高效液相色譜法測定艾司唑侖片中艾司唑侖含量

楊惠霞，何文斌

(1.廣東省佛山市中醫(yī)院藥劑科，廣東 佛山 528000; 2.廣東省佛山市藥品檢驗所，廣東 佛山 528000)

艾司唑侖(estazolam)又稱舒樂安定，臨床主要用于失眠，也可用于焦慮、緊張、恐懼，還可用于抗癲癇和抗驚厥[1]。本品常規(guī)劑量小(1 mg/片或2 mg/片)，在測定過程中受輔料、儀器、溶劑等因素的影響較大，易造成結(jié)果偏差[2]。2005年版《中國藥典(二部)》[3]對艾司唑侖片含量測定采用紫外分光光度法，該法的測定過程需要使用兩種儀器，過程煩瑣，而高效液相色譜法選擇性高，靈敏、準(zhǔn)確。筆者嘗試使用反相高效液相色譜法測定艾司唑侖片的含量，現(xiàn)報道如下。

1 儀器和試藥

Agilent1100 series型液相色譜系統(tǒng)，包括四元泵G1311、柱溫箱G1316A、檢測器G1314A;ER－182A型電子分析天平;KQ－300型超聲清洗器(昆山市超聲儀器有限公司，功率為300 W，工作效率為40 kHz)。艾司唑侖對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號為1219－0102);艾司唑侖片(江蘇濟川制藥有限公司，批號為070201，070320，070605，規(guī)格為 1 mg);甲醇為一級色譜醇，水為超純水，其他試劑均為分析純。

2 方法和結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:Kcromaisil ODS－1－C18柱(200 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇－水(60∶40);流速1.0 mL/min;檢測波長 223 nm;柱溫30℃;進(jìn)樣量20 μL。理論板數(shù)按艾司唑侖計算均大于5000。

2.2 溶液制備

取艾司唑侖對照品適量，精密稱定，加流動相制成每1 mL含艾司唑侖0.2 mg的對照品貯備液;精密吸取5 mL對照品貯備液，置50 mL量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μL微孔濾膜濾過，即得對照品溶液。精密稱取艾司唑侖細(xì)粉(約相當(dāng)于艾司唑侖1 mg)，置50 mL量瓶中，加流動相溶解并稀釋到刻度，搖勻，經(jīng)0.45 μL微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。取不含艾司唑侖的空白制劑樣品，按照供試品溶液制備方法制備，即得陰性對照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗:分別吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果陰性對照品溶液在艾司唑侖出峰位置無干擾，色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察:分別精密吸取對照品溶液 5，10，20，20，50，100 μL，注入液相色譜儀中，按上述色譜條件測定，峰面積分別為824.2，1650.2，3315.6，4984.8，8334.2，16759.7。以峰面積為縱坐標(biāo)、艾司唑侖進(jìn)樣量 (μg)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。計算得回歸方程 Y=8145.5 X－34.453(r=1.0000)，線性范圍為 0.103 ～2.06μg。

精密度試驗:精密吸取對照品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD為0.13%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗:精密吸取同一供試品溶液20 μL，注入高效液相色譜儀，在 0，2，4，6，8，24 h 時測定。結(jié)果峰面積的 RSD 為 0.45%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗:精密稱取同一批樣品細(xì)粉6份，依法制備供試品溶液并測定。結(jié)果艾司唑侖含量為平均標(biāo)示量的95.23%，RSD為1.3%(n=6)，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗:精密稱取同一批樣品細(xì)粉(相當(dāng)于艾司唑侖約1 mg)6份，置100 mL量瓶中，加30 mL流動相溶解，精密加入對照品貯備液5 mL，加流動相稀釋到刻度，搖勻，經(jīng)過0.45 μL微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液分別進(jìn)樣，按外標(biāo)法以峰面積計算艾司唑侖的含量并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 艾司唑侖加樣回收試驗結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測定

取3批樣品，依法制備供試品溶液，按擬訂的色譜條件測定，以峰面積按外標(biāo)法計算百分標(biāo)示量，并與2005年版《中國藥典(二部)》[3]的紫外分光光度法進(jìn)行比較。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(%，n=3)

3 討論

高效液相色譜法的方法學(xué)考察，RSD要求小于2%，平均回收率在98% ～102%[4]。而本法的方法學(xué)考察結(jié)果均符合要求，說明方法可行。

在流動相的選擇時，根據(jù)文獻(xiàn)[5－8]，曾經(jīng)試用過乙腈－水(60∶40)和甲醇－乙腈－水(40∶20∶40)，結(jié)果色譜圖均有輔料峰出現(xiàn);而在甲醇－水(60∶40)流動相中，不僅片劑輔料對主峰無干擾，且主峰出峰時間符合規(guī)定。試驗過程中，還比較了甲醇∶水的比例分別為 70∶30，50∶50，60∶40 的分離效果，結(jié)果甲醇－水(70∶30)出峰時間為4 min左右，但與一小雜質(zhì)峰分不開;甲醇－水(50∶50)出峰時間為15 min左右，出峰時間過長;甲醇－水(60∶40)為7 min左右，且分離完全。因此，選擇甲醇－水(60∶40)作為流動相。

艾司唑侖在0.1 mol/L的鹽酸溶液中最大吸收波長為268 nm，在乙醇及0.1 mol/L的氫氧化鈉溶液中最大吸收波長在223 nm[9]，參考中國藥典對艾司唑侖有關(guān)物質(zhì)的檢查，以223 nm為檢測波長較佳。

本法測出的百分標(biāo)示量比紫外分光光度法低。經(jīng)分析驗證，發(fā)現(xiàn)在268 nm波長下，片劑輔料有紫外吸收，故紫外分光光度法測得含量相對偏高，本法測得結(jié)果正常，這表明高效液相色譜法結(jié)果更準(zhǔn)確。在操作方面，高效液相色譜法簡便、快捷，進(jìn)樣量少，可控程度高，因而高效液相色譜法可作為艾司唑侖片中艾司唑侖的含量測定方法。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典臨床用藥須知(化學(xué)藥和生物制品卷)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005∶11.

[2]熊建華，李金龍，毛未芹.不同過濾方法對艾司唑侖片含量及其均勻度測定的影響[J].海峽藥學(xué)，2005，17(3)∶76.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M]:北京∶化學(xué)工業(yè)出版社，2005∶300.

[4]劉文英.藥物分析[M].第5版.北京∶人民衛(wèi)生出版社，2003∶81.

[5]葉美娣，徐 顏，汪學(xué)梅.HPLC測定地西泮和艾司唑侖的血藥濃度[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2000，17(1)∶60.

[6]唐細(xì)美，宋湘芝，陳學(xué)和.HPLC同時測定血清中4種苯二氮卓類藥物濃度[J].廣東藥學(xué)，2001，11(6)∶39.

[7]張 麗，何 林，孫世明.HPLC法同時測定血清中舒樂安定和安定[J].中國藥學(xué)雜志，2000，13(2)∶97.

[8]江 燕.高效液相色譜法檢查艾司唑侖片及片劑中的有關(guān)物質(zhì)[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2004，24(10)∶651.

[9]劉曉哲.艾司唑侖片含量及含量均勻度測定方法探討[J].齊魯藥事，2007，26(6)∶348.