鼻咽癌患者EBV感染與血管生成關(guān)系研究

武要洪,李寶忠,李國萍,周永春,張 楠,李 佳

(1.昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院頭頸科;2.昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院腫瘤研究所,云南昆明,650118)

鼻咽癌是指發(fā)生于鼻咽黏膜的惡性腫瘤,男多于女。發(fā)病年齡大多為中年人,亦有青少年患病者[1]。病因與種族易感性、遺傳因素及病毒感染等有關(guān),鼻咽癌惡性程度較高,早期即可出現(xiàn)頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。Epstern-Barr病毒(EBV)是一種嗜人類淋巴細胞的γ-DNA皰疹病毒,與鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),通常呈隱性感染[2]。有研究表明,鼻咽癌患者組織中血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)呈高表達,且與微血管密度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移等顯著相關(guān)[3]。本研究通過檢測鼻咽癌患者體內(nèi)EBV及VEGF水平,旨在探討鼻咽癌患者EBV感染與血管生成的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病例選自2006年1月～2008年1月在昆明醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院頭頸外科住院治療的54例鼻咽癌患者(實驗組),其中男28例,女26例。年齡26～79歲,中位年齡55歲。所有病例均經(jīng)病理學(xué)確診。另選同期來本院體檢的40例健康者作為對照組。

1.2 標本收集

所有患者空腹抽取外周靜脈血2 mL,30 min內(nèi)1 500 r/min離心10 min,分離血清,置于-70℃保存待測。實驗前30 min取出平衡至室溫。檢測血清中EBV及VEGF水平。

1.3 檢測方法

1.3.1 定性PCR法檢測血清中EBV水平:人血清EBV PCR試劑盒購自深圳晶美生物工程公司,實驗過程嚴格按照試劑盒說明書進行。PCR擴增目的片段,同時設(shè)空白對照、陰性對照及陽性對照電泳檢測PCR產(chǎn)物。

1.3.2 雙抗夾心ELISA法檢測血清中VEGF水平:人血清VEGF試劑盒(進口分裝)購自深圳晶美生物工程公司,最小可測人血清VEGF為30 pg/mL。實驗過程嚴格按照試劑盒說明書進行。采用BIO-RAD550型酶標儀測定,在450 nm處讀取吸光度(D),測定值按標準曲線換算成VEGF含量。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者血清VEGF水平比較

實驗組患者血清VEGF水平為(143.86±19.49)pg/mL顯著高于40例對照組血清VEGF水平(51.23±12.66)pg/mL,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01),見表1。

2.2 鼻咽癌EBV陽性患者與EBV陰性患者血清VEGF水平比較

經(jīng)檢測實驗組患者中,有24例外周血EBV檢測呈陽性,30例外周血EBV檢測呈陰性,檢測發(fā)現(xiàn),EBV陽性患者血清VEGF水平明顯高于EBV陰性患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

表1 鼻咽癌患者EBV感染狀況血清VEGF水平比較( ±s)

表1 鼻咽癌患者EBV感染狀況血清VEGF水平比較( ±s)

注:與對照組比較,＊＊P<0.01;與EBV陰性組比較,##P<0.01。

分組 例數(shù) VEGF(pg/mL)對照組 40 51.23±12.66實驗組 54 143.86±19.49＊＊EBV陽性組 24 195.44±19.69##EBV陰性組 30 154.58±15.23

3 討 論

惡性腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移依賴于腫瘤血管生成。腫瘤血管越豐富,惡性程度越高,預(yù)后越差。在眾多的血管生成因子中,VEGF被認為是功能最強、特異性作用于內(nèi)皮細胞的生長因子之一[4-6]。多種腫瘤組織高表達VEGF,而且腫瘤細胞亦能合成VEGF。導(dǎo)致鼻咽癌患者血清VEGF(sVEGF)水平升高的原因,可能由于腫瘤細胞分泌的VEGF隨血液細胞穿過血管壁進入血液循環(huán);或是VEGF使血管壁通透性增加而彌散至血液中;另有學(xué)者認為血小板的活化或破壞是引起sVEGF水平升高的主要原因[7]。

EBV是一種嗜人類淋巴細胞的γ-DNA皰疹病毒,與鼻咽癌發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),通常呈隱性感染[8]。EBV主要是通過表達潛伏膜蛋白1(LMP1)起作用。LMP1是EBV在鼻咽癌上皮細胞中表達的唯一與細胞轉(zhuǎn)化有關(guān)的癌蛋白,至少有70%的鼻咽癌患者可檢測到LMP1的表達[9]。近年來的研究表明,LMP1可通過誘導(dǎo)COX-2的表達,使VEGF表達增高,促進腫瘤血管生成。COX-2抑制劑(NS-398)可以抑制VEGF的表達。LMP1還通過誘導(dǎo) IL-8、EGFR、EGF-2、HIF-1等的表達,上調(diào)VEGF的表達,促進腫瘤血管生成[10-11]。

本項研究結(jié)果顯示:鼻咽癌患者血清VEGF水平顯著高于健康人血清VEGF水平(P<0.01),表明腫瘤細胞分泌的VEGF隨血液細胞穿過血管壁進入血液循環(huán);或是VEGF使血管壁通透性增加而彌散至血液中。另有學(xué)者認為血小板的活化或破壞是引起sVEGF水平升高。

本項研究結(jié)果還顯示:EBV陽性的鼻咽癌患者血清VEGF水平明顯高于EBV陰性的鼻咽癌患者(P<0.05),表明EBV有可能通過LMP1誘導(dǎo)COX-2的表達使VEGF表達增高,促進腫瘤血管生成;或是通過LMP1誘導(dǎo) IL-8、EGFR、EGF-2、HIF-1等的表達,上調(diào)VEGF的表達,促進腫瘤血管生成。

綜上所述,鼻咽癌患者血清VEGF水平變化有可能作為一種新的腫瘤標志物對鼻咽癌病情進展進行動態(tài)觀察,為臨床治療提供客觀指標。

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