慈桃軟堅膠囊對耐藥肺癌大鼠的抑瘤作用和安全性觀察

賈學(xué)科，胡立新，劉建國，閆 萍，王志剛

（1.保定恒興醫(yī)院 河北省中西醫(yī)結(jié)合腫瘤治療中心，河北 保定 071051；2河北大學(xué)附屬醫(yī)院，河北 保定 071000）

肺癌在我國是常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率近年來有明顯上升趨勢。2000年我國肺癌的抽樣調(diào)查顯示，男性死亡率為40.1／10萬，女性為13.8／10萬。肺癌在我傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為是積的范疇，《雜病源流犀燭》中說：“邪惡居胸中阻塞氣道，氣不得通，為痰為血，皆邪正相博，邪既勝，正不得制之，隧結(jié)而成塊。”說明了在正氣虛損的情況下邪氣乘虛襲肺，郁結(jié)肺中，肺氣宣降失司，積聚成痰，痰凝淤阻脈絡(luò)，久而成塊。對非小細(xì)胞肺癌的治療目前多采用綜合治療，包括手術(shù)，放療，化療，生物免疫，中醫(yī)中藥等。本課題組在綜合文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上結(jié)合本院的臨床實(shí)踐，用扶助正氣，化痰軟堅，活血化淤等法綜合組方做成“慈桃軟堅膠囊”，旨在提高腫瘤患者的生存質(zhì)量?，F(xiàn)將其應(yīng)用于大鼠腫瘤模型，探討其抑瘤作用和用藥的安全性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

昆明種大鼠，雌雄各半，（200±2）g；由河北大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。SPF級大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，飼養(yǎng)在恒溫（24±1）℃、濕度0.50～0.70的飼養(yǎng)室內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)飼料和自來水自行取食。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥品

多柔比星（大連美侖生物技術(shù)有限公司）；異長春花堿（NVB）（吉林一心制藥股份有限公司）；慈桃軟堅膠囊高劑量（1.2mg／10g）、慈桃軟堅膠囊低劑量（0.6mg／10g），均為自制（冀藥制字Z20051199）。

1.3 腫瘤大鼠模型的制備

采用支氣管灌注MCA水懸液，直接誘導(dǎo)肺癌大鼠。抽取瘤種大鼠腹水2mL并以生理鹽水1mL稀釋至含細(xì)胞數(shù)1×106／mL，再以0.2mL皮下注射于無瘤大鼠腹腔內(nèi)。并腹腔注射（ip）多柔比星0.5mg／kg，1次／d，連續(xù)8周。無菌抽取低劑量多柔比星誘導(dǎo)后的耐藥大鼠S180腹水，無菌生理鹽水稀釋至含細(xì)胞數(shù)1×106／mL，每鼠0.2mL皮下注射于無瘤大鼠腹腔內(nèi)。大鼠接種耐藥S180細(xì)胞后24h，隨機(jī)分為模型組（水）、慈桃軟堅膠囊高劑量組（1.2mg／10g）、慈桃軟堅膠囊低劑量組（0.6mg／10g）和異長春花堿（NVB）組（25mg／m2，），另選同等飼養(yǎng)條件下的正常大鼠作為對照組，每組10只，給予相應(yīng)藥物或溶劑。共給藥1周。給藥方式均為ig。

1.4 觀測指標(biāo)

給藥后，觀察動物的急性毒性實(shí)驗(yàn)及長期毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果，并檢測試驗(yàn)藥物對動物細(xì)胞凋亡率的影響：動物經(jīng)處理后，每個樣本收集約1×106細(xì)胞，PBS清洗2次，75%冰乙醇40℃固定24h，PI染色后，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期和凋亡率 。其中對S180細(xì)胞凋亡率的計算公式為：細(xì)胞凋亡率（%）＝（實(shí)驗(yàn)組－模型組）÷模型組×100%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用%表示，采用卡方檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤模型的建立

一周后，按實(shí)體瘤大小檢測，結(jié)果顯示，模型組實(shí)體瘤為1.71cm，大于對照組的0cm，提示造模成功。

2.2 各組細(xì)胞凋亡率的比較

結(jié)果顯示，與模型組比較，各組細(xì)胞凋亡率均升高，差異非常顯著（P＜0.0001或＜0.01）；與低劑量組比較，高劑量組細(xì)胞凋亡率升高，異長春花堿（NVB）組細(xì)胞凋亡率降低，差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 各組細(xì)胞凋亡率的比較

2.3 急性毒性實(shí)驗(yàn)及長期毒性實(shí)驗(yàn)

