無抗生素微生物發(fā)酵飼料對仔豬免疫及抗氧化功能的影響

中國農(nóng)業(yè)大學工學院 王娟娟 王順喜 ＊

中國農(nóng)業(yè)大學農(nóng)業(yè)部飼料工業(yè)中心 陸文清

北京晟亞育達生物科技有限公司 胡起源

研究表明，飼料經(jīng)微生物發(fā)酵后，營養(yǎng)價值可得到明顯改善，pH明顯降低，富含有益微生物和有機酸。本試驗旨在應用固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)微生物發(fā)酵飼料，進行豬的無抗生素飼養(yǎng)，在前期試驗基礎上（陸文清和王翔，2008），進一步檢測發(fā)酵飼料對斷奶仔豬的免疫功能及抗氧化功能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及日糧 試驗動物選用 “杜長大”三元雜交仔豬，試驗采用玉米-豆粕型基礎日糧?；A日糧為對照組；基礎日糧+金霉素為抗生素組；基礎日糧+發(fā)酵飼料為發(fā)酵料組。參考NRC（1998）豬的營養(yǎng)需要，按照等能量等蛋白質(zhì)的原則配制基礎日糧，日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。發(fā)酵飼料為北京晟亞育達生物科技有限公司研制，含有發(fā)酵乳桿菌（Lactobacillus fermentum）、釀酒酵母 （Saccharomyces cerevisae）和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis），預混料由北京德寶群興科貿(mào)有限公司提供。

1.2 試驗設計與飼養(yǎng)管理 選取72頭平均體重為（14.17±0.24）kg 斷奶的健康“杜長大”三元雜交仔豬，按飼養(yǎng)試驗要求隨機分為3個處理，每個處理設3個重復（圈），每圈8頭。按體重相近，公母各半，同一圈中每頭仔豬盡可能來自不同母豬的原則，隨機分成9圈。免疫消毒程序按豬場常規(guī)方法進行。

1.3 測定指標 試驗開始后，在第7天和第21天時，清晨前腔靜脈采血10 mL。其中，2 mL注入EDTA-K2抗凝瓶中混勻，在日本產(chǎn)F-800型全自動血細胞分析儀進行白細胞數(shù)量和分類的測定，淋巴細胞轉(zhuǎn)化率試驗根據(jù) 《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（1991）執(zhí)行。余下的血液靜置、離心（3000 r/min，10 min），分離血清，用于免疫球蛋白及抗氧化酶活性的測定。

表1 試驗日糧組成及營養(yǎng)水平

血清免疫球蛋白（IgA、IgG和IgM）采用用免疫透射比濁法測定，用日本島津CL-7200型全自動生化分析儀測定。

血清中總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）和過氧化氫酶（CAT）的活性以及丙二醛（MDA）的含量，按照試劑盒說明書測定（南京建成生物工程研究所）。

1.4 統(tǒng)計分析 數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析采用SPSS13.0 for Windows（SPSS Inc.，USA）軟件進行方差分析，用Tukey法進行多重比較。P<0.05為差異顯著程度。

2 結(jié)果與分析

2.1 斷奶仔豬血液免疫指標 結(jié)果見表2。

表2 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬免疫功能的影響

由表2可知，試驗開始后的第21天與第7天相比，血液中白細胞數(shù)量和淋巴細胞轉(zhuǎn)化率呈上升趨勢。試驗第7天白細胞數(shù)量組間無顯著差異（P>0.05），但在試驗期末白細胞數(shù)量組間差異顯著（P<0.05），發(fā)酵料組顯著高于對照組。單核細胞、嗜酸性粒細胞在試驗第7天還未分化出來，試驗期末二者在血液中的含量組間無顯著差異，此外，在試驗開始后的第7天和21天，白細胞分類的其他成分在各處理組也無顯著差異（P>0.05）。在試驗第7天，淋巴細胞轉(zhuǎn)化率以發(fā)酵料組最高，顯著高于其他兩組（P<0.01）。試驗期末淋巴細胞轉(zhuǎn)化率以發(fā)酵料組最高，抗生素組次之，對照組最低，顯著低于其他兩組（P<0.001）。

由表2可見，隨著試驗期的增加，仔豬血清I-gA、IgG和IgM水平呈上升趨勢。在試驗期末，發(fā)酵料組仔豬血清IgA濃度顯著高于其他兩組（P<0.01）。在整個試驗期內(nèi)，三組仔豬血清IgG和IgM的含量無顯著差異（P>0.05）。

