維藥羅勒不同提取物對角叉菜膠所致大鼠急性胸膜炎模型的影響

古蘭·托來西， 艾尼瓦爾·吾買爾， 田樹革， 娜迪拉·熱依木， 阿布來提·阿布力孜， 依巴代提·吐乎提*

(1.新疆醫(yī)科大學藥學院藥理教研室，新疆烏魯木齊 830054;2.新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院實驗中心，新疆 烏魯木齊 830054;3.新疆醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830054)

維藥羅勒不同提取物對角叉菜膠所致大鼠急性胸膜炎模型的影響

古蘭·托來西1， 艾尼瓦爾·吾買爾1， 田樹革2， 娜迪拉·熱依木3， 阿布來提·阿布力孜1， 依巴代提·吐乎提1*

(1.新疆醫(yī)科大學藥學院藥理教研室，新疆烏魯木齊 830054;2.新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院實驗中心，新疆 烏魯木齊 830054;3.新疆醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院，新疆烏魯木齊 830054)

目的 探討羅勒不同提取物對胸膜炎模型大鼠的腫瘤壞死因子-a(TNF-a)，前列腺素E2(PGE2)，白細胞介素-8(IL-8)的影響。方法 實驗分為9組，每組連續(xù)灌胃7 d，末次給藥30 min后采用角叉菜膠所致大鼠胸膜炎模型。結果模型組大鼠胸腔滲出液中TNF-a，蛋白質量明顯升高(P＜0.001，P＜0.01)及血清中IL-8，PGE2顯著升高(P＜0.001)。結論 羅勒不同提取物對角叉菜膠所致大鼠急性胸膜炎有顯著的抑制作用，其作用機制可能是通過抑制炎性介質PGE2的生成和細胞因子TNF-a，IL-8的升高等環(huán)節(jié)產(chǎn)生抗炎作用。

維藥羅勒;角叉菜膠;胸膜炎

羅勒Ocimum basilicumL.是唇形科羅勒屬一年生草本植物，是維吾爾醫(yī)應用歷史悠久的常用藥材之一，植物維文名為熱依汗(Rayhan)［2］，別名九層塔，毛羅勒，丁香，香草等［3］。原產(chǎn)于以印度為中心的亞洲熱帶［8］，我國中部，南部，東部有栽培，主要分布與云南，四川，廣東，臺灣，湖南，福建，新疆等地?，F(xiàn)代化學研究表明羅勒的主要成分包括揮發(fā)油類，黃酮類及其苷類，香豆素類，此外還含萜類和生物堿類［4］。本實驗所研究的是在新疆栽培的羅勒。本課題組前期研究已表明新疆羅勒有降血壓，調血脂及抗血栓作用，在國外研究表明羅勒具有抗炎作用，但國內尚未見羅勒抗炎作用的研究報告。本實驗研究羅勒不同提取物(水，乙酸乙酯，正丁醇)對胸腔滲出液的炎癥因子，炎性介質以及蛋白質量的影響作了相關研究，從中探討其抗炎作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 藥品及試劑 鹽酸地塞米松片:0.75 mg/片(天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司，批號090817)，戊巴比妥鈉(批號860901)，角叉菜膠(Carrageenan，Car)(Biosharp公司，批號1000245)，大鼠腫瘤壞死因子-a(TNF-a)ELISA試劑盒(批號201005)，大鼠白細胞介素8(IL-8)ELISA試劑盒(批號201005)，大鼠前列腺素 E2(PGE2)ELISA試劑盒(批號201005均由R＆D公司)，Bradford蛋白濃度測定試劑盒(北京博邁德科技發(fā)展有限公司，批號20301151)，肝素鈉(Solarbio公司，批號H8060)。

1.1.2 實驗儀器 旋轉蒸發(fā)器 RE-52AA，恒溫水浴鍋 B-220(上海亞榮生化儀器廠，新疆醫(yī)科大學中藥-生藥學實驗室提供)，冷凍干燥機(北京博醫(yī)康實驗儀器有限公司，F(xiàn)D-1)，ODA-LO2510102酶標分析儀(BIO-RAD公司)，LXJ-IIB低速大容量多管離心機。

1.1.3 實驗動物 雄性 SD大鼠108只，清潔級，體質量(200±20)g，均由新疆醫(yī)科大學動物中心提供。

1.2 實驗方法

1.2.1 藥材的提取 新疆托克遜縣采集的羅勒地上部分粉碎后用8～10倍量水浸泡，用回流法回流提取3次，合并3次濾液，進行減壓濃縮至浸膏狀，置－70℃冷藏1 h，取出后放入冷凍干燥機24 h后得羅勒水提物的固體粉末;乙酸乙酯，正丁醇部分從乙醇提取液中分別萃取得到的(乙醇提方法采用95%乙醇溶液，其余方法完全相同)羅勒乙酸乙酯，正丁醇萃取物的固體粉末。

