補腎健脾養(yǎng)血活血法改善血管性認知障礙大鼠行為學障礙的研究

沈雙宏 ，沈曉東，吳同玉，龔德貴，毛敬潔，杜 建

1.福建中醫(yī)藥大學中西醫(yī)結合研究院，福建福州 350108；2.黑龍江省農墾第二醫(yī)院中醫(yī)科，黑龍江佳木斯 154007；3.福建省第二人民醫(yī)院康復科，福建福州 350003

血管性認知障礙（vascular cognitive impairment，VCI）是由腦血管病危險因素明顯的腦血管?。ㄈ缒X梗死、腦出血）或不明顯的腦血管?。ㄈ绨踪|疏松、慢性腦缺血）引起的認知功能障礙[1]。采用血管性認知障礙的概念，極大地提高對由血管病變或血管危險因素引起的各種認知障礙的認識，防治癡呆的發(fā)生。既往研究表明，補腎健脾養(yǎng)血活血法治療血管性癡呆取得了良好效果，本研究探討補腎健脾養(yǎng)血活血法立方的復方中藥對VCI大鼠行為學障礙的影響，揭示其對VCI的作用機制。

1 材料與方法

1.1 動物與藥物

動物選用6個月齡雄性SD大鼠（購自上海斯萊克實驗動物有限公司），體重為250～300 g，共70只。

復方中藥康欣膠囊由福建屏山制藥有限公司（批號：900418；規(guī)格：0.3 g/粒）提供。復方由女貞子、枸杞子、菟絲子、何首烏、黃精、黃芪、淫羊藿、當歸、丹參、丹皮、酸棗仁、菊花、山楂等藥物組成。簡化方由黃芪、淫羊藿、丹參、當歸組成。各組用藥量2.43 g/kg，相當于人常用劑量。西藥喜得鎮(zhèn)由瑞士山德士藥廠與天津華津制藥廠合作生產[（91）衛(wèi)藥準字X-156 號，1 mg/片]，混懸液濃度為 0.027 mg/ml，相當于人常用劑量。硝普鈉，由北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術有限公司生產，批號：0305072。

1.2 血管性認知障礙動物模型的建立

VCI大鼠的造模方法：采用王蕊等[2]造模方法并加以改進：分將大鼠用10%水合氯醛（3 ml/kg）腹腔注射麻醉，仰臥固定在手術臺上，常規(guī)消毒，取頸正中切口，鈍性剝離結締組織和頸前肌群，分離雙側頸總動脈，腹腔注射硝普鈉2.5 ml/kg后，無創(chuàng)微動脈夾夾閉雙側頸總動脈10 min，再通10 min，再夾閉10 min，再通后，永久結扎右側頸總動脈，并剪斷。傷口灑青霉素粉適量，縫合傷口。假手術組手術過程同模型組，但不阻斷雙側頸總動脈，不注射硝普鈉，在手術過程中，保持動物肛溫（37.0±0.5）℃。

1.3 分組與給藥

造模前按隨機數(shù)字表隨機抽取10只為假手術組。其余大鼠進行造模。在造模后存活（術中死亡20只）的40只大鼠隨機分為康欣膠囊復方中藥組（復方組）、康欣膠囊簡化方中藥組（簡方組）、西藥對照組、模型組，每組10只。造模后第2周予以每日胃灌注（4.5 ml/kg各種液體），假手術組和模型組用生理鹽水灌胃，復方組、簡方組和西藥對照組分別予康欣膠囊全方、康欣膠囊簡化方和喜得鎮(zhèn)混懸液，均每日給藥1次，連續(xù)灌藥3周。給藥兩周后開始Morris水迷宮實驗，共6 d，期間繼續(xù)給藥，次日處死動物。

1.4 行為學觀察

Morris水迷宮[3]：水迷宮的水池直徑 100 cm，深 50 cm，水深30 cm，水溫（26±2）℃，水面覆一層泡沫塑料屑，池壁上4個等距離點分水池為4個象限，池壁外標4個入水點，任選一象限在其中央放置平臺。平臺無色透明，直徑6cm，高28 cm，平臺沒于水面下2 cm，水池周圍參照物保持不變。Morris水迷宮主要包括定位航行實驗和空間探索實驗兩個部分。

定位航行實驗：檢測大鼠對平臺位置的學習和記憶的能力。連續(xù)訓練5 d，每日上午、下午兩個時段，兩次間隔8 h以上。在每個時間段訓練4次，分別從4個象限的入水點將大鼠放入水中。如果大鼠在60 s內爬上平臺，并停留3 s以上，則認為大鼠找到平臺，此為潛伏期。如果60 s內大鼠未能找到平臺，則拖拽其尾部，將其引導到平臺，熟悉10 s，此時潛伏期按60 s計算。每次訓練間隔為5 min。計算每一時段4個方向潛伏期的平均數(shù)，然后把每一日上午、下午兩個時段潛伏期的平均數(shù)作為該日的游泳結果。

空間探索實驗：測試大鼠學會尋找平臺后，對平臺空間位置記憶的能力。定位航行實驗后，即在第6天上午，撤去平臺，取任意一個入水點將大鼠放入水中，觀察并記錄60 s內大鼠穿過原平臺區(qū)域的次數(shù)。

