膜結(jié)構(gòu)。

    3 討論

    針刀針切軟組織導(dǎo)致肌與筋膜組織的連續(xù)性中斷并出現(xiàn)針切反應(yīng)性炎變,其反應(yīng)主要表現(xiàn)為針切后的1 d和2 d內(nèi),針切部位出現(xiàn)以血管為中心、大量巨噬細(xì)胞和成纖維細(xì)胞聚集及紅細(xì)胞溢出情況,發(fā)生炎性細(xì)胞浸潤(rùn),成纖維細(xì)胞活躍[4~5],炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)可生成過(guò)氧化物(H2O2),而一氧化氮可降低因H2O2激活的白細(xì)胞的侵襲性,保護(hù)肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的完整性[6~8]。巨噬細(xì)胞的大量產(chǎn)生對(duì)損傷的修復(fù)起到3個(gè)重要作用:第一,巨噬細(xì)胞的產(chǎn)生可以吞噬細(xì)胞碎片、壞死組織和少量細(xì)菌,起到“清道夫”的作用[9];第二,巨噬細(xì)胞對(duì)于血管生成也有重要作用,巨噬細(xì)胞的大量增多促進(jìn)了局部毛細(xì)血管的生成,為局部缺血缺氧的骨骼肌重建提供了良好的血運(yùn);第三,據(jù)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn),巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)胞碎片的同時(shí)可以分泌生長(zhǎng)因子,從而激活肌肉組織存在于肌纖維膜和基膜之間的再生性干細(xì)胞——衛(wèi)星細(xì)胞。肌衛(wèi)星細(xì)胞的聚集和激活是肌組織再生的關(guān)鍵。針刀針切5 d后巨噬細(xì)胞消退,受損肌纖維修復(fù)情況良好,有新生毛細(xì)血管出現(xiàn)。經(jīng)過(guò)10 d修復(fù),干預(yù)部位的骨骼肌和筋膜經(jīng)過(guò)一系列修復(fù)過(guò)程,趨向于正常組織,修復(fù)情況良好。

    圖3 40倍針刀干預(yù)組3(針切后5天)

    圖4 40倍針刀干預(yù)組4(針切后10天)

    圖5 10倍正常骨胳肌

    筆者觀察針刀干預(yù)小鼠股部定點(diǎn)部位后骨骼肌和筋膜結(jié)構(gòu)的變化規(guī)律,發(fā)現(xiàn)在針刀干預(yù)后小鼠的肌組織和筋膜組織修復(fù)情況良好,無(wú)中性粒細(xì)胞出現(xiàn)的感染情況。雖然小鼠皮膚的結(jié)構(gòu)不同于人體,無(wú)法觀察皮膚的愈合情況,但是根據(jù)外科學(xué)研究推斷,針刀在進(jìn)行治療的過(guò)程中,因嚴(yán)格遵循外科手術(shù)的無(wú)菌操作,無(wú)代表炎癥反應(yīng)的中性粒細(xì)胞等出現(xiàn),針刀干預(yù)人體皮膚后所形成的自身組織修復(fù)是創(chuàng)口小、清潔、無(wú)感染、不產(chǎn)生或很少產(chǎn)生肉芽組織的愈合,屬于傷口一期愈合[10]。筆者認(rèn)為針刀針切過(guò)程,盡管是對(duì)皮膚、皮下組織、骨骼肌和筋膜連續(xù)性的破壞過(guò)程,但同時(shí)可以達(dá)到骨骼肌的再生而重建原有的正常結(jié)構(gòu)與功能,完全性病理性再生[11]??煞只募?xì)胞,在基因的調(diào)控下分化發(fā)育成為不同種類的組織和器官。

    4 結(jié)論

    為了填補(bǔ)針刀治療的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究,筆者觀察針刀干預(yù)小白鼠正常組織后,HE染色觀察小鼠骨骼肌的微觀結(jié)構(gòu)變化可以概括為:針切反應(yīng)性炎變-基因調(diào)控-組織重建過(guò)程,即針刀針切組織可在基因調(diào)控下定向修復(fù)和重建,從而恢復(fù)病變組織的重建過(guò)程。這一結(jié)論為針刀醫(yī)學(xué)治療學(xué)的基礎(chǔ)機(jī)理研究提供了形態(tài)學(xué)依據(jù),具有積極的意義。

    [1]朱漢章.針刀醫(yī)學(xué)原理[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:26-29

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    [4]高巍巍,李殿寧,丁月東.針刀治療臀小肌肌筋膜炎臨床方法和機(jī)理研究[J].中醫(yī)藥信息,2011,28(3):111

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