正交試驗(yàn)法優(yōu)選血府逐瘀滴丸的提取工藝*

朱曉晶 ， 楊欣瑩 ， 李鳳閣

(天津宏仁堂藥業(yè)有限公司，天津 300122)

血府逐瘀滴丸是由《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第5冊(cè)和第16冊(cè)中“血府逐瘀膠囊”改進(jìn)劑型和工藝而制成。處方由桃仁、當(dāng)歸、枳殼、川芎等11味藥組成，具有活血祛瘀，行氣止痛之功效，主治瘀血內(nèi)阻，胸痛或頭痛，內(nèi)熱瞀悶，失眠多夢(mèng)，心悸怔忡，急躁善怒。方中所有藥味擬采用滲漉提取法，以乙醇為提取溶劑。其中當(dāng)歸、川芎兩味藥中主要活性成分阿魏酸(sodium ferulate)對(duì)心肌缺血有很好的保護(hù)作用，具有明顯抗缺血心肌再灌注損傷作用[1]。本試驗(yàn)采用正交設(shè)計(jì)法，以阿魏酸的提取效果和轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)血府逐瘀滴丸的乙醇滲漉提取工藝條件進(jìn)行研究，確定最佳工藝條件。

1 儀器與試藥

島津LC-2010A高效液相色譜儀；色譜柱: Diamonsil-C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；阿魏酸對(duì)照品 (中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110773-9910)；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1滲漉提取工藝的正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選用正交試驗(yàn)法，采用 L9(34)正交設(shè)計(jì)表，分別以干膏中阿魏酸的含量、轉(zhuǎn)移率和干膏得率為指標(biāo)，對(duì)乙醇濃度、乙醇用量、浸泡時(shí)間、流速4個(gè)因素進(jìn)行考查，每個(gè)因素選取3水平。正交試驗(yàn)因素水平表見(jiàn)表 1。其中，阿魏酸的含量測(cè)定參考2005年版《中國(guó)藥典》中當(dāng)歸藥材對(duì)阿魏酸的含量測(cè)定方法進(jìn)行；轉(zhuǎn)移率(%)=浸膏中阿魏酸的含量(mg/g)×浸膏重量(g)/當(dāng)歸川芎中阿魏酸的總量(mg)×100%

2.2正交試驗(yàn)結(jié)果及方差分析 按處方比例，稱(chēng)取桃仁、當(dāng)歸、枳殼、川芎等藥材共9份，每份625 g，分別按照L9(34)正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行試驗(yàn)，滲漉液分別濃縮得浸膏，測(cè)定阿魏酸的含量，并計(jì)算轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見(jiàn)表2。

用 SPSS軟件對(duì)正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，得統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果，方差分析結(jié)果見(jiàn)表3和表4。

表1 滲漉提取工藝因素水平表

表2 正交設(shè)計(jì)方差及直觀分析結(jié)果

表3 阿魏酸含量方差分析結(jié)果

表4 阿魏酸轉(zhuǎn)移率方差分析結(jié)果

2.3結(jié)果分析 分別以阿魏酸含量和轉(zhuǎn)移率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，直觀分析結(jié)果表明，各因素作用主次為A>B>D>C，最佳工藝條件為A2B2C2D2。方差分析結(jié)果表明，因素A乙醇濃度對(duì)兩個(gè)指標(biāo)具有顯著意義，應(yīng)選取A2水平；其他三個(gè)因素即乙醇用量、浸泡時(shí)間、流速均無(wú)顯著性意義。綜合分析上述結(jié)果，確定最佳工藝條件為A2B2C2D2，即藥材加入13倍量65%乙醇，靜置浸泡24 h，以10 ml/min流速滲漉提取。

2.4最佳工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按處方比例稱(chēng)取藥材3份，按優(yōu)選工藝條件進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果表明正交試驗(yàn)優(yōu)選的乙醇滲漉提取工藝條件較好，結(jié)果穩(wěn)定可靠，見(jiàn)表5。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1試驗(yàn)結(jié)果表明，所選擇的4個(gè)因素對(duì)乙醇滲漉提取有不同的影響，由方差分析可知，乙醇濃度對(duì)兩個(gè)指標(biāo)具有顯著意義，而其他3個(gè)因素即乙醇用量、浸泡時(shí)間、流速均無(wú)顯著性意義，因此試驗(yàn)中要嚴(yán)格控制乙醇濃度。

3.2川芎、當(dāng)歸在處方中屬于臣藥，均含有阿魏酸[2]，其性質(zhì)穩(wěn)定，毒性較低。據(jù)報(bào)道阿魏酸具有抑制血小板凝聚及血栓形成、抗腫瘤、免疫功能等作用[3，5]，故選定阿魏酸為含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)。

1 齊守罡，呂吉元，張明升，等.阿魏酸對(duì)正常及缺血/再灌注損傷大鼠離體心臟功能的影響.中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志，2008，6(5)：562-564

2 楊林，羅曉星，王四旺，等。正交設(shè)計(jì)提取當(dāng)歸川芎中阿魏酸的研究.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，30(2):14

3 周?chē)?guó)蘭.阿魏酸鈉治療不穩(wěn)定型心絞痛50例療效觀察.內(nèi)科，2010，5(3)：241

4 楊艷霞，趙浩如.阿魏酸磷脂復(fù)合物的理化性質(zhì)及抗腫瘤活性研究.藥學(xué)與臨床研究，2009，17(4)：297

5 高向東，吳梧桐.當(dāng)歸及其成分阿魏酸對(duì)小鼠免疫功能的影響.中國(guó)生化藥物雜志，1994，15(2)：107