Ki67、nm23基因在鼻咽癌中的表達(dá)及其意義

韋祝新 ，李 萍 ，王仁生 ，甘浪舸 ，甘 媚

1.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院放療科，廣西 南寧 530021；2.廣西醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科，廣西 南寧 530021

腫瘤轉(zhuǎn)移是腫瘤的惡性標(biāo)志和特征，也是腫瘤患者治療失敗和死亡的重要原因，涉及到一系列復(fù)雜的問題，如腫瘤脫離母體，侵襲周圍組織進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)，在遠(yuǎn)處種植，逃離免疫監(jiān)視，形成轉(zhuǎn)移性腫瘤。腫瘤的轉(zhuǎn)移有很多方面的原因，它是一個復(fù)雜的過程，且由很多因素、步驟和基因共同作用。要做到對腫瘤治療和預(yù)防其轉(zhuǎn)移，需深入地研究與腫瘤有關(guān)的基因。研究表明Ki67是一種與周期相關(guān)的基因[1]，nm23基因具有調(diào)控轉(zhuǎn)移抑制的作用。腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、分期、浸潤、轉(zhuǎn)移多與其表達(dá)相關(guān)[2-3]。據(jù)調(diào)查我區(qū)是鼻咽癌的高發(fā)地區(qū)之一，預(yù)防和治療鼻咽癌時Ki67、nm23基因的表達(dá)對其有重要的指導(dǎo)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取我院放療科1994～2001年治療的鼻咽癌患者66例，其中，男 53例，女 13例；年齡最大85歲，最小25歲，平均（42.28±13.15）歲；有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者分別為33例；臨床分期：Ⅰ期1例，Ⅱ期18例，Ⅲ期31例，Ⅳ期16例；在所有患者中，46例有頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，20例無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移；病理分型：65例為低分化鱗狀細(xì)胞癌，1例為鱗狀細(xì)胞癌2級。

1.2 主要試劑

兔抗人單克隆抗體nm23，免疫組化二步法試劑盒（KIT-9801）、單克隆抗體（即用型 MAB-0129），鼠抗人 Ki67、L 多聚賴氨酸（GLU-0040）。進(jìn)行蘇木精-伊紅染色切片組織學(xué)證實(shí)。

1.3 方法

通過門診進(jìn)行復(fù)查、查看病歷、電話或信件調(diào)查等方式，收集符合標(biāo)準(zhǔn)的病例。納入標(biāo)準(zhǔn)：在我院放療科進(jìn)行的第一次放射治療，這些患者必須由我院完成其鼻咽部的病理活檢及病理診斷并且保存有原始病理組織蠟塊。在治療前已完成對鼻咽部得CT掃描檢查，存在有T、N、M的原始分期，放療量為NPDT 6 800～7 200 CGy，未進(jìn)行化療。陽性對照采用已知的陽性片，空白對照采用PBS代替一抗，組織學(xué)參照可運(yùn)用蘇木精-伊紅染色。

1.4 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

Ki67表達(dá)陽性的判定：對細(xì)胞核著色時呈現(xiàn)棕黃顏色，在顯微鏡下觀察，常選取5個高倍鏡視野，在每個高倍鏡視野下對100個腫瘤細(xì)胞進(jìn)行觀察，陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)為總的陽性率＜5%，判斷為“+”的標(biāo)準(zhǔn)為陽性率在5%～20%之間，判斷為“++”時陽性率應(yīng)在 21%～40%之間，判斷為“+++”需滿足陽性率在 41%～75%之間，＞75%判定為“++++”。nm23表達(dá)陽性的判定：胞漿著色，判定標(biāo)準(zhǔn)同Ki67，鼻咽癌分期采用92福州TNM分期法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用秩和檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Ki67、nm23的表達(dá)均與年齡、性別無關(guān)。鼻咽癌伴遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中,Ki67的表達(dá)明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組（z=-5.395,P＜0.001），而nm23的表達(dá)明顯低于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組（z=-3.866，P＜0.001）。Ki67表達(dá)隨臨床分期的增高而增高，呈正相關(guān)（r=0.268，P=0.029＜0.05）。Nm23的表達(dá)隨臨床分期的增高而降低，呈負(fù)相關(guān)（r=-0.246，P=0.040＜0.05）。Ki67 和 nm23 的表達(dá)與 T 分期無相關(guān)性（r=0.177、-0.130，均 P＞0.05）。Ki67、nm23的表達(dá)在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（z=-1.498、-0.901）。Ki67 與 nm23 的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.327，P=0.007）。見表1。

