Twist在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床病理意義

沈陽醫(yī)學(xué)院奉天醫(yī)院病理科(110024) 孫 虓 白 陽 王 星 王翠芳

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，造成乳腺癌患者死亡的根本原因并不是原發(fā)癌的生長，而是腫瘤的轉(zhuǎn)移。近期研究顯示，轉(zhuǎn)錄因子Twist在腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移等方面起著重要的作用。我們采用免疫組織化學(xué)法檢測乳腺組織中Twist的表達(dá)情況，探討其在乳腺癌癌變過程中的意義，以期為乳腺癌治療開辟新途徑。

1 資料與方法

1.1 一般資料 沈陽醫(yī)學(xué)院奉天醫(yī)院2007年1月至2010年1月女性乳腺手術(shù)標(biāo)本共120例。年齡31～74歲，平均48.53歲。依據(jù)WHO2003年乳腺腫瘤組織學(xué)分類標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分類，其中浸潤性導(dǎo)管癌60例，導(dǎo)管不典型增生40例(輕度、中度14例，重度及原位癌26例)，普通導(dǎo)管增生20例。所有病例術(shù)前均未做化療、免疫及放射治療。

1.2 主要試劑與方法 鼠抗人Twist單克隆抗體(H-81，SC15393)購自 Santa Cruz公司，SP試劑盒及AEC顯色劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。乳腺癌標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定、石蠟包埋，4μm厚連續(xù)切片。本研究采用SP法進(jìn)行免疫組化染色，Twist單克隆抗體濃度為1∶200，具體步驟按說明書進(jìn)行。用已知組織表達(dá)抗體作陽性對照，PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷 Twist陽性染色主要位于細(xì)胞漿中，少數(shù)細(xì)胞核中亦有表達(dá)。結(jié)果判斷采用Fromowitz[1]的陽性細(xì)胞半定量分級法。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行Χ2檢驗或Fisher確切概率法，P＜0.05為差異有顯著性。

2 結(jié)果

免疫組織化學(xué)SP法結(jié)果顯示，Twist表達(dá)主要定位于乳腺組織的細(xì)胞漿。Twist在乳腺普通導(dǎo)管增生(10.0%)、輕度、中度不典型導(dǎo)管增生(14.29%)、重度不典型增生及導(dǎo)管原位癌(38.46%)、浸潤性導(dǎo)管癌(58.33%)中呈遞增趨勢。乳腺普通導(dǎo)管增生與重度不典型增生及原位癌比較，重度不典型增生及原位癌與浸潤性導(dǎo)管癌比較，Twist陽性表達(dá)的差異均有顯著性，P ＜0.05。見圖1。

60例浸潤性導(dǎo)管癌中Twist陽性表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小無相關(guān)性，與組織學(xué)分級(Χ2=5.487，P=0.019)、臨床分期(Χ2=6.334，P=0.012)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(Χ2=6.459，P=0.011)，見表1。

表1 乳腺癌組織中Twist的表達(dá)及其與臨床病理因素的關(guān)系

3 討論

Rosivatz[2]和 Stasinopoulos[3]的研究結(jié)果表明，Twist能通過抑制細(xì)胞分化、干預(yù)P53腫瘤抑制基因通路、誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)變等在腫瘤的侵襲和進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。Hoek[4]和 Kyo[5]的研究結(jié)果表明，Twist過表達(dá)與黑色素瘤和子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后有關(guān)?？梢奣wist表達(dá)在促進(jìn)細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)化及腫瘤形成中發(fā)揮重要作用。我們用免疫組織化學(xué)法檢測Twist在乳腺組織中的表達(dá)情況，包括浸潤性導(dǎo)管癌60例，導(dǎo)管不典型增生40例(輕度、中度14例，重度及原位癌26例)及普通導(dǎo)管增生20例。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Twist在乳腺普通導(dǎo)管增生(10.00%)、輕中度不典型導(dǎo)管增生(14.29%)、重度不典型增生及導(dǎo)管原位癌(38.46%)、浸潤性導(dǎo)管癌(58.33%)中呈遞增趨勢。乳腺普通導(dǎo)管增生與重度不典型增生及原位癌比較，重度不典型增生及原位癌與浸潤性導(dǎo)管癌比較，Twist蛋白陽性表達(dá)的差異均有顯著性(P均＜0.05)。60例浸潤性導(dǎo)管癌中Twist陽性表達(dá)與患者的年齡、腫瘤大小無相關(guān)性，與組織學(xué)分級(Χ2=5.487，P=0.019)、臨床分期(Χ2=6.334，P=0.012)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(Χ2=6.459，P=0.011)。迄今已在多種人類上皮來源腫瘤中發(fā)現(xiàn)Twist基因表達(dá)增高，并與患者預(yù)后關(guān)系密切。研究證實，Twist對腫瘤細(xì)胞的分裂增殖和侵襲性起著重要的調(diào)節(jié)作用，它可能是引起腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵分子之一。Twist參與了某些上皮來源腫瘤的發(fā)生，并促進(jìn)其侵襲轉(zhuǎn)移[6]，如前列腺癌[7]、乳腺癌[8]和消化道腫瘤等。Twist基因促進(jìn)腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機(jī)制可能是:1)Twist可作用于P53依賴性和非依賴性通路以及NF-κB通路來調(diào)控凋亡，促進(jìn)腫瘤的形成。2)Twist在轉(zhuǎn)錄水平上通過影響E-box啟動子的表達(dá)，誘導(dǎo)形成EMT[9]，從而抑制E-cadherin的轉(zhuǎn)錄，使由E-cadherin所調(diào)控的細(xì)胞黏附作用失效，促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移[10]。3)Twist上調(diào)可增強(qiáng) VEGF的表達(dá)，促進(jìn)血管生成，提高染色體的不穩(wěn)定性，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移[11]。Yang 等[12]用裸鼠的乳腺癌模型顯示，Twist蛋白高表達(dá)的乳腺癌細(xì)胞系容易發(fā)生轉(zhuǎn)移。我們的研究結(jié)果表明，Twist陽性表達(dá)率在乳腺普通導(dǎo)管增生與重度不典型增生及導(dǎo)管原位癌之間有顯著差異，提示Twist可能在乳腺癌的進(jìn)展中發(fā)揮了一定作用。為進(jìn)一步探討Twist表達(dá)與乳腺癌進(jìn)展的關(guān)系，分析了Twist表達(dá)與不同臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中Twist的陽性表達(dá)率為58.33% ，與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移情況、臨床分期、組織學(xué)分級相關(guān)，提示Twist參與了乳腺癌的浸潤轉(zhuǎn)移，與患者的預(yù)后密切相關(guān)。Twist在乳腺癌中的表達(dá)上調(diào)，其準(zhǔn)確性能尚需深入的研究，但是證實Twist作為胚胎發(fā)生中起重要作用的調(diào)節(jié)分子具有癌基因功能，支持了腫瘤是由于正常發(fā)育異常導(dǎo)致的結(jié)果。

綜上所述，Twist在乳腺癌癌變過程中可能發(fā)揮了重要作用，將其作為靶點將為乳腺癌的治療提供新思路。

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