托拉塞米片溶出度的方法學(xué)研究*

趙洪霞

(天津安捷倫藥業(yè)有限公司，天津 300410)

托拉塞米是新一代高效髓袢利尿劑。多年臨床應(yīng)用證實(shí),托拉塞米適應(yīng)證廣,利尿作用迅速?gòu)?qiáng)大且持久,不良反應(yīng)發(fā)生率低,是臨床上值得推廣的一類高效利尿劑。參照托拉塞米標(biāo)準(zhǔn)(試行)YBH00682004，依照《中國(guó)藥典》溶出度測(cè)定法[1]，為了操作簡(jiǎn)便，進(jìn)行了適當(dāng)改進(jìn)，采用紫外可見分光光度法(UV)測(cè)定本品的溶出度。

1 試驗(yàn)材料

1.1儀器 Waters 2487紫外分光光度計(jì)，ZRS-8G智能溶出試驗(yàn)儀(天津大學(xué)無線電廠)，日本島津LC-10A系列高效液相色譜儀，XS204型電子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。

1.2試藥 托拉塞米對(duì)照品(本公司自制，批號(hào)100206，純度：99.5%)，托拉塞米片(本公司自制，批號(hào)100301、100302、100303)。鹽酸(天津市申泰科密歐化學(xué)試劑有限公司 分析純)，磷酸二氫鉀(天津市醫(yī)藥公司 分析純)，冰乙酸(天津市贏達(dá)稀貴化學(xué)試劑廠 分析純)。

2 試驗(yàn)和結(jié)果

2.1溶出介質(zhì)的選擇 取托拉塞米片6片，照溶出度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅹ C第二法)分別以0.1 mol/L鹽酸溶液 、水、磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)各900 ml為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為50 r/min，分別在5、10、15、20、30 min取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另精密稱取托拉塞米對(duì)照品適量，加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加溶出介質(zhì)制成每1 ml中約含10 μg的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量，繪制不同溶出介質(zhì)的溶出曲線，見圖1。試驗(yàn)結(jié)果表明：溶出介質(zhì)為0.1 mol/L鹽酸溶液、水、磷酸鹽緩沖液(pH=6.8)時(shí),托拉塞米片均可達(dá)到最大溶出，以0.1 mol/L鹽酸溶液為溶出介質(zhì)溶出曲線較平滑，且參照托拉塞米片進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)H20030655、H20030656選擇標(biāo)準(zhǔn)中使用的鹽酸作為溶出介質(zhì)。

圖1 不同溶出介質(zhì)溶出曲線圖

2.2攪拌方式的選擇 取托拉塞米片樣品6片，照溶出度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2005二部附錄Ⅹ C第一法)以0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為100 r/min，分別在5、10、15、20、30 min取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取托拉塞米對(duì)照品適量，加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加溶出介質(zhì)稀釋成每1 ml中約含10 μg的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算每片溶出量，繪制溶出曲線，見圖2。試驗(yàn)結(jié)果表明：采用以上兩種攪拌方式，溶出均達(dá)到最大值，參照托拉塞米片進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)H20030655、H20030656，故采用標(biāo)準(zhǔn)中的攪拌方式即槳法。

圖2 溶出度槳法、籃法溶出曲線圖

2.3藥物在溶出介質(zhì)中的線性試驗(yàn) 取托拉塞米原料20 mg, 精密稱定，置100 ml量瓶中, 加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5 ml置50 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻；精密量取上述溶液2、4、6、8、10 ml分別置于10 ml量瓶中，加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明：在4～20 μg/ml的濃度范圍內(nèi)，托拉塞米的濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系，線性方程為Y=0.032X+0.023(r=0.999 5)。

2.4回收率試驗(yàn) 取托拉塞米原料適量，精密稱定，按處方配比加入適量輔料,用溶出介質(zhì)制成8、10、12 μg/ ml的梯度各3份，搖勻。照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，記錄數(shù)據(jù)，計(jì)算托拉塞米的回收率，結(jié)果托拉塞米在該溶出介質(zhì)中的平均回收率為99.2%,RSD為0.49%。見表1。

表1 托拉塞米片回收率試驗(yàn)的測(cè)定結(jié)果

2.5托拉塞米片溶出液的穩(wěn)定性試驗(yàn) 取溶出度測(cè)定的同一溶液,于不同時(shí)間測(cè)定吸收度,RSD為0.6%。結(jié)果表明，樣品在溶出介質(zhì)中8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6均一性試驗(yàn) 取100301批樣品6片，照溶出度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2005二部附錄Ⅹ C第二法)以0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為50 r/min，分別在5、10、15、20、30 min取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，另取托拉塞米對(duì)照品適量，精密稱定，加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加溶出介質(zhì)稀釋成每1 ml中約含10 μg的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算每片的溶出量，見圖3。從圖3可以看出，本方法測(cè)定的溶出度均一性良好。