3 討論

Ki67、nm23基因是學(xué)者們近年研究得較多的癌基因，在很多醫(yī)院病理科對乳腺癌、肝癌等作常規(guī)檢測，對鼻咽癌尚需進(jìn)一步循證。在人體內(nèi)Ki67基因位于10q25（ter）上，研究顯示有絲分裂活動與它有緊密的關(guān)系，除G0期以外它表達(dá)于細(xì)胞周期中的其他所有時期，Ki67蛋白在有絲分裂完成后迅快降低溶解。Ki67是雙鏈的分子結(jié)構(gòu)，只在增殖的細(xì)胞表達(dá)。其高表達(dá)是細(xì)胞增殖活躍的重要標(biāo)記，對腫瘤的轉(zhuǎn)移及預(yù)后有影響。Ki67的表達(dá)作為反映腫瘤惡性程度的指標(biāo)早已被很多學(xué)者公認(rèn)。Nm23基因是Steeg等在篩選7個k-1735小鼠黑色素瘤細(xì)胞株時，用消減雜交法分離到的能抑制轉(zhuǎn)移的CDNA的克隆，這一克隆即nm23。它定位于17q21.3，編碼17KD蛋白。其表達(dá)水平與腫瘤的侵襲性和轉(zhuǎn)移傾向均有相關(guān)，其主要功能：①抑制細(xì)胞微管系統(tǒng)異常聚合，防止減速分裂時紡錘體異常，而導(dǎo)致的非整倍體腫瘤細(xì)胞形成，同時可降低腫瘤細(xì)胞的侵襲性和轉(zhuǎn)移能力；②阻斷G蛋白介導(dǎo)的生長信號傳導(dǎo)，從而抑制腫瘤細(xì)胞的生長[4]，很多學(xué)者認(rèn)為它是反應(yīng)腫瘤預(yù)后良好的指標(biāo)。

表1 Ki67、nm23與各臨床因子的關(guān)系（例）

3.1 Ki67、nm23表達(dá)與臨床因素的關(guān)系

根據(jù)國內(nèi)外的研究[2，5]，腫瘤的生存、復(fù)發(fā)、增生、浸潤、轉(zhuǎn)移等與Ki67的表達(dá)有很重要的關(guān)系。根據(jù)Cher的研究得出：Ki67的表達(dá)和前列腺癌同時伴隨骨轉(zhuǎn)移有關(guān),在發(fā)生骨轉(zhuǎn)移的患者中Ki67的表達(dá)較高[6]。nm23的低表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后有關(guān)[7]。筆者的研究亦顯示：鼻咽癌中Ki67和nm23的表達(dá)在有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組和無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中有顯著差異 (P＜0.001)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組中Ki67高表達(dá)而nm23低表達(dá)。由于Ki67高表達(dá)和nm23低表達(dá)者容易發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，因此檢測鼻咽癌患者病理標(biāo)本的Ki67、nm23，可以預(yù)測患者發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的可能性,這對臨床干預(yù)和靶點(diǎn)藥物的研制提供有益的思考的方向。

