RP-HPLC法測定虛寒胃痛膠囊中芍藥苷的含量

梁 侃 侯 峰

（1 鐵嶺衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，遼寧 鐵嶺 112008；2 遼寧省食品藥品檢驗(yàn)所，遼寧 沈陽 110023）

“虛寒胃痛膠囊”是遼寧本溪三藥有限公司生產(chǎn)的獨(dú)家品種，原收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第十六冊，由白芍、黨參等八味中藥材精制而成，具有溫胃止痛，健脾益氣。用于脾虛胃弱，胃脘隱痛，喜溫喜按，遇冷或空腹加重，十二指腸球部潰瘍，慢性萎縮性胃炎等癥。原標(biāo)準(zhǔn)中質(zhì)量控制項(xiàng)目單一，無含量測定項(xiàng)。本實(shí)驗(yàn)建立了對(duì)處方中白芍的芍藥苷含量測定方法，更為科學(xué)合理有效地控制了藥品質(zhì)量，提高了藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

1 儀器與試劑

1.1 試驗(yàn)儀器

島津2010CHT高效液相色譜儀，島津2010紫外檢測器。

1.2 試驗(yàn)試劑

甲醇為色譜純，水為二次重蒸餾水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的制備

取芍藥苷對(duì)照品12.55mg，精密稱定，加甲醇制成每1mL含50.20μg的溶液，即得。

2.2 供試品溶液制備方法考察

2.2.1 提取溶劑選擇

A：參考《中國藥典》2005年版一部所收載的“虛寒胃痛顆?！焙繙y定方法[1]，制定：取10粒本品內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約0.6g，精密稱定，置100mL量瓶中，加水80mL，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。B：參考《中國藥典》2005年版一部所收載的“白芍”含量測定方法，制定：取10粒本品內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約0.6g，精密稱定，置100mL量瓶中，加50%乙醇80mL，超聲處理（功率250W，頻率33kHz）30min，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。結(jié)果見表1。

表1 提取溶劑考察結(jié)果

測定結(jié)果表明，試驗(yàn)方法A與B提取效果相近，而且試驗(yàn)方法A較試驗(yàn)方法B所用的試劑更加便宜、環(huán)保，因此確定選用試驗(yàn)方法A為虛寒胃痛膠囊含量測定供試品溶液制備方法。

2.2.2 提取時(shí)間考察

本試驗(yàn)選用超聲處理法制備供試品溶液，對(duì)不同提取時(shí)間和超聲處理?xiàng)l件進(jìn)行了考察，考察結(jié)果見表2。

表2 超聲處理時(shí)間考察結(jié)果

測定結(jié)果提示，超聲提取30min，樣品中芍藥苷已基本提取完全，故確立超聲處理時(shí)間為30min。

2.3 測定波長的選擇

圖1 芍藥苷對(duì)照品HPLC圖譜

圖2 芍藥苷陰性HPLC圖譜

圖3 芍藥苷供試品HPLC圖譜

表7 芍藥苷回收率試驗(yàn)測定結(jié)果

經(jīng)參考有關(guān)文獻(xiàn)，并經(jīng)繪制紫外圖譜，確定測定波長為230nm。紫外圖譜測定條件為：溶劑為甲醇，掃描速度為中速，掃描區(qū)間400～200nm。

2.4 方法系統(tǒng)適用性試驗(yàn)考察

色譜柱：資生堂C18（150×4.6mm，5μm）；檢測波長為230nm；流速為1.0mL/min；流動(dòng)相為甲醇-0.02mol/L磷酸二氫鉀溶液（28∶72）；理論板數(shù)按芍藥苷峰計(jì)算不低于5000；按上述色譜條件，分別取供試品溶液、對(duì)照品溶液及陰性液各進(jìn)樣10μL，記錄色譜圖（見圖1、圖2、圖3）。結(jié)果表明在芍藥苷對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品溶液具有相同保留時(shí)間的色譜峰，陰性對(duì)照溶液在此峰位無吸收，對(duì)本品中芍藥苷含量測定無干擾，芍藥苷峰與其它組分峰分離完全。

2.5 線性范圍考察

精密稱芍藥苷對(duì)照品0.00868g，置50mL量瓶中，加入甲醇使溶解，并稀釋至刻度。作為對(duì)照品溶液A，濃度為C1=0.1703mg/mL，分別進(jìn)樣5μL、10μL、15μL；精密量取15mL，加甲醇定容至50mL，搖勻。作為對(duì)照品溶液B，濃度為C2=0.05109mg/mL，分別進(jìn)樣1μL、5μL、10μL；分別注入液相色譜儀中，測定峰面積，進(jìn)樣量與峰面積關(guān)系見表3。

表3 芍藥苷線性范圍考察結(jié)果

以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，色譜峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，經(jīng)線性回歸，回歸方程為：Y=1404714.6X-4827.7，r=0.9999。由測定結(jié)果表明，芍藥苷對(duì)照品進(jìn)樣量在0.05109～2.5545μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.6 精密度試驗(yàn)考察

取本品（批號(hào)20080501），精密稱取0.6g，按[含量測定]項(xiàng)下方法制備供試液。精密吸取10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定色譜峰面積，測定結(jié)果見表4。

表4 精密度試驗(yàn)考察結(jié)果

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察

取本品（批號(hào)20080501），精密稱取0.6g，按[含量測定]項(xiàng)下制備供試液，精密吸取10μL，按0、2、4、6、8h時(shí)間間隔，分別進(jìn)樣分析，測定色譜峰面積，測定結(jié)果見表5。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn)考察結(jié)果

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取本品（批號(hào)20080501），精密稱取0.6g，共稱取6份，分別按[含量測定]項(xiàng)下方法制備供試液。精密吸取10μL，測定色譜峰面積，計(jì)算含量。測定結(jié)果見表6。

表6 重復(fù)性試驗(yàn)測定結(jié)果

2.9 回收率試驗(yàn)

取已知含量的本品（批號(hào)200800501，芍藥苷含量9.354mg/g），精密稱取0.3g，共稱取6份，分別精密加入芍藥苷對(duì)照品溶液（C=0.2960mg/mL）10mL，再加水80mL置100mL容量瓶中，再按[含量測定]項(xiàng)下方法制備供試液。精密吸取10μL，注入液相色譜儀，測定色譜峰面積，計(jì)算回收率，即得。測定結(jié)果見表7。

測定結(jié)果提示：本方法回收率在95.26%～97.75%，RSD為0.88%，符合有關(guān)規(guī)定。

2.10 樣品含量測定數(shù)據(jù)

經(jīng)采用本文2.2項(xiàng)下方法，測定3批樣品中芍藥苷含量，測定結(jié)果見表8。

表8 3批樣品芍藥苷含量測定結(jié)果

根據(jù)上述測定結(jié)果，參考《中國藥典》2005年版一部所收載的“虛寒胃痛顆?！焙肯薅燃胺昧空鬯悖酒泛肯薅榷椋罕酒访苛：咨忠陨炙庈眨–23H28O11）計(jì)，不得少于1.3mg。

3 討 論

與傳統(tǒng)的紫外比色法及薄層色譜掃描法相比較，本方法操作簡便，定量準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可以更有效的控制虛寒胃痛膠囊中君藥白芍的含量。

[1]中國藥典(一部)[M].2005版.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005.