膽紅素對臨床檢驗結(jié)果的干擾及消除研究

袁云仙

（廣東省茂名石化醫(yī)院，廣東 茂名 525000）

隨著醫(yī)學(xué)事業(yè)的不斷發(fā)展和進(jìn)步，國內(nèi)外學(xué)者專家已針對膽紅素（bilirubin，BR）的干擾機(jī)制及干擾的消除作了大量的研究[1]。一般認(rèn)為，由于血清對于光的吸收或者散射能夠使反應(yīng)的本底進(jìn)行提升，因此在設(shè)置動力學(xué)檢測試驗時一般不考慮設(shè)空白，但是對于終點檢測法卻設(shè)標(biāo)本空白。膽紅素作為內(nèi)源性干擾物，一方面要對自身的本底吸光度進(jìn)行干擾，另一方面又可以參與整個反應(yīng)或是存在著自身所發(fā)生的副反應(yīng)。本研究是以膽紅素為主要研究對象，對膽紅素本底吸光度的干擾情況進(jìn)行探討，并提出在實際過程中要積極地進(jìn)行干擾的消除。

1 資料與方法

1.1 資料

對茂名石化醫(yī)院門診近1個月來的無藥物治療史者的非抗凝血標(biāo)本進(jìn)行隨機(jī)地采集，為30份（沒有選擇性，僅僅是通過隨機(jī)選擇的方式進(jìn)行血樣標(biāo)本的采集，而且選擇樣本之后，運用分離的方法對血清進(jìn)行分離，沒有檢測出溶血、脂肪血，因為這兩類物質(zhì)也是對臨床生化檢驗結(jié)果有干擾性的。這就確保了單一變量變化的研究）。膽紅素標(biāo)準(zhǔn)液以及分析檢測試劑盒均為進(jìn)口，為AR。PCR儀、紫外-可見光分光光度計。

1.2 方法

首先對上述30份血液樣本進(jìn)行震蕩處理并獲取人工溶血模型；然后在PCR分析儀上對干擾物的動力學(xué)進(jìn)行檢測分析；運用紫外-可見光分光光度法進(jìn)行光譜掃描；運用EP7-P方案對膽紅素進(jìn)行干擾評價；最后進(jìn)行數(shù)據(jù)的處理。

2 結(jié) 果

2.1 吸光特性

通過上述方法的闡述，可以發(fā)現(xiàn)膽紅素在血清溶血中呈現(xiàn)出特異的吸收光譜，其主吸峰為470nm。在溫度為36.5℃的條件下，膽紅素的吸收光譜在10min前后的差值曲線變化為：在主吸收峰470nm的吸光度處有一定的下降，下降的幅度約為3.5%，現(xiàn)將其置于360nm的波長條件下，其吸光度又呈現(xiàn)出上升的趨勢。這就說明了膽紅素在不同的波長區(qū)域下，其吸光度值的大小是不同的，而且其差值曲線也是隨著波長的變化而變化著的。表1為我們所得的血清中血紅蛋白對常用的組合波長動力學(xué)分析吸光度的影響結(jié)果。

2.2 干擾分析

膽紅素對動力學(xué)檢測項目的干擾如表2所示。

綜合表1和表2可以看出，盡管使用了雙波長進(jìn)行檢測，膽紅素的吸光度值本底還是其時相漂移都不為零，所以雙波長分析不能消除膽紅素對臨床分光光度法所產(chǎn)生的干擾[2]。由于動力學(xué)檢測采用吸光度變化率，本底吸光度被自動扣除，故膽紅素和血紅蛋白對動力學(xué)檢測的干擾主要是它們在溶液中的不穩(wěn)定性所發(fā)生變化（表1），而對終點法的干擾主要來自其光吸收所產(chǎn)生的本底（表2）。

表1 血清中血紅蛋白對常用組合波長動力學(xué)分析吸光度的影響

表2 膽紅素對動力學(xué)檢測項目的干擾

3 討 論

3.1 膽紅素吸收譜線漂移的機(jī)制分析

膽紅素吸收曲線的漂移表現(xiàn)在主吸收峰值的降低和470nm附近吸光度的增加。有研究表明，膽紅素吸收曲線的漂移是由于氧化、變構(gòu)（溫度及pH）、變性（多聚體的形成和四聚體的降解）等一系列效應(yīng)所致。由溫度所致的變構(gòu)效應(yīng)是可逆的，然而氧化和變性是不可逆的[3]。在溫度為36.5℃的條件下，膽紅素的吸收光譜在10min前后的差值曲線變化為：在主吸收峰470nm的吸光度處有一定的下降，下降的幅度約為3.5%，現(xiàn)將其置于360nm的波長條件下，其吸光度又呈現(xiàn)出上升的趨勢。這就說明了膽紅素在不同的波長區(qū)域下，其吸光度值的大小是不同的，而且其差值曲線也是隨著波長的變化而變化著的。

3.2 干擾的消除

關(guān)于膽紅素干擾的消除，主要是通過如下幾個方面進(jìn)行干擾的消除的：①膽紅素一個重要的特性就是可以參與或者干擾某些檢測體系的主反應(yīng)，其作用的機(jī)制也很明確，因此可以將其待定項目的干擾方向報告給臨床。這些干擾的項目主要包括：AST、TG、UA、LD以及GLU等。②對血凝分析時干擾的消除：在血凝分析時，當(dāng)遇到高濃度的膽紅素樣品時，其本底濁度必然會存在。這個過程中就犧牲了有效信號的動態(tài)范圍為代價的，不僅降低了檢驗結(jié)果精密度，而且本底濁度過高掩蓋了標(biāo)本吸光度的變化時無法測出結(jié)果。這時，可以雙磁路磁珠法進(jìn)行干擾的消除，從而保證了臨床檢驗結(jié)果不受膽紅素的干擾，所測值準(zhǔn)確性大大提高。

[1]程正江.血紅蛋白和膽紅素干擾臨床化學(xué)分析的機(jī)理初探[J].國外醫(yī)學(xué),2004,25(6):111-112.

[2]郭洪晨.膽紅素對臨床檢驗結(jié)果的干擾及消除[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(18):98-100.

[3]甄廣懷.不同副波長消除膽紅素對血清無機(jī)磷測定的干擾[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2006,3(5):321-333.