實驗時羅勒水提取物和正丁醇萃取物固體粉末加蒸餾水溶解，乙酸乙酯萃取物在5%的CMC-Na溶液溶解至所需濃度。本實驗前期定性實驗結果表明水提物主要含糖類，乙酸乙酯提取部分含黃酮類、皂苷類、萜類，正丁醇提取部分含黃酮苷類。

1.2.2 雄性SD大鼠108只，隨機分為9組，每組12只:正常組，模型對照組，陽性對照組(地塞米松7.5 mg/kg)，羅勒水提物高，低劑量組(400 mg/kg，100 mg/kg)，羅勒乙酸乙酯萃取物高，低劑量組(400 mg/kg，100 mg/kg)，羅勒正丁醇萃取物高，低劑量組(400 mg/kg，100 mg/kg)。每組動物連續(xù)灌胃7 d，每日1次，正常組與模型組給予等體積的生理鹽水，末次給藥30 min后，模型對照組及各給藥組動物分別用乙醚輕度麻醉后向胸腔內注入角叉菜膠(0.2 mL/100 g)［1，5-7］，正常組注入等體積生理鹽水，致炎 12 h 后，大鼠摘除眼球取血后，戊巴比妥鈉麻醉處死，打開胸腔，用玻璃吸管將胸腔內全部滲出液吸出，然后以PBS溶液(含肝素5 U/mL)2 mL沖洗胸腔2次，沖洗液和滲出液合并，將滲出液和血液3 000 r/min離心15 min，取上清液，按試劑盒說明書操作。

1.3 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件處理，所有結果用±s表示，采用多組之間單因素方差分析和SNK兩兩比較，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 羅勒不同提取物對各組胸膜炎大鼠胸腔滲出液中TNF-a，Pro量的影響 與正常組比較，模型組大鼠胸腔滲出液中TNF-a，Pro量顯著升高。與模型組比較，陽性對照組大鼠胸腔滲出液中TNF-a，Pro量顯著降低(P＜0.001)，羅勒提取物水溶性部位高、低劑量組，乙酸乙酯高、低劑量組，正丁醇高、低劑量組均有顯著降低 TNF-a量(P＜0.001，P＜0.01)。水提物高劑量與乙酸乙酯，正丁醇高劑量比較，與正丁醇高劑量有明顯差異(P＜0.01)，乙酸乙酯高劑量與正丁醇高劑量比較也有差異，水提物與乙酸乙酯高劑量的相互接近，無差別。水提物低劑量與乙酸乙酯，正丁醇低劑量比較，與正丁醇低劑量有顯著性差別(P＜0.05)，乙酸乙酯低劑量與正丁醇低劑量比較也有明顯的差別(P＜0.01)。結果見表1。

表1 羅勒不同提取物對各組胸膜炎大鼠胸腔滲出液中TNF-a，Pro質量的影響(±s)

表1 羅勒不同提取物對各組胸膜炎大鼠胸腔滲出液中TNF-a，Pro質量的影響(±s)

注:與模型組比較，*P ＜0.05，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0. 001;與水提物高劑量比較，##P ＜0. 01;與乙酸乙酯高劑量比較，▲▲P ＜0. 01;與水提物低劑量比較，△P ＜0. 05;與乙酸乙酯低劑量比較，?P ＜0.05。

組別 劑量/(mg/kg) 動物數(shù)/只 TNF-a/(ng/L) Pro/(μg/L)正常組 — 10 11.86±2.55＊＊＊9.09 ±4.18模型組 — 9 27.99±8.34 17.33±2.18＊＊＊地塞米松組 7.5 9 11.61±2.22＊＊＊ 9.90±4.21###羅勒水提物高劑量組 400 10 11.97±1.02＊＊＊ 15.26±4.75###羅勒水提物低劑量組 100 10 13.47±2.23＊＊＊ 16.33±3.30＊＊羅勒乙酸乙酯高劑量組 400 10 12.33±1.39＊＊＊ 10.92±3.75###羅勒乙酸乙酯低劑量組 100 10 13.85±2.71＊＊＊ 13.54±4.36#羅勒正丁醇高劑量組 400 10 17.04±3.21＊＊##▲▲ 10.70±3.39###羅勒正丁醇低劑量組 100 10 17.32±2.64＊＊△? 10.72±2.48###

