VEGF-A在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義

陳蘇娟 陳蘇蓉

江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院腫瘤治療中心，腫瘤內科三病區(qū)，江蘇 鹽城 224000

VEGF-A在非小細胞肺癌中的表達及其臨床意義

陳蘇娟 陳蘇蓉

江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院腫瘤治療中心，腫瘤內科三病區(qū)，江蘇 鹽城 224000

非小細胞肺癌； 血管內皮生長因子-A； 免疫組化

肺癌是目前最常見的惡性腫瘤，其發(fā)病率和死亡率逐年上升。全世界每年新發(fā)病例約120萬，80%為非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)［1］。雖然隨著腫瘤的早期發(fā)現和臨床診斷方法的進步，可予以積極手術、化療和放療，但NSCLC的復發(fā)率及病死率仍然很高。本研究運用免疫組化方法檢測NSCLC組織中的血管內皮生長因子-A(VEGF-A)，探討其在NSCLC的發(fā)生、增殖、侵襲和轉移中的作用，以期指導臨床治療。

1 資料和方法

1.1 臨床及病理資料

60例標本均來自江蘇省鹽城市第一人民醫(yī)院(2004—2008年)NSCLC手術切除患者，其中男性45例，女性15例；年齡36～73歲，平均60歲。術后病理均證實為NSCLC，其中34例為肺腺癌，26例肺鱗癌。根據組織學腫瘤分級，高分化9例，中分化25例，低分化26例；根據臨床病理分期(TNM)，Ⅰ期為19例，Ⅱ期18例，Ⅲ期17例，Ⅳ期6例；根據淋巴轉移情況，有淋巴結轉移33例，無淋巴結轉移27例。另各取15例性別和年齡構成與上述60例無顯著差異的良性病變組織手術標本作對照組。

1.2 主要試劑及試驗材料

鼠抗人VEGF-A多克隆抗體、S-P試劑盒均購自福州邁新生物技術開發(fā)公司，抗原修復液為檸檬酸鈉緩沖液(pH=6.0)，由邁新生物技術開發(fā)公司提供配方自行配制。

1.3 VEGF-A的檢測

VEGF-A表達的檢測均采用免疫組化SP法對石蠟切片行染色。陽性對照為福州邁新公司提供的陽性標本染色片，陰性對照用磷酸鹽緩沖液(PBS)替代一抗。試驗組和對照組分別是NSCLC和正常組織，試驗組按腫瘤的分化級別、淋巴結轉移、年齡、性別和臨床分期等項目分別進行研究。

1.4 陽性結果的判定方法

所有切片均采取雙盲法由兩位病理醫(yī)師觀察診斷。VEGF-A表達結果判斷：兩位醫(yī)師均認為細胞胞質內出現黃色或棕褐色為陽性判斷標準。低倍鏡(×10)下各選取5個有代表性區(qū)域，在高倍鏡(×40)下利用目鏡網格測微尺分成10個視野計數1 000個細胞，計算陽性細胞占總細胞數的比例，取陽性細胞平均百分率(labeling index，LI)。LI=陽性細胞數/1 000×100%。LI≤9%為陰性，＞9%～25%為(+)，＞25%～50%為(++)，≥50%為(+++)。采用雙盲半定量計算法計算LI。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用Stata7.0統(tǒng)計軟件包進行分析處理，分級資料用行×列表記錄，計數資料運用χ2檢驗、Spearman等級相關分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 VEGF-A在NSCLC中的表達情況

VEGF-A陽性腫瘤細胞主要表達產物呈黃色、棕褐色陽性顆粒彌漫分布在胞質中，60例患者中VEGF-A陽性表達共49例，陽性率為81.7%，其中(+)16例(26.7%)，(++)16例(26.7%)，(+++)6例(10%)。

2.2 VEGF-A表達與臨床病理參數的關系

NSCLC組織中VEGF-A的表達與年齡、性別、組織類型無明顯相關性(P＞0.05)；但在有淋巴結轉移組中的表達高于無淋巴結轉移組(P=0.001)。VEGF-A在NSCLC的臨床TMN分期中，陽性表達率分別為Ⅰ期68.4%，Ⅱ期77.7%，Ⅲ期94.1%，Ⅳ期100%，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.138)，但在Ⅲ、Ⅳ期中的陽性表達率較Ⅰ、Ⅱ期高，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。在分化差的腫瘤中陽性表達率高于分化好的腫瘤(P＜0.01，表1)。

