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    參仙生脈口服液 HPLC指紋圖譜研究

    2011-07-12 08:29:28楊娟英林玉紅王月茹陜西步長制藥有限公司西安710075
    陜西中醫(yī) 2011年9期
    關(guān)鍵詞:生脈口服液皂苷

    楊娟英 林玉紅 謝 偉 王月茹 陜西步長制藥有限公司 (西安 710075)

    參仙生脈口服液是由紅參、淫羊藿、枸杞子、補(bǔ)骨脂等藥材組成,具有溫補(bǔ)心腎,活血化瘀之功效。用于陽虛脈遲癥,癥見脈遲、脈結(jié)、心悸、胸悶、胃寒肢冷、腰膝酸軟、氣短乏力等癥,對于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中病竇綜合癥及竇性心動過緩等類型心律失常具有良好的治療效果。由于該制劑涉及的藥材種類較多、化學(xué)成分相對復(fù)雜,各味藥材易受產(chǎn)地、藥用部位、采收時間、提取工藝等因素的影響,為有效的控制及評價該制劑的質(zhì)量帶來了一定的困難。指紋圖譜反映的是樣品整體的特征的質(zhì)量評價方法[1、2],本試驗擬建立該制劑的中藥高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜。實驗中采用全波長檢測法,最終建立了參仙生脈口服液 HPLC指紋圖譜,為科學(xué)、合理的評價及有效的控制該制劑的質(zhì)量提供了可行的參考方法。

    1 儀器與試藥 1.1 儀 器 Waters 2695高效液相色譜儀,Empow er色譜工作站,2996二極管陣列檢測器;HB3120U型數(shù)控超聲波發(fā)生器;Sartorius BT125D電子天平。

    1.2 試 藥 人參皂苷 Rg1對照品,人參皂苷Rb1對照品,淫羊藿苷對照品(中國藥品生物制品檢定所提供);參仙生脈口服液 10批(批號 100302,100303,100304,100601,100602,100603,101201,101202,101203,101204)由山東步長制藥有限公司生產(chǎn)提供;甲醇、乙腈均為色譜純,其他試劑均為分析純。

    2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱:K romosilODSC18(5μm,4.6mm× 250mm);流動相:乙腈 (A)-水(B)梯度洗脫:0~ 20min(A:10%→20%),20~ 40min(A:20%→ 30%),40~ 65min(A:30%→38%);全波長檢測;柱溫:30℃;流速,1.0m L/min。

    2.2 對照品溶液的制備 取人參皂苷 Rg1、人參皂苷 Rb1、淫羊藿苷對照品適量,至于量瓶中,加甲醇制成每 1m L含 0.5mg的溶液,作為混合對照品溶液。

    2.3 供試品溶液的制備 精密量取本品 10m L,用D101型大孔吸附樹脂柱吸附,然后用100m L蒸餾水洗脫,棄去水洗液;用 70%乙醇 50m L洗脫,收集洗脫液,蒸干,殘渣加甲醇適量使溶解,并轉(zhuǎn)移至5m L量瓶中定容,用 0.45μm的微孔濾膜過濾,取續(xù)濾液,即得。

    2.4 測定方法及數(shù)據(jù)處理 精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μL,進(jìn)樣,記錄120min的色譜圖,采用國家藥典會推薦的“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)(2004A版)”,經(jīng)過數(shù)據(jù)導(dǎo)入,點校正和數(shù)據(jù)匹配,將多個批次的樣品色譜圖進(jìn)行比較,得到可全面反映多個色譜圖特征的參仙生脈口服液的對照指紋圖譜,根據(jù)峰匹配結(jié)果,以峰面積為參數(shù),計算出各樣品指紋圖譜與對照指紋圖譜(R)的整體相似度,結(jié)果越接近1即相似度越高。