2.2 羅勒不同提取物對各組胸膜炎大鼠血清中IL-8，PGE2的影響 與正常組比較，模型組大鼠胸腔滲出液中IL-8，PGE2的量顯著升高。與模型組比較，陽性對照組大鼠血清中IL-8，PGE2的量顯著降低(P＜0.001)，羅勒提取物水溶性部位高、低劑量組，乙酸乙酯高、低劑量組，正丁醇高、低劑量組均有顯著降低血清中 IL-8，PGE2的量(P＜0.001，P＜0.01)。與地塞米松組比較，乙酸乙酯低劑量，正丁醇低劑量有顯著性差異(P＜0.05)，水提物低劑量與乙酸乙酯低劑量也有顯著性差異(P＜0.05)。結果見表2。

表2 羅勒不同提取物對各組胸膜炎大鼠血清中IL-8，PGE2的影響(±s)

表2 羅勒不同提取物對各組胸膜炎大鼠血清中IL-8，PGE2的影響(±s)

注:與模型組比較，＊＊P ＜0.01，＊＊＊P ＜0. 001;與地塞米松組比較，+P ＜0. 05;與水提物低劑量比較，△P ＜0.05。

組別 劑量/(mg/kg) 動物數(shù)/只 IL-8/(ng/L) PGE2/(ng/L)正常組 — 10 139.51±18.91＊＊＊ 38.08±4.41＊＊＊模型組 — 9 215.78±39.19 77.33±3.59地塞米松組 7.5 9 126.10±15.63＊＊＊ 45.92±3.82＊＊＊羅勒水提物高劑量組 400 10 140.21±18.42＊＊＊ 47.65±4.47＊＊＊羅勒水提物低劑量組 100 10 142.88±7.79＊＊＊ 51.36±4.23＊＊羅勒乙酸乙酯高劑量組 400 10 155.38 ±5.23＊＊＊+ 47.82 ±4.37＊＊＊羅勒乙酸乙酯低劑量組 100 10 159.47±8.08＊＊＊+△ 48.90±4.81＊＊＊羅勒正丁醇高劑量組 400 10 143.33±30.88＊＊＊ 44.27±2.66＊＊＊羅勒正丁醇低劑量組 100 10 154.10 ±18.91＊＊＊+ 47.60 ±6.22＊＊＊

3 討論

角叉菜膠誘導的大鼠胸膜炎模型是常用的急性炎癥模型［9］，該模型在炎癥反應時，巨噬細胞，中性粒細胞，血小板等炎細胞激活，釋放大量的炎癥介質，如TNF-a，PGs，組胺，纖維蛋白裂解物等，本研究羅勒不同提取物對胸腔滲出液的炎癥因子，炎性介質以及蛋白質量的影響作了相關研究。

TNF-a是一種重要的由激活的單核-巨噬細胞系統(tǒng)產(chǎn)生，并具有廣泛生物學功能的促炎性因子和免疫調節(jié)因子，可通過對血管內皮細胞的作用，引起肺部損傷和胸膜炎，能增加中性粒細胞的黏附，指導胸腺細胞的成熟，并可刺激增強中性多核白細胞的浸潤，吞噬活性與氧化自由基的產(chǎn)生，啟動單核-巨噬細胞釋放 IL-6，IL-8，PGE2等炎癥介質［9］。急性炎癥過程中涉及體內TNF，IL-1，IL-6，IL-8水平增加。本實驗預防性給予羅勒不同提取物可抑制炎癥時細胞因子TNF-a大量產(chǎn)生，從而進一步抑制IL-6，IL-8，PGE2的釋放，羅勒不同提取物對TNF-a有顯著地抑制作用(P＜0.001)。其中筆者還測了IL-8，PGE2的含量，羅勒不同提取物對血清中IL-8，PGE2有顯著地抑制作用(P＜0.001)。

通過本次實驗，初步發(fā)現(xiàn)羅勒不同提取物對胸膜炎有抑制作用，其作用機制可能是通過抑制細胞因子TNF-a和IL-8的升高，抑制炎性介質PGE2的生成，從而達到抗炎效果。

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R285.5

B

1001-1528(2011)08-1410-03

2010-12-27

國家自然科學基金(30660210)

古蘭·托來西(1984—)，女，碩士研究生。Tel:15099509375，E-mail:Gulan.215@163.com

*通信作者:依巴代提·吐乎提(維吾爾族)，女，教授，碩士生導師，研究方向:心血管藥理。Tel:13899930546