所有動物給予慈桃軟堅膠囊（高、低劑量）治療過程中及結(jié)束后均未出現(xiàn)與藥物治療有關(guān)的厭食、消化道不適、掉毛、神智異常、過敏、疼痛等副作用，大鼠生長良好，飲食正常，活動自如，尿便正常，皮毛光滑，無任何不良反應(yīng)，7d后無死亡。處死后，經(jīng)大體解剖檢查，主要臟器無異常。藥物對動物體重飲食無影響，與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；且慈桃軟堅膠囊高、低劑量組比較，無明顯差異（P＞0.05）。異長春花堿（NVB）組有1只大鼠出現(xiàn)心臟毒副反應(yīng)，2只掉毛明顯。統(tǒng)計學(xué)統(tǒng)計結(jié)果顯示，慈桃軟堅膠囊（高、低劑量）與異長春花堿（NVB）組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

腫瘤的多藥耐藥是腫瘤化療失敗的主要原因之一。當(dāng)前國內(nèi)外對耐藥機(jī)制的認(rèn)識和逆轉(zhuǎn)劑的研究主要來自體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的研究成果，但研究對象是體外誘導(dǎo)的耐藥細(xì)胞，并不能很好地反映活體腫瘤的情況［1］。本研究采用支氣管灌注MCA誘導(dǎo)肺癌大鼠，并給予多柔比星建立在體耐藥模型，實(shí)驗(yàn)方便，符合人體耐藥產(chǎn)生機(jī)制，且該法灌注深，藥物不易被排出，滯留時間常，藥物集中，定位準(zhǔn)確。造模一周后，按實(shí)體瘤大小檢測，結(jié)果顯示，模型組實(shí)體瘤為0.71cm，大于對照組的0cm，提示造模成功。

中醫(yī)認(rèn)為正氣不足血淤痰凝致癌毒內(nèi)生是肺癌的核心病機(jī)，扶助正氣中藥能提高機(jī)體免疫力提高生存時間，化痰軟堅中藥能抑制腫瘤生長，活血化淤中藥能直接殺死細(xì)胞，抗腫瘤轉(zhuǎn)移，對化療增敏［2］。本課題組在綜合文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上結(jié)合本院的臨床實(shí)踐，用扶助正氣、化痰軟堅、活血化淤等法綜合組方做成“慈桃軟堅膠囊”，組方如下：海馬、鱉甲、海藻、核桃仁、山慈菇、莪術(shù)、苡米等。其中鱉甲、海藻、山慈菇化痰軟堅散結(jié)，核桃仁海馬苡米補(bǔ)脾腎扶助正氣，莪術(shù)活血化淤并使藥物易達(dá)病所，諸藥合奏扶正軟堅散結(jié)之功。本研究觀察了慈桃軟堅膠囊體內(nèi)給藥對腫瘤細(xì)胞凋亡的促進(jìn)作用，結(jié)果顯示，與模型組比較，各組細(xì)胞凋亡率均升高，差異顯著（P＜0.0001或＜0.01）；與低劑量組比較，高劑量組細(xì)胞凋亡率升高，異長春花堿（NVB）組細(xì)胞凋亡率降低，差異顯著（P＜0.05）。提示慈桃軟堅膠囊能促進(jìn)細(xì)胞凋亡因子的表達(dá)，明顯提高多藥耐藥S180細(xì)胞的凋亡率，且高劑量效果更明顯。急性毒性實(shí)驗(yàn)及長期毒性實(shí)驗(yàn)顯示，所有動物給予慈桃軟堅膠囊（高、低劑量）治療過程中及結(jié)束后均未出現(xiàn)與藥物治療有關(guān)的厭食、消化道不適、掉毛、神智異常、過敏、疼痛等副作用，大鼠生長良好，飲食正常，活動自如，尿便正常，皮毛光滑，無任何不良反應(yīng)，7d后無死亡。處死后，經(jīng)大體解剖檢查，主要臟器無異常所見。藥物對動物體重飲食無影響，與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；且慈桃軟堅膠囊高、低劑量組比較，無明顯差異（P＞0.05）。異長春花堿（NVB）組有1只大鼠出現(xiàn)心臟毒副反應(yīng)，2只掉毛明顯。統(tǒng)計學(xué)統(tǒng)計結(jié)果顯示，慈桃軟堅膠囊（高、低劑量）與異長春花堿（NVB）組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，慈桃軟堅膠囊對耐藥肺癌大鼠的抑瘤作用明顯，安全性好，值得推廣。

［1］盛秀勝，王嵐.五味子乙素對大鼠腫瘤模型多藥耐藥基因表達(dá)的影響［J］.浙江臨床醫(yī)學(xué)，2011，13（1）：4－6.

［2］李力，申明月，馬蕾.康菜特注射液治療老年晚期腫瘤患者安全性觀察［J］.腫瘤防止雜志，2003，10（5）：539－540.