    2.5 穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性考察 取同批樣品,按照“2.2.3”項方法制備供試品溶液 ,分別在 0、 2、4、 6、 8、 10、 12、 24h時測定 ,觀察各峰的 tR、峰面積比值的變化及圖譜的相似度。結(jié)果表明:各共有峰的 tR、峰面積的比值及色譜相似度基本穩(wěn)定(RSD<2.0,相似度為<0.920),符合指紋圖譜制定的要求;取同一批樣品 6份,按照“2.2.3”項方法制備供試品溶液,測定指紋圖譜;6次測定結(jié)果穩(wěn)定,各共有峰的 tR、峰面積的比值及色譜相似度基本一致(RSD<1.21,相似度 <0.990)。以上實驗結(jié)果表明:本方法的穩(wěn)定性、精密度和重復(fù)性良好。

    2.6 共有指紋峰的標(biāo)定和相似度的計算 取 10批復(fù)方紅景天口服液樣品,分別按照“2.2.3”項方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下,測定其色譜圖,結(jié)果見圖 1、2和附表。

    圖110 批參仙生脈口服液HPLC指紋圖譜

    圖2 參仙生脈口服液HPLC對照指紋圖譜

    附表10批參仙生脈口服液 HPLC指紋圖譜相似度計算結(jié)果

    3 討 論 目前,中藥制劑 HPLC指紋圖譜多以單一波長下指紋圖譜為依據(jù),不能同時反映特征吸收波長不同的多指標(biāo)成分的化學(xué)信息。為了能更深入的反映本檢測樣品指紋信息的整體性、特征性,更全面的控制該制劑的質(zhì)量,本試驗采用全波長檢測法對待測樣品的指紋圖譜進(jìn)行考察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)在254nm處樣品信息較為全面,并且峰形好,分離度高,響應(yīng)值較大。

    相似度是聚類分析中的一個基本概念[3、4],它反映了研究對象之間的親疏程度,聚類分析就是根據(jù)研究對象之間的相似性來進(jìn)行分類的。在聚類分析技術(shù)的發(fā)展過程中,形成了很多種測度相似性的方法。其中距離測度的出發(fā)點是把每個案例看作 m維空間中的一個點,在 m維空間中定義點與點之間的距離,距離越近的點,相似程度越高,聚類時更可能歸為一類。指紋圖譜反映的是樣品整體的特征,進(jìn)行指紋圖譜的比較,可以反應(yīng)樣品之間的親疏程度,但是單純的直觀比較指紋圖譜的峰的多少和峰的大小,只是定性比較,而且又帶有個人的主觀性。相似度可以定量地描述指紋圖譜,本實驗中用相似度分析軟件對參仙生脈口服液 10個批次進(jìn)行比較,根據(jù)其色譜指紋圖譜建立對照指紋圖譜(共有模式),計算樣品與對照指紋圖譜的相似度算結(jié)果均在0.99以上,RSD為0.3%,并且對各色譜圖進(jìn)行色譜峰匹配,結(jié)果初步確立了10個共有峰,其中 3個已標(biāo)定,因此我們將在今后的研究過程中,繼續(xù)確定其他共有峰的歸屬,這將為本產(chǎn)品的質(zhì)量評價的提高提供基礎(chǔ)和依據(jù)。

    [1] 張 聰 ,王智華,金德莊.中國紅參與高麗紅參的指紋譜比較研究 [J].中成藥 ,2001,27(3):160-163.

    [2] 趙陸華,屠 穎,吳孟華,等.腎寶合劑 HPLC指紋圖譜的研究[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,2005,36(2):134-136.

    [3] 陸紅柳,譚喜瑩,張 飛,等.急咳停顆粒指紋圖譜研究 [J].中成藥,2007,29(2):157-160.

    [4] 宋 敏 ,杭太俊,張正行.丹參脂溶性成分指紋圖譜標(biāo)準(zhǔn)的對照品對照法研究 [J].藥物分析雜志,2007,27(1):8-12.

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