1.5 統(tǒng)計學方法

使用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料采用均數(shù)±標準差（）表示，采用單因素方差分析，組間比較采用q檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 造模后血管性認知障礙大鼠一般情況

麻醉藥蘇醒后大鼠活動能力下降，自發(fā)運動減少，少數(shù)大鼠自發(fā)運動增加。48 h內所有存活大鼠都逐漸恢復正常飲食及大便。

2.2 各組大鼠Morris水迷宮試驗比較

與假手術組比較，模型組大鼠逃避潛伏期延長，穿越平臺次數(shù)減少（P＜0.05）；復方組、簡方組、西藥對照組與模型組比較，逃避潛伏期明顯縮短，穿越平臺區(qū)域的次數(shù)明顯增多（P＜0.05）；復方組、簡方組、西藥對照組兩兩比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表 1。

表1 各組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺區(qū)域次數(shù)比較（）

表1 各組大鼠逃避潛伏期及穿越平臺區(qū)域次數(shù)比較（）

注：與模型組比較，▲P＜0.05，△P＜0.05

組 別 例數(shù)1010101010假手術組模型組西藥對照組復方組簡方組逃避潛伏期 （s）13.85±4.71▲31.69±6.3318.42±7.35▲14.57±3.99▲16.93±2.54▲穿越平臺區(qū)域次數(shù)（次）6.70±1.75△3.50±0.956.10±2.46△6.90±1.86△7.20±1.75△

3 討論

臨床和神經(jīng)心理學研究表明，按照癡呆的診斷標準不能發(fā)現(xiàn)許多血管因素導致的認知障礙，尤其是未達到癡呆標準者，也就不能實現(xiàn)早期發(fā)現(xiàn)和早期預防。因此，一些學者提出應該用更寬泛的VCI概念來代替血管性癡呆，目的是將血管性癡呆的診斷從傳統(tǒng)的癡呆標準中擺脫出來。VCI是一種可以預防的癡呆，早期治療具有可逆性[4]。因此，廣泛采用VCI診斷標準，對處于早期或癥狀前期的患者進行治療及Ⅱ級預防和Ⅰ級預防，意義深遠。

中醫(yī)學認為，本病的發(fā)病與腎精不足、五臟虧虛、氣血不足有密切關系。康欣膠囊以補腎健脾、養(yǎng)血活血為立法，方中女貞子、黃精等補腎填精，淫羊藿溫腎壯陽，當歸養(yǎng)血活血，佐以丹皮、山楂等藥。藥理研究表明，方中諸藥多具有清除氧自由基、抗衰老、增強免疫力、抗動脈粥樣硬化、減輕腦缺氧缺血后再灌注損傷等多種作用。既往的研究顯示，康欣膠囊有效增加海馬、下丘腦等部位乙酰膽堿（Ach）、多巴胺（DA）的合成；防止神經(jīng)細胞凋亡，從而保護神經(jīng)細胞，改善血管性癡呆大鼠的學習記憶能力[5-6]。

Morris水迷宮實驗是檢測空間方向、反射時間、視知覺和結構應用等空間學習記憶能力。本實驗選用逃避潛伏期、通過平臺次數(shù)等指標，來反映大鼠學習記憶能力。大鼠空間記憶力越好，其逃避潛伏期越短，通過平臺次數(shù)也越多。本實驗研究結果顯示，假手術組大鼠的各指標均明顯優(yōu)于模型組，說明模型組大鼠出現(xiàn)明顯的學習記憶障礙，造模成功。復方組、簡方組、西藥對照組與模型組比較，逃避潛伏期明顯縮短、穿越平臺區(qū)域的次數(shù)明顯增多，說明各用藥組均能明顯改善大鼠學習記憶能力。

對于血管性認知障礙這個新概念，目前中醫(yī)、西醫(yī)都處于探索研究階段。中醫(yī)藥在改善癥狀，延緩病程進展，減緩長期服用西藥的不良反應，提高療效等方面有一定的優(yōu)勢，因此通過本次動物實驗觀察，以期能為中醫(yī)藥對VCI的深入研究有所裨益。

[1]賈建平.重視血管性認知障礙的早期診斷和干預[J].中華神經(jīng)科雜志,2005,38(1):4-6.

[2]王蕊,楊秦飛,唐一鵬,等.大鼠擬“血管性癡呆”模型的改進[J].中國病理生理雜志,2000,16(10):914-916.

[3]Morris R.Developments of a water-maze procedure for studying spatial learning in the rat[J].Neruosci Methods,1984,11(1):47-60.

[4]Gorelick PR.Status of risk factors for dementia associated with stroke[J].Stroke,1997,28(2):459-463.

[5]蔡晶,杜建,劉錫棐,等.康欣膠囊及其拆方對腎虛血瘀型大鼠神經(jīng)細胞保護作用的研究[J].中醫(yī)雜志,2007,48(5):453-455.

[6]Jing C,Fan Z,Jian D.Effects of glossy privet fruit on neural cell apoptosis in the cortical parietal lobe and hippocampal CA1 region of vascular dementia rats [J].Neural Regeneration Research,2008,3(25):1192-1211.