小檗堿誘導(dǎo)大鼠便秘模型的初步研究

吳 迪 ，范明松 ，李志雄 ，孫兆林 ，劉井如 ，季宇彬 ，陳明蒼 *

1.中國科學(xué)院上海藥物研究所，上海 201203；2.哈爾濱商業(yè)大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150076

便秘是消化系統(tǒng)疾病的常見癥狀，是由于某種原因造成的大便次數(shù)減少和糞便干燥難解。用藥不當(dāng)或者藥物的副作用是造成便秘的原因之一。小檗堿是治療腸道感染和腹瀉的常用藥。有文獻(xiàn)報道，小檗堿通過增加腸道Na+主動吸收和抑制Cl-主動分泌，并增加Cl-的被動吸收，可抑制豚鼠正?；啬c水電解質(zhì)分泌[1]?；颊咴谟眯￠迚A治療結(jié)腸炎的過程中也有排便困難的現(xiàn)象。因此本實(shí)驗設(shè)想用小檗堿造大鼠便秘模型，為更好地研究便秘提供新的模型。而且由于小檗堿的藥理作用廣泛，但有導(dǎo)致便秘的臨床現(xiàn)象，因此，有針對性地考察小檗堿與便秘的關(guān)系，為臨床合理用藥和小檗堿藥理作用的開發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 實(shí)驗動物及飼養(yǎng)條件 SPF級雄性Wistar大鼠，由中科院上海實(shí)驗動物中心供應(yīng)，動物質(zhì)量合格證：SCXK（滬）2007-0005號。 飼養(yǎng)條件：SPF 級實(shí)驗飼養(yǎng)室， 溫度：（23±1）℃，濕度：50%～70%，噪音：＜50 dB，光照：150～200 Lx，12 h 明暗交替（早 6∶00～晚 18∶00），斯萊克普通飼料喂養(yǎng)，自由進(jìn)食與飲水。

1.1.2 鹽酸小檗堿 購自龍泉高科天然藥業(yè)有限公司，純度97%以上（HPLC 檢測），批號：110101。

1.1.3 試劑 墨汁的制備：阿拉伯樹膠100 g，加水800 ml，煮沸至溶液透明，加入活性碳50 g，煮沸3次，加水定容至1000 ml即得，4℃保存。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及給藥 選雄性大鼠32只，隨機(jī)分成空白組和三個劑量的給藥組，每組8只。3個給藥組分別灌胃給予低、中、高劑量（25、50、100mg/kg）鹽酸小檗堿，灌胃量為 10ml/kg，空白組給予等體積的蒸餾水，每日1次，連續(xù)14 d。期間自由飲食，每天記錄各組大鼠體重變化情況。

1.2.2 大鼠排便實(shí)驗 末次給藥后，各組大鼠禁食16 h（飲水不限），三個劑量的給藥組大鼠給予含相應(yīng)受試物的墨汁，空白組大鼠給予墨汁，同時開始計時。每只大鼠單獨(dú)飼養(yǎng)，自由飲水、攝食，觀察記錄每只大鼠首次排黑便所需時間、6 h內(nèi)排便粒數(shù)和重量，觀察結(jié)束后糞便在70℃下干燥至恒重，計算糞便含水量。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

采用統(tǒng)計軟件SPSS 16.0對實(shí)驗數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（）表示，多組間比較采用方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠分組的均衡性及受試物對大鼠體重的影響

各組大鼠初始體重及14 d后的體重比較結(jié)果顯示，各組大鼠的初始體重與空白組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05），大鼠分組的均衡性良好。灌胃給予受試物14 d后各組大鼠體重與空白組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 （均P＞0.05），即各受試劑量沒有影響大鼠體重的正常增加。見表1。

表1 大鼠的初始體重及14 d后的體重

2.2 鹽酸小檗堿對大鼠排便的影響

與空白組相比，鹽酸小檗堿中劑量組大鼠的糞便粒數(shù)和糞便含水量均降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），鹽酸小檗堿中劑量組大鼠的首次排黑便所需時間也有所延長，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。表明鹽酸小檗堿造大鼠便秘模型成功。見表2。

表2 鹽酸小檗堿對大鼠各排便指標(biāo)的影響（）

表2 鹽酸小檗堿對大鼠各排便指標(biāo)的影響（）

注：與空白組比較，*P＜0.05

組別 劑量（mg/kg）動物只數(shù)（只）空白組低劑量組中劑量組高劑量組-25501008888首次排黑便時間（min）311.7±62.8300.7±42.8383.3±29.6*369.4±15.36 h內(nèi)排便數(shù)（粒）9.83±2.510.57±4.55.71±3.6*9.7±3.1糞便含水量（%）59.0±2.459.7±2.855.1±2.0*58.2±2.0

