苦石蓮脂溶性成分的GC-MS分析

郭建軍，周 英

(貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025)

苦石蓮CaesalpiniaminaxHance(L.)又名南蛇勒，為豆科植物南蛇芳的種子，主產(chǎn)于廣西、云南、貴州等地，并被廣西、貴州、四川中藥材標(biāo)準(zhǔn)等收載[1]?？嗍徯詻?，味苦，有清熱化濕、散瘀止痛的功效。文獻(xiàn)報道，苦石蓮的抗肝炎活性成分主要為萜類物質(zhì)[2]，已從中鑒定出倍半萜類物質(zhì)β-姜黃酮，其具有利膽、抗炎的功效[3]。目前對苦石蓮低極性成分的研究主要集中在揮發(fā)性成分的研究，而對其石油醚萃取物的研究未見報道[4，5]。

1 實驗

1.1 材料、試劑與儀器

苦石蓮購于貴州省貴陽市同濟(jì)堂藥房，經(jīng)貴州大學(xué)廖海明老師鑒定為苦石蓮生藥。

95%乙醇、石油醚(60～90℃)，成都科龍試劑公司，所用試劑均為分析純。

HP6890/5975C型GC-MS聯(lián)用儀，美國Agilent公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮公司。

1.2 方法

1.2.1 樣品的制備

取苦石蓮藥材打粉，稱取藥粉1.0 kg，用3 BV的95%乙醇于室溫回流提取3次，每次2 h，抽濾3次提取液并合并，減壓濃縮至稠膏。將稠膏用蒸餾水打散后，用石油醚萃取3次。減壓濃縮，揮干溶劑得到油狀物92.5326 g。取少量油狀物于小瓶中，加入2 mL的乙醚-苯(1∶1)混合溶劑溶解，再加入0.4 mol·L-1氫氧化鈉-甲醇溶液，搖勻，室溫下放置，時加振搖。30 min后加入蒸餾水，待分層后取上清液作為GC-MS供試品溶液I，未經(jīng)甲酯化處理的油狀物(環(huán)己烷溶解)作為GC-MS供試品溶液Ⅱ。

1.2.2 GC-MS分析條件

GC條件：色譜柱為Zebron-ZB-5MSI-5%Phenyl-95%DiMethylpolysiloxane(30 m×0.25 mm×0.25 μm)彈性石英毛細(xì)管柱，柱溫60℃(保留2 min)，以5℃·min-1升溫至300℃，保持2 min；汽化室溫度250℃；載氣為高純He(99.999%)；柱前壓52.5 kPa，載氣流量1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量1 μL(正己烷溶液)；分流比20∶1；溶劑延遲時間5 min。

MS條件：離子源為EI源；離子源溫度230℃；四極桿溫度150℃；電子能量70 eV；發(fā)射電流34.6 μA；倍增器電壓1152 V；接口溫度280℃；質(zhì)量范圍20～450 amu。

2 結(jié)果與討論

2.1 成分分析與定性

按1.2.2氣相色譜條件和質(zhì)譜條件進(jìn)行GC-MS聯(lián)用分析，獲得苦石蓮石油醚萃取物樣I和樣Ⅱ成分的總離子流圖(圖1)，總離子流色譜峰用峰面積歸一化法計算各組分的相對含量。

圖1 苦石蓮石油醚萃取物樣I(A)、萃取物樣Ⅱ(B)的總離子流色譜圖

對總離子流圖中的各峰經(jīng)過質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)過NIST2005標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫及Wiley275質(zhì)譜圖庫數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行檢索，結(jié)合人工譜圖解析，結(jié)果從苦石蓮的石油醚萃取物樣I中分離鑒定出25個化學(xué)組分，占總離子峰相對含量的93.082%。樣Ⅱ中分離鑒定出12個化學(xué)組分，占總離子峰相對含量的87.462%。結(jié)果見表1、表2。

表1 苦石蓮樣I脂溶性成分分析結(jié)果

表2 苦石蓮樣Ⅱ脂溶性成分分析結(jié)果

由表1、表2可知，苦石蓮脂溶性成分共鑒定出25種化合物，主要為脂肪酸類、烯醛類、烴類以及倍半萜類物質(zhì)。倍半萜類物質(zhì)β-姜黃酮的相對含量為1.061%。脂肪酸類物質(zhì)以亞油酸、棕櫚酸、油酸、硬脂酸的相對含量較高，分別為50.493%、13.310%、10.450%、8.274%，在脂肪酸中，不飽和脂肪酸占油脂總量的66.233%，說明不飽和脂肪酸是苦石蓮油脂的主要成分。

2.2 討論

本實驗首次采用95%乙醇回流提取、石油醚萃取的方法，對苦石蓮的脂溶性成分進(jìn)行分析。在對苦石蓮的脂溶性成分進(jìn)行GC-MS分析時，甲酯化處理后的樣品分析檢測效果要優(yōu)于未經(jīng)甲酯化處理的樣品。

3 結(jié)論

對苦石蓮脂溶性成分進(jìn)行GC-MS分析，共鑒定出25種化合物，主要為脂肪酸類、烯醛類、烴類及倍半萜類物質(zhì)，占總流出峰面積的93.082%。倍半萜類物質(zhì)β-姜黃酮的相對含量為1.061%。脂肪酸類物質(zhì)中，不飽和脂肪酸占油脂總量的66.233%，說明不飽和脂肪酸是苦石蓮油脂的主要成分。為進(jìn)一步研究苦石蓮的活性提供了可靠的實驗數(shù)據(jù)及理論依據(jù)。

[1] 廣西壯族自治區(qū)衛(wèi)生廳.廣西中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，1992：62.

[2] 吳兆發(fā).苦石蓮化學(xué)成分研究[J].沈陽藥科大學(xué)學(xué)報，2008，(8)：39-41.

[3] 莫開菊，柳圣，程超.生姜黃酮的抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2006，27(9)：26-30.

[4] 貴州省衛(wèi)生廳.貴州省中藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[M].貴陽：貴州省人民出版社，1990：26.

[5] 四川省衛(wèi)生廳.四川省中藥材標(biāo)準(zhǔn)[M].成都：四川省人民出版社，1987：58.