HPLC測定長喙烏頭中草烏甲素的含量*

龔云麒，張 偉，朱 澤

(昆明制藥集團股份有限公司，云南昆明 650021)

長喙烏頭為毛茛科植物長喙烏頭Aconitum georgei Comber.的干燥塊根，長喙烏頭產(chǎn)自云南西北部 (中甸、麗江)，因根部芽嘴似禽類喙且較長而以“長喙烏頭”為藥材正名［1－2］。研究表明，長喙烏頭中含有草烏甲素，而藥理研究顯示草烏甲素具有顯著的鎮(zhèn)痛作用和抗炎作用，不良反應低，臨床上主要用于治療風濕性關節(jié)炎 (OA)、類風濕性關節(jié)炎 (RA)、肩周炎、腰肌勞損、四肢扭傷、挫傷等癥［3－5］。由于療效確切，草烏甲素原料及其制劑被2005版、2010版《中國藥典》二部收載［6－7］。隨著草烏甲素制劑在臨床上的廣泛應用，作為草烏甲素提取用原料藥材需求也不斷增長，因此尋找新的植物資源，以滿足草烏甲素提取已成為必須。而毛茛科是含有毒植物種類最多的科之一，并且長喙烏頭作為草烏甲素的原料藥材沒有規(guī)范的質(zhì)量控制方法，因此我們建立了長喙烏頭中草烏甲素含量測定方法，該方法簡便、快速，為該藥用植物資源的開發(fā)利用提供科學依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 藥材

長喙烏頭藥材分別采集于麗江永勝、華坪、玉龍、寧蒗等地區(qū)和市售樣品 (批號 20070928、20080114)，共10個批次，經(jīng)昆明植物研究所李錫文教授鑒定為毛茛科植物長喙烏頭Aconitum georgei Comber。

1.2 儀器及試劑

安捷倫1100液相色譜儀，SK06G型超聲波清洗器 (上?？茖С晝x器有限公司)，BP221S型分析天平 (北京賽多利斯儀器公司)。

乙腈、磷酸為色譜純 (美國Fisher公司);其余均為分析純，水為注射用水，草烏甲素對照品購于中國藥品生物制品檢定所，編號100530－200501。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為 Phenomenex C18(4.6×250mm);0.2%三乙胺水溶液 (用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.1±0.1)－乙腈 (65∶35)為流動相;流速1.0mL/min;檢測波長260nm;柱溫25℃;進樣量:10μl，理論塔板數(shù)按草烏甲素峰計算應不低于3000。色譜圖見圖1、圖2。

2.2 對照品溶液的制備

精密稱取草烏甲素對照品適量，加少量0.1mol/L鹽酸溶解后，加水稀釋制成每1mL含40μg的溶液，作為對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取本品粗粉約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50mL，稱定重量，超聲處理 (功率250W，頻率35kHz)30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

2.4 線性關系考察

精密稱取草烏甲素對照品20.8mg，加0.1mol/L鹽酸溶解后，加水稀釋定容至100mL容量瓶中，制成儲備液 (0.208mg/mL)，分別精密量取儲備液 2.5，3.5，4.0，5.0，5.5，6.5，7.5mL 分別置25mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，配制成20.8， 29.12， 33.28， 41.6， 45.76， 54.08，62.4μg/mL的溶液，注入高效液相色譜儀測定峰面積，以草烏甲素的濃度 (μg/mL)為橫坐標，以峰面積的平均值為縱坐標，進行線性回歸計算，得到線性方程:Y=17.244X－8.820，r=0.9998(n=7)。結果表明在20.8μg/mL～62.4μg/mL范圍內(nèi)進樣測定，峰面積和濃度呈良好線性。結果見表1。

表1 長喙含烏頭含量測定線性關系

2.5 穩(wěn)定性試驗

分別精密吸取同一份供試品溶液于制備后0，2，4，8，12，24h測定，RSD=0.20%.表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 重復性試驗

以同一份對照品溶液連續(xù)進樣7次，草烏甲素峰平均保留時間 12.64min，保留時間 RSD=0.36%;平均峰面積 697.66，峰面積 RSD=0.16%.表明儀器重復性好。

2.7 重現(xiàn)性試驗

取同一份長喙烏頭藥材粗粉，同時稱取6份，照供試液制備的方法平行提取處理，測定草烏甲素的含量，RSD=1.43%，表明本法重現(xiàn)性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的長喙烏頭藥材各0.25g，共9份。分別加入適量對照品，按2.3項下的方法制備和測定草烏甲素含量，計算回收率，數(shù)據(jù)結果見表2，結果表明本法回收率良好。

表2 長喙烏頭藥材中草烏甲素測定加樣回收率試驗結果

2.9 樣品測定

取不同長喙烏頭藥材粉末各0.5g，按2.3項下的方法制備和測定草烏甲素含量，結果見表3。

表3 長喙烏頭藥材含量測定結果

3 討論

采用HPLC法測定不同產(chǎn)地及市售長喙烏頭中草烏甲素的含量，結果顯示，HPLC法操作簡便、結果可靠、重現(xiàn)性好、專屬性強，可用于長喙烏頭中有效成分含量測定和質(zhì)量控制，也為該藥用植物資源的利用提供了科學依據(jù)。

［1］中國科學院中國植物志編輯委員會.中國植物志［M］.北京:科學出版社，2004:207.

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［6］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (二部)［M］.北京:化學工業(yè)出版社，2005:373－374.

［7］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典 (二部)［M］.北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:510－511.

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