異丙酚預(yù)處理對大鼠創(chuàng)傷腦組織的保護作用

榮 健 葉 升 吳靜波

（1 廣東省中山大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510080；2 廣東省藥學(xué)院附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州 510080）

異丙酚（Propofol）是一種新型靜脈麻醉劑，本實驗利用大鼠局灶性創(chuàng)傷性腦損傷模型，觀察了用異丙酚預(yù)處理腦組織中神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron specific enolase，NSE）含量的影響，并結(jié)合神經(jīng)行為學(xué)評分，評價異丙酚的腦保護作用。

1 對象與方法

1.1 方法

中山大學(xué)實驗動物中心提供25只清潔級SD大鼠。25只健康SD大鼠，雌雄不拘，隨機分為A組（假手術(shù)組，n=5）、B組（單純腦創(chuàng)傷組，n=10）和C組（創(chuàng)傷前2h異丙酚預(yù)處理組，n=10）。以Allen's自由落體大鼠TBI模型為基礎(chǔ)，加以改進。將麻醉好的動物頭顱用頭架固定，于前后囟之間、中線左旁2.5mm處鉆開顱骨，用止血鉗咬開至直徑5mm的圓形骨窗，保持硬腦膜結(jié)構(gòu)完整，將10g重銅錘以5cm高度沿管道垂直落下，撞擊骨窗處硬腦膜，從而制備大鼠局灶性腦損傷模型。按照事先分組給予干預(yù)后繼續(xù)觀察飼養(yǎng)。假手術(shù)組同樣麻醉手術(shù)但不行打擊，C組動物在打擊前采取腹腔注射異丙酚100mg/kg。

1.2 神經(jīng)行為學(xué)評分

3組動物打擊傷后24h，評估并記錄神經(jīng)行為學(xué)評分。①斜坡實驗：將大鼠按頭向下的方向置于45°傾斜的木板上，記錄大鼠本能的轉(zhuǎn)體為頭向上所需的時間，記錄時間單位為秒。②懸掛時間：使大鼠前爪抓住一個懸空（高度為50cm）的水平銅棒（直徑為0.5cm），記錄由放置至掉下的時間。

1.3 神經(jīng)特異性烯醇化酶（NSE）含量的測定

動物在創(chuàng)傷后24h，斷頭取腦，研磨成組織勻漿，以2000r/min，離心5min，取上清液，-20℃冷藏待測。采用上海卓康生物科技有限公司生產(chǎn)的大鼠神經(jīng)特異性烯醇化酶（Rat NSE）elisa試劑盒測定NSE含量。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 神經(jīng)行為學(xué)評分

與單純腦創(chuàng)傷組（B組）相比，異丙酚預(yù)處理組（C組）斜坡實驗時間明顯縮短，具有統(tǒng)計學(xué)差異，P＜0.05。

表1 腦創(chuàng)傷后動物神經(jīng)行為學(xué)評分比較（±s）

表1 腦創(chuàng)傷后動物神經(jīng)行為學(xué)評分比較（±s）

注：與A組相比，aP＜0.05，bP＜0.01；與B組相比，cP＜0.05

組別 例數(shù) 斜坡實驗（秒） 懸掛時間（秒）A組 5 8.24±2.16 52.00±6.93 B組 10 17.21±3.34a 13.13±4.25b C組 10 8.62±4.18c 31.54±6.25ac

