α-硫辛酸、前列腺素E對(duì)糖尿病膀胱病變大鼠線粒體氧自由基損傷的保護(hù)作用

陳愛(ài)武

沈陽(yáng)市于洪區(qū)人民醫(yī)院泌尿外科，遼寧沈陽(yáng) 110141

神經(jīng)源性膀胱（diabetic neurogenic bladder，DNB）是常見(jiàn)的糖尿病外神經(jīng)病變，其發(fā)病率高達(dá)25%，是糖尿病神經(jīng)病變?cè)诿谀蛳到y(tǒng)的主要表現(xiàn)，患者常出現(xiàn)尿潴留、尿失禁、排尿不盡、泌尿系感染、腎積水、膀胱造瘺。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者采用抗氧化劑治療DNB，但關(guān)于聯(lián)合抗氧化作用的協(xié)同作用尚未見(jiàn)報(bào)道，本文通過(guò)鏈脲佐菌素（STZ）誘導(dǎo)DC大鼠模型，觀察α-硫辛酸、前列腺素E對(duì)膀胱肌線粒體氧自由基損傷的保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 中國(guó)醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供清潔級(jí)SD大鼠共60只，雄性，210～240 g。隨機(jī)取50只（空白對(duì)照組給予生理鹽水）大鼠腹腔注射鏈脲佐菌素（STZ），劑量為65 mg/kg。注射后2周監(jiān)測(cè)血糖，均確認(rèn)為糖尿病。

1.1.2 分組 空白對(duì)照：注射生理鹽水；陽(yáng)性對(duì)照組：鏈脲佐菌素；鏈脲佐菌素+α-硫辛酸組；鏈脲佐菌素+維生素E（15 mg/kg）；鏈脲佐菌素+維生素 E（60 mg/kg）；糖尿病+α-硫辛酸組+維生素 E，試驗(yàn)第8周取大鼠提取線粒體測(cè)量相應(yīng)指標(biāo)。各組大鼠均為10只。α-硫辛酸（德國(guó)史達(dá)德公司）50mg/kg，2次/d腹腔注射。

1.1.3 線粒體提取 將禁食大鼠斷頭，取出肝臟剪成碎塊，反復(fù)沖洗后將肝組織碎塊制成勻漿，650 g離心5 min，留上清平衡后10 000 g離心25 min取中層制成混懸液測(cè)量指標(biāo)。

1.2 指標(biāo)測(cè)定

1.2.1 大鼠肝臟線粒體丙二醛（MDA）含量測(cè)定 以考馬司亮藍(lán)法定蛋白，設(shè)定緩沖體系為以0.1 mol/L HIS溶液溶于氯化鉀0.25 mol/L中 （pH=7.5），加入各組糖尿病大鼠線粒體，水浴45 min后加入25%TCA 1.0 ml終止反應(yīng)，冷卻后加NBA和乙醇混合液4.0 ml，用力振搖45 s，離心取上面正丁醇層，525 nm波長(zhǎng)比色，用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA。

1.2.2 大鼠肝臟線粒體琥珀酸脫氫酶的測(cè)定 硫酸甲酯吩嗪（PMS）反應(yīng)法測(cè)量線粒體琥珀酸脫氫酶活性，SDH活性計(jì)算：（標(biāo)準(zhǔn)-測(cè)定）/標(biāo)準(zhǔn)=μmol/（min·mg）。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間比較采用 t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

用藥后線粒體MDA和琥珀酸脫氫酶活性的變化見(jiàn)表1。

表1 各組大鼠線粒體MDA和琥珀酸脫氫酶活性變化Tab.1 Mitochondria of rats in each group MDA and SDH changes

3 討論

糖尿病膀胱是糖尿病常見(jiàn)并發(fā)癥之一，多發(fā)生于血糖控制比較差的患者。因發(fā)病隱蔽，出現(xiàn)尿頻、尿不盡時(shí)癥狀已經(jīng)比較嚴(yán)重，采用營(yíng)養(yǎng)神經(jīng)治療多無(wú)法控制癥狀。研究表明糖尿病膀胱功能障礙的主要原因之一是缺血/再灌注損傷[1-2]。研究表明[3]糖尿病膀胱張力的變化產(chǎn)生缺血再灌注會(huì)使氧自由基的生成數(shù)量明顯增加，脂質(zhì)分子中的不飽和脂肪酸在氧自由基氧化生成過(guò)氧化脂質(zhì)丙二醛（MDA）等小分子代表性產(chǎn)物，導(dǎo)致線粒體膜的損傷，阻斷其鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可能會(huì)控制糖尿病膀胱功能障礙[4]。

α-硫辛酸是一種雙硫化合物，它的抗氧化能力是葡萄糖的5～10倍，兼具脂溶性與水溶性的特性。可以在全身通行無(wú)阻，到達(dá)任何一個(gè)細(xì)胞部位。美國(guó)加州大學(xué)柏克萊分校的派克博士（Dr.Lester Packer）發(fā)現(xiàn)硫辛酸不像別的抗氧化劑在體內(nèi)只有一項(xiàng)特定的任務(wù)，它具“自由體”的身份，能在其他抗氧化劑短缺時(shí)為之“代行職責(zé)”，體內(nèi)缺乏維生素E或C，硫辛酸將暫時(shí)接手它們的工作。它具有400倍的維生素C和E的抗氧化作用，而且硫辛酸還能大大增強(qiáng)維生素C和E的作用。德國(guó)早在20世紀(jì)80年代即開(kāi)始應(yīng)用α-硫辛酸治療糖尿病外周神經(jīng)病變，取得了較好的臨床療效[5]；近年國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究提示α-硫辛酸治療糖尿病外周神經(jīng)病變可能是通過(guò)抗氧化作用[6-7]。

維生素E是脂溶的抗氧化劑，降低線粒體細(xì)胞結(jié)構(gòu)的多價(jià)不飽和脂肪酸免受自由基的損害，研究表明線粒體高濃度維生素E，減少過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生的丙二醛，并且明顯提高收縮反應(yīng)[8]。金濱等[9]研究表明，維生素E對(duì)膀胱功能的保護(hù)作用是通過(guò)抗氧化和維持鈣穩(wěn)態(tài)的雙重機(jī)制實(shí)現(xiàn)的。

本研究采用小劑量維生素E對(duì)糖尿病大鼠膀胱功能進(jìn)行保護(hù)，大鼠線粒體MDA和SDH與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；大劑量維生素E對(duì)糖尿病大鼠膀胱功能進(jìn)行保護(hù)，大鼠線粒體MDA和SDH與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此推測(cè)，維生素E在劑量較大時(shí)通過(guò)維持鈣穩(wěn)態(tài)對(duì)膀胱功能起保護(hù)作用，在劑量比較小時(shí)通過(guò)抗氧化對(duì)膀胱功能起保護(hù)作用。小劑量維生素E對(duì)線粒體MDA和SDH的影響無(wú)保護(hù)作用，這與Levin等[4]的研究結(jié)果一致。本文采用小劑量維生素E組+α-硫辛酸聯(lián)合應(yīng)用保護(hù)線粒體，療效優(yōu)于單獨(dú)應(yīng)用α-硫辛酸組，考慮為硫辛酸增強(qiáng)維生素E的抗氧化作用。

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