表 1 NSCLC患者中VEGF陽性表達與臨床病理特征間的關系Tab. 1 The correlation between the positive expression of VEGF-A and the clinicopathological features in NSCLC

3 討 論

腫瘤轉移是導致肺癌患者死亡最主要的原因，肺癌遠處轉移常見有兩條途徑，一條是經血管轉移，另一條是經淋巴管轉移。腫瘤經何種途徑轉移除與腫瘤的組織學起源、生長部位、惡性程度及大小關系密切外，新近的研究顯示還與腫瘤內部血管或淋巴管生成有關。有文獻報道，VEGF-A表達水平與腫瘤血管轉移之間關系密切［1］。1971年，Folkman等［2］就提出腫瘤生長依賴血管生成的概念，即腫瘤細胞通過血管供應方式獲得營養(yǎng)，同時血管也為腫瘤轉移提供通道。因此，抑制腫瘤血管生成，可以抑制腫瘤生長和轉移［3］。當腫瘤直徑超過2 mm時，直接由微血管提供營養(yǎng)已不能滿足其生長需求，此時腫瘤生長依靠新生血管運送營養(yǎng)物質。新生血管不僅提供原發(fā)腫瘤生長所需血供，還能提供腫瘤血行轉移及遠處轉移所需通路。許多研究結果證實VEGF-A在腫瘤生長中起重要作用［4］。

VEGF-A是一種相對分子質量為34～45×103的同源二聚體，通過兩對煉間二硫鍵或共價鍵連接，與受體結合后促進血管內皮細胞分裂、增殖，增加微血管的通透性，對腫瘤血管生成起重要作用。本研究發(fā)現：VEGF-A在NSCLC的臨床TMN分期中的陽性表達率分別為Ⅰ期68.4%，Ⅱ期77.7%，Ⅲ期94.1%，Ⅳ期100%，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.138)。提示不同分期NSCLC中血管生成因子表達無差異性，可解釋臨床上一部分病理早期NSCLC患者的早期復發(fā)轉移。另外，VEGF-A在NSCLC陽性表達，總體上臨床Ⅲ、Ⅳ期患者顯著高于Ⅰ、Ⅱ期患者(P＜0.05)，與臨床上中晚期患者易復發(fā)轉移相符。

VEGF-A是最強、最特異的內皮細胞有絲分裂劑。它不但是內皮細胞存活的因素之一，而且是將循環(huán)內皮細胞運達新生血管的關鍵因素［5］。VEGF不僅能促進原發(fā)腫瘤的生長和血管生成，還在新轉移灶早期形成過程中起重要作用［6］。Koukourakis等［7］報道晚期NSCLC局部VEGF及其受體升高提示預后不良。江豐收等［8］報道VEGF在NSCLC的發(fā)生、生長和轉移中起著極其重要的作用，有可能成為一種新的腫瘤標記物。王曉彬等［9］報道VEGF檢測有助于預測早期NSCLC患者預后，為術后輔助治療提供了參考依據。本研究結果提示VEGF-A通路與癌癥發(fā)生發(fā)展及血行轉移浸潤相關。

肺癌發(fā)病率及死亡率逐年提高，尤其是NSCLC對化療的療效尚不能令人滿意。以腫瘤血管為靶點抑制血管形成進而控制腫瘤生長，對腫瘤的治療及防止其遠處轉移有重要意義。ECOG-E4599研究采用重組人抗血管內皮生長因子單克隆抗體(Avastin)針對VEGF靶點的單克隆抗體與化療聯合的隨機臨床試驗，該研究自2004年7月開始，共878例晚期NSCLC患者入選臨床試驗［10］。結果顯示化療加Avastin組(434例)與標準聯合化療組(444例)，中位生存期(TTP)分別為12.5個月和10.2個月，臨床緩解率分別為6.4個月和4.5個月，1年和2年生存率Avastin組為51.9%和22.1%，標準聯合化療組為43.7%和16.9%。2007年ASCO年會上，Magengade等［11］報告了由120個中心參加的、1 050例大樣本Ⅲ期隨機雙盲對照臨床研究的結果。對照組GP方案化療347例患者有效率為20%，TTP時間4.7個月，試驗組Avastin7.5 mg/kg+GP方案，有效率為34%，TTP時間6.1個月；試驗組Avastin15 mg/kg+GP方案，有效率30%，TTP時間為6.1個月。這些研究證明Avastin聯合化療在緩解率及TTP等方面均優(yōu)于單純化療，顯示了其在肺癌治療中的重要地位。