圖3 托拉塞米片100301批樣品溶出曲線

2.7樣品溶出曲線的測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)果表明，3批樣品溶出曲線差異較小，符合規(guī)定。見圖4。

圖4 3批樣品溶出曲線

2.8兩種方法測(cè)定溶出度的結(jié)果比較 取本品，照溶出度測(cè)定法 (《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅹ C第二法)，以0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，20 min時(shí)，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液，照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度；另取托拉塞米對(duì)照品適量，精密稱定，加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加溶出介質(zhì)稀釋成每1 ml中約含10 μg的溶液，同法測(cè)定，計(jì)算每片溶出量，限度為標(biāo)示量的80%，應(yīng)符合規(guī)定。依照進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)H20030655.H20030656進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定。結(jié)果表明：采用紫外可見分光光度法和依照進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)H20030655.H20030656高效液相色譜法測(cè)定的本品溶出度結(jié)果無明顯差異。見表2。

表2 紫外法和HPLC法測(cè)定結(jié)果比較

3 討論

3.1測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 依據(jù)托拉塞米標(biāo)準(zhǔn)(試行)YBH00682004，取托拉塞米對(duì)照品適量，加適量冰乙酸使溶解，再加0.1 mol/L鹽酸溶液制成每1 ml中約含10 μg 的溶液，照紫外-可分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版二部附錄Ⅳ A)測(cè)定，該溶液在285、210 nm的波長(zhǎng)處有最大吸收，因托拉塞米在285 nm波長(zhǎng)處波峰較為平緩，故選擇在285 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定。

3.2冰酸的干擾試驗(yàn) 取2 ml冰乙酸，置100 ml量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻；再精密量取5 ml置100 ml量瓶中，用0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻。取此溶液在200～400 nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果表明，冰乙酸在285 nm的波長(zhǎng)處沒有吸收，冰乙酸對(duì)托拉塞米吸光度測(cè)定干擾為陰性。

3.3濾膜的吸附試驗(yàn) 取托拉塞米約20 mg，精密稱定，置100 ml量瓶中，加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻；精密量取5 ml置100 ml量瓶中,加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻；在285 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定其吸光度，照上述方法共稱取6份，進(jìn)行測(cè)定，分別用水膜濾過，同法測(cè)定，結(jié)果顯示：托拉塞米過水膜吸光度與未過膜吸光度的比值為0.995 7，RSD為0.52%。試驗(yàn)結(jié)果表明，水膜對(duì)托拉塞米無明顯吸附，可忽略不計(jì)。

3.4輔料的干擾性試驗(yàn) 按處方配比,取約相當(dāng)于1片重量的輔料壓片，共六片,取上述空白片，照溶出度測(cè)定法(《中國(guó)藥典》2010二部附錄XC第二法)以0.1 mol/L鹽酸溶液900 ml為溶出介質(zhì),轉(zhuǎn)速為50 r/min，依法操作，在20 min時(shí)，取溶液適量，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液；另取托拉塞米對(duì)照品適量，精密稱定，加冰乙酸2 ml,振搖使溶解，再加溶出介質(zhì)稀釋成每1 ml中約含10 μg的溶液，作為對(duì)照品溶液。取上述溶液，照紫外-可見分光光度法(《中國(guó)藥典》2010年版附錄二部Ⅳ A)，在285 nm的波長(zhǎng)處分別測(cè)定吸光度，結(jié)果顯示輔料干擾率為0.85%小于2.0%。以上試驗(yàn)結(jié)果表明：輔料對(duì)溶出結(jié)果測(cè)定影響較小，可忽略不計(jì)。

本試驗(yàn)采用紫外-可見分光光度法測(cè)定托拉塞米片溶出度，并對(duì)所建立的方法進(jìn)行了方法學(xué)的驗(yàn)證，線性范圍為4～20 μg/ml(r=0.999 5)，回收率為99.5%,RSD為0.42%；所得結(jié)果與高效液相色譜法進(jìn)行溶出度測(cè)定的結(jié)果比較沒有明顯差異，是一種快速，簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確的分析方法，可作為托拉塞米片溶出度測(cè)定的檢測(cè)方法。

1 中國(guó)藥典.二部.2010:附錄:85