3 討論

小檗堿屬于異喹啉類生物堿，分子式為C20H18NO4+，摩爾質(zhì)量為336.36122 g/mol。小檗堿常以季銨堿形式存在，臨床常用其鹽酸鹽。小檗堿多集中于毛茛科黃連的干燥根莖中，還存在于小檗科、蕓香科、鼠李科、防己科、罌粟科植物中[2]。臨床上，小檗堿主要被應(yīng)用于治療腸道感染，近年來還發(fā)現(xiàn)小檗堿有治療糖尿病、心血管疾病、抗高血脂等藥理作用[3-5]。小檗堿造成便秘的作用可能與以下因素有關(guān)：乙酰膽堿可明顯興奮胃腸道，增加其收縮幅度和張力，也可增加胃腸平滑肌蠕動，并可促進(jìn)胃腸分泌，產(chǎn)生排便癥狀。而小檗堿可直接拮抗膽堿受體而發(fā)揮抗膽堿作用，從而抑制胃腸道[6]；同時小檗堿通過增加腸道Na+主動吸收和抑制Cl-主動分泌，并增加Cl-的被動吸收，可抑制豚鼠正?；啬c水電解質(zhì)分泌[1]，從而導(dǎo)致了便秘。

目前，大鼠便秘模型中藥物型便秘模型主要有次碳酸鉍法、復(fù)方苯乙哌啶法和瀉劑結(jié)腸法[7-10]。莊萍等[11]采用昆明小鼠小檗堿50 ml/kg口服給藥劑量，結(jié)果顯示其對胃腸運(yùn)動有抑制作用。而小鼠排泄物相對于大鼠較少，不便于統(tǒng)計，且不便于觀察。本實(shí)驗中用鹽酸小檗堿成功造成了大鼠便秘模型，但其導(dǎo)致便秘的機(jī)制還需要進(jìn)一步的實(shí)驗來證實(shí)。且在預(yù)實(shí)驗過程中發(fā)現(xiàn)鹽酸小檗堿的劑量過大 （500 mg/kg），可導(dǎo)致大鼠腹瀉。再綜合本實(shí)驗研究結(jié)果，所以選擇鹽酸小檗堿造大鼠便秘模型的最佳劑量為50 mg/kg，在造模過程中沒有對大鼠體重等造成影響，且造模時間較短，待明確其機(jī)制后，有望成為便秘的新模型。

[1]黃曉東,羅和聲,余保平,等.小檗堿對豚鼠回腸電解質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)影響的研究[J].中國病理生理雜志,2003,19(1):14-17.

[2]LI B,ZHU WL,CHEN KX.Advances in the study of berberine and its derivatives[J].Acta Pharmaceutica Sinica,2008,43(8):773-787.

[3]LQ T,Wei W,LM C,et al.Effects of berberine on diabetes induced by alloxan and a high-fat/high-cholesterol diet in rats [J].Journal of Ethnopharmacology,2006,108,109-115.

[4]Arrigo FG C,Sibel E.Berberine:metabolic and cardiovascular effects in preclinical and clinical trials [J].Nutrition and Dietary Supplements,2009,1:1-10.

[5]Brusq JM,Ancellin N,Grondin P,et al.Inhibition of lipid synthesis through activation of AMP kinase:an additional mechanism for the hypolipidemic effects of berberine[J].J Lipid Res,2006,47(6):1281-1288.

[6]譚正懷,張媛,程蕾.小檗堿、巴馬亭及黃連總生物堿對膽堿能神經(jīng)的作用[J].中藥藥理與臨床,2006,22(6):20-22.

[7]李儀奎,王欽茂,周金黃,等.中藥藥理實(shí)驗方法學(xué)[M].上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社,1991:2320-2323.

[8]劉海峰,何俊堂,汪興偉,等.大鼠慢傳輸型便秘模型的建立及其結(jié)腸肌電變化檢測[J].中國人民解放軍醫(yī)學(xué)雜志,2004,15(12):887-891.

[9]張連陽,高峰,童衛(wèi)東,等.大鼠瀉劑結(jié)腸模型的建立[J].華人消化雜志,1998,6(10):864-866.

[10]鄭晨果,金純,金定國.大鼠瀉劑結(jié)腸模型的再探討[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,11:687-688.

[11]莊萍,陳日蘭,梁劍勤.黃連素對消化功能影響的藥效研究[J].中國中醫(yī)藥信息雜志,2003,10(7):28-29.