國內自行研制的腫瘤血管生成抑制劑如恩度、參一膠囊等聯合化療進行臨床試驗都取得了令人滿意的結果。如王金萬、孫燕等［12］負責的化療聯合恩度Ⅲ期臨床研究(NVB+DDP與NVB+DDP+恩度)，共有493例NSCLC患者入組，結果治療組緩解率為35.4%，對照組為19.5%(P＜0.001)；治療組TTP為6.3個月，對照組為3.6個月；治療組1年生存率為62.7%，對照組為31.5%(P＜0.001)。這些臨床試驗進一步說明了NSCLC轉移及預后與血管生成相關。

總之，VEGF-A在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉移中起重要作用。本研究通過檢測其在NSCLC組織中的表達，與腫瘤病理學特征的相關性，提示其可作為腫瘤生物學行為的評估及預后的指標，并為多靶點靶向治療NSCLC提供了依據。

［1］王豐, 韋芳, 陳霞芳, 等. 血管及淋巴管生成相關基因表達與腫瘤轉移率和轉移途徑的比較分析［J］. 腫瘤, 2008,28(8): 635-639.

［2］Folkman J. What is the evidence that tumors are angiogenesis dependent?［J］. Natl Cancer Inst, 1990, 92(1): 4-6.

［3］Kuiper RA, Schellens JH, Blijham GH, et al. Clinical research on antiangiogenic therpy［J］. Pharmacol Res, 1999, 37(1):1-16.

［4］Midgley R, Kerr D. Bevaizumab: Current status and future directions［J］. Ann Oncol, 2005, 16: 999-1004.

［5］Asahara T, Takahashi T, Masuda H, et al. VEGF contributes to postnatal neovascularization by mobilizing bone marrowderived endothelial progenitor cells［J］. EMBO J, 1999, 18:3964-3972.

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［7］Koukourakis MI, Giatromanolaki A, Thorpe PE, et al. Vascular endothelial growth factor/KDR activated microvessel density versus CD31 standard microvessel density in non-small cell lung cancer［J］. Cancer Res, 2000, 60: 3088-3095.

［8］江豐收, 王剛, 孫玉蓓, 等. 非小細胞肺癌患者血清VEGF表達水平及臨床［J］. 臨床腫瘤學雜志, 2008, 13(4): 325-328.

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［10］Sandler AB, Gray R, Brahmer J, et al. Randomized phaseⅡ/Ⅲ trial of paclitaxel(P) plus carboplatin(C) with or without bevacizumab in patients with advanced non-squamous nonsmall cell lung cancer: an Easter Cooperative Oncology Group(ECOG) trial-E4599［C］. ASCO Annual Meeting,2005, 23: LBA4.

［11］Magengade C, Pawel JV, Zatloukal P, et al. Randomised,double-blind multicenter Ⅲ phase study of bevacizumab in combination with cisplatin and gemcitabine in chemotherapynaive patients with advanced or recurrent non-squamous nonsmall cell lung cancer: B017704［J］. JCO(ASCO meeting Abstracts), 2007, 25(18Suppl): 388.

［12］王金萬, 孫燕, 劉永煜. 恩度聯合NP治療晚期非小細胞肺癌隨機、雙盲、對照、多中心期臨床研究［J］. 中國癌癥雜志, 2005, 8(4): 283-290.

10.3969/j.issn.1007-3969.2011.02.015

R734.2

A

1007-3639(2011)02-0153-03

陳蘇娟 E-mail:chensujuan77@163.com

2010-09-17

2010-11-23）