2.2 神經(jīng)特異性烯醇化酶（NSE）含量

異丙酚預(yù)處理組腦組織中NSE含量明顯低于單純腦創(chuàng)傷組，具有統(tǒng)計學(xué)差異，P＜0.05。

表2 腦創(chuàng)傷后動物NSE含量比較（±s）

表2 腦創(chuàng)傷后動物NSE含量比較（±s）

注：與A組相比，aP＜0.05，bP＜0.01；與B組相比，cP＜0.05

組別 例數(shù) NSE含量（μg/L）A組 5 4.74±1.30 B組 10 18.75±9.53b C組 10 10.82±5.71ac

3 討 論

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，神經(jīng)元特異性烯醇化酶存在于神經(jīng)元細胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細胞的胞漿內(nèi)，且含量較高，主要功能為參與糖酵解，催化磷酸烯醇化丙酮酸的生成。正常情況下體液中NSE含量很低。在急性腦血管病、癲癇、急性腦外傷、Greutzfeldt-jakob病、新生兒缺氧缺血性腦病等疾病中，神經(jīng)細胞受損情況下，部分神經(jīng)元壞死、崩解，NSE可釋放入細胞間隙和腦脊液中；同時血腦屏障的破壞和通透性改變，腦組織中的某些蛋白成分易通過血腦屏障釋放入血液和腦脊液中，使得血清和腦脊液中NSE含量升高，并且與病情的嚴(yán)重程度相關(guān)。NSE作為神經(jīng)元損傷的敏感標(biāo)志物，血清與腦脊液的NSE水平已經(jīng)被用來反映腦損傷的重要生化指標(biāo)。檢測血中NSE濃度可替代腦脊液，標(biāo)本來源方便，血中NSE含量增高，即提示神經(jīng)細胞受損，可作為評估患者受損神經(jīng)功能恢復(fù)程度的一個重要指標(biāo)[1,2]。在臨床實驗也顯示，血清NSE的含量和腦損傷的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，損傷越嚴(yán)重，血清NSE的含量越高，將血清NSE含量作為判斷患者腦組織損傷程度和預(yù)后好壞的標(biāo)志物其敏感度和特異度都很高[3,4]。本實驗中，實驗組NSE含量均較假手術(shù)組高，提示腦組織損傷后神經(jīng)膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元受到損害，因此采取適當(dāng)?shù)哪X保護措施可以降低腦脊液和血清中NSE的含量。

化學(xué)藥物預(yù)處理可以誘導(dǎo)腦創(chuàng)傷耐受[5]，近年來，靜脈麻醉維持和誘導(dǎo)藥物異丙酚（Propofol，Pro）的腦保護效應(yīng)尤為引人注目，大量動物實驗和人體實驗都發(fā)現(xiàn)異丙酚具有腦保護效應(yīng)，它有良好的對抗應(yīng)激性血糖升高作用，同時能保證腦氧供需平衡，有利于腦保護，對于顱腦外傷患者可減少氧自由基的產(chǎn)生，還能有效的減少腦的損傷。劉秀珍等[6]研究發(fā)現(xiàn)異丙酚能減少腦創(chuàng)傷家兔血及腦脊液NSE含量，動物神經(jīng)學(xué)癥狀顯著改善，病死率明顯下降，提示了異丙酚通過阻滯或減輕繼發(fā)性腦損害，改善腦創(chuàng)傷后的神經(jīng)功能而產(chǎn)生腦保護作用。其腦保護機理可能是：①Ca通道阻滯藥作用。②自由基清除劑作用。③減少水腫形成，降低腦代謝率CMR。④抑制腦創(chuàng)傷期甘氨酸的釋放。⑤激活r-氨基丁酸A（GABAA）受體。本研究發(fā)現(xiàn)異丙酚預(yù)處理后，大鼠腦組織中NSE含量明顯低于單純腦創(chuàng)傷組，再灌注后24h神經(jīng)行為學(xué)評分也顯著低于單純腦創(chuàng)傷組，證實了異丙酚預(yù)處理的腦保護效應(yīng)。本實驗利用SD大鼠局灶性創(chuàng)傷性腦損傷模型，對于腦創(chuàng)傷大鼠經(jīng)100mg/kg異丙酚預(yù)處理后，其各項神經(jīng)行為學(xué)評分明顯好于未處理的動物，其中有兩項評分與假手術(shù)組相近，也證實了在腦創(chuàng)傷前給予異丙酚預(yù)處理有腦保護作用，可以改善大鼠腦創(chuàng)傷再灌注損傷后的神經(jīng)行為學(xué)評分。

綜上所述，異丙酚預(yù)處理可改善大鼠創(chuàng)傷后的行為變化，同時抑制神經(jīng)元特異性烯醇化酶，具有創(chuàng)傷腦保護作用。

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