2.2 斷奶仔豬血液抗氧化指標 結(jié)果見表3。

表3 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬抗氧化指標的影響

從表3可以看出，隨著試驗期的增加，發(fā)酵料組仔豬血液中 T-AOC、SOD、GSH-Px和 CAT水平均呈上升趨勢，MDA的濃度呈下降趨勢。在試驗期第7天，發(fā)酵料組仔豬血液中SOD、GSH-Px和CAT的活性均顯著高于對照組 （P<0.01或P<0.001）。發(fā)酵料組除SOD的活性顯著高于抗生素組外（P<0.01），兩組間其他酶的活性均差異不顯著（P>0.05）。在試驗第7天，仔豬血液的MDA值在各組間差異不顯著（P>0.05）。

在試驗期末，發(fā)酵料組仔豬血液中T-AOC、SOD、GSH-Px和CAT水平均顯著高于對照組（P<0.05或P<0.01或P<0.001），MDA值顯著低于對照組（P<0.05）。發(fā)酵料組除SOD的活性顯著高于抗生素組外（P<0.01），兩組間其他抗氧化指標均差異不顯著（P>0.05）。

3 討論

3.1 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血液免疫指標的影響從試驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著試驗期的增加，發(fā)酵飼料組豬血液中白細胞數(shù)量高于對照組，淋巴細胞轉(zhuǎn)化率也高于抗生素組和對照組。研究表明，日糧添加益生素（含酪酸菌、糞鏈球菌、嗜酸乳桿菌、乳鏈球菌、酵母菌和芽孢桿菌）可以增加血液中白細胞數(shù)量（武晶等，2009）。T淋巴細胞是體內(nèi)主要的免疫活性細胞，在胸腺中發(fā)育成熟以后經(jīng)血液、淋巴循環(huán)運行定居于外周免疫器官，發(fā)揮免疫細胞的功能，以植物凝集素作為促分裂因子來檢測淋巴細胞的轉(zhuǎn)化功能，其轉(zhuǎn)化率的高低常作為衡量機體免疫水平的指標，T淋巴細胞轉(zhuǎn)化率越高，意味著淋巴細胞在外來因子的刺激下增殖反應越強，機體的細胞免疫能力越強。有研究報道，斷奶仔豬飼料中添加益生菌 （酵母菌和乳酸菌），T淋巴細胞的轉(zhuǎn)化率提高（朱元招等，2008；胡發(fā)軍等，2003）。這表明，發(fā)酵飼料中益生菌有刺激免疫的作用，日糧添加發(fā)酵飼料能刺激仔豬的非特異性免疫反應，使得豬在疫病應激情況下生長性能良好。

本試驗期第21天時，發(fā)酵料組仔豬血清IgA的濃度高于抗生素組和對照組。Erickson和Hubbard（2000）研究表明，乳酸桿菌能夠提高試驗動物模型IgA的產(chǎn)量。Perdigon等（1995）研究報道，小鼠口服嗜酸乳酸桿菌或干酪乳酸桿菌能夠顯著提高分泌IgA漿細胞的數(shù)量。由此看來，該發(fā)酵飼料可能因其富含發(fā)酵乳桿菌，從而促進仔豬機體的體液免疫反應，提高機體抵抗能力，抵抗各種病原微生物感染。

3.2 發(fā)酵飼料對斷奶仔豬血液抗氧化指標的影響 大量研究表明，益生菌具有抗氧化活性（張江巍和蕾郁生，2005），本試驗結(jié)果顯示，與抗生素添加組相比，日糧添加發(fā)酵飼料可顯著提高仔豬血液SOD含量。由此可見，添加富含益生菌發(fā)酵飼料的日糧可增強仔豬機體清除自由基的能力，有助于提高仔豬的抗應激能力。

4 結(jié)論

從血液中白細胞數(shù)量、淋巴細胞轉(zhuǎn)化率和I-gA的含量看，采食添加發(fā)酵飼料的日糧后，能刺激仔豬機體的非特異性免疫反應和體液免疫反應，從而提高豬的抗應激和抗病能力，改善豬的生長性能。

從血液抗氧化指標的測定結(jié)果看，采食添加發(fā)酵飼料的仔豬機體抗氧化能力增強，利于緩解仔豬斷奶應激。

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