國內(nèi)外很多學(xué)者認(rèn)為Ki67、nm23的表達(dá)與腫瘤臨床分期相關(guān)，Zheng等[4]的研究結(jié)果指出Ⅲ、Ⅳ期鼻咽癌組織中Ki67的表達(dá)明顯高于Ⅰ、Ⅱ期的癌組織(P＜0.05)。國內(nèi)研究亦得出類似結(jié)果[2]。Hailat等[6]發(fā)現(xiàn)nm23蛋白表達(dá)水平與神經(jīng)母細(xì)胞瘤的分期呈負(fù)相關(guān)。有一些學(xué)者持有自己的觀點(diǎn)，Roland等[7]認(rèn)為,頭頸腫瘤的分期與Ki67的表達(dá)無必然的聯(lián)系。Oretti等[9]認(rèn)為：nm23的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的臨床分期無關(guān),本組資料顯示鼻咽癌組織中Ki67的表達(dá)與臨床分期呈正相關(guān) (r=0.268，P=0.029＜0.05)，nm23的表達(dá)與臨床分析呈負(fù)相關(guān)（r=0.246，P=0.040＜0.05）。這對臨床實(shí)踐具有指導(dǎo)作用，而筆者的病例數(shù)少，有待進(jìn)一步循證。

有研究顯示：Ki67表達(dá)與一些原發(fā)病灶的大小成正比，比如黑色素瘤[10]，Ki67表達(dá)與其原發(fā)灶的大小呈正相關(guān)。鼻咽癌的特點(diǎn)有,發(fā)生部位較隱蔽,腫瘤所在的地方空間很小,周圍腔隙多,很難準(zhǔn)確地計(jì)算原發(fā)病灶的大小。原發(fā)灶的情況在某種程度上可以通過鼻咽癌T分期來反映。本文研究表明：Ki67、nm23 的表達(dá)與 T 分期無明顯相關(guān)（P＞0.05），與國內(nèi)部分學(xué)者的研究結(jié)果類似[11-12]。分析其原因可能有：①在進(jìn)行CT掃描時，鼻咽圖像和NPC病灶范圍沒有完全相吻合,從而導(dǎo)致了原發(fā)病灶不能真實(shí)的反映；②收集的病例數(shù)少；③遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移病例在總病例中占的比例較高；④在進(jìn)行腫瘤惡性程度的評判時會涉及諸多問題，腫瘤的惡性程度無法用單純而簡單的T分期來說明；⑤可能與鼻咽癌92分期中T分期的不合理有關(guān)。目前臨床已廣泛采用經(jīng)大量回顧性研究及MRI圖象掃描為基礎(chǔ)的08分期。

關(guān)于局部淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移，大部分學(xué)者認(rèn)為與Ki67、nm23的表達(dá)有關(guān)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Ki67的表達(dá)率高[13]，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者nm23的表達(dá)率高。本組資料中Ki67、nm23的表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在統(tǒng)計(jì)學(xué)上無明顯意義?？赡艿脑蛴校孩俨杉牟±龜?shù)少；②總病例數(shù)中，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者在總病例中占有很高的比例；③鼻咽癌92分期中N分期的不合理性；④其他未知原因。

3.2 總結(jié)

本研究中Ki67 nm23的表達(dá)與有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)、與臨床分期有關(guān)而與單獨(dú)的T、N分期無關(guān) [Ki67的表達(dá)與臨床分期呈正相關(guān)（r=0.268，P＜0.05），nm23的表達(dá)與臨床分期呈負(fù)相關(guān)（r=-0.246，P=0.040＜0.05）]，是因?yàn)榭偡制诒葐为?dú)的 T、N分期更能反應(yīng)腫瘤的特性。其二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，說明二者聯(lián)用能更好地反應(yīng)腫瘤的增殖浸潤和轉(zhuǎn)移特性。這個論點(diǎn)一旦成立將對臨床實(shí)踐具有指導(dǎo)作用，值得我們進(jìn)一步思考和研究。

總之，本研究表明在轉(zhuǎn)移的鼻咽癌患者中，Ki67蛋白表達(dá)增高非常明顯,而nm23的表達(dá)降低非常明顯，提示其癌組織的生物學(xué)行為較為兇險(xiǎn)，預(yù)后較差，其二者的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，其間的關(guān)系尚未完全明了，值得我們從多技術(shù)、多角度進(jìn)一步研究。

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