任宇斕 ,于厚軍 ,蔣文生 ,駱志強(qiáng) ,袁 超 ,鄭朝峰 ,托建東
(1.新疆兵團(tuán)農(nóng)三師圖木舒克市畜牧獸醫(yī)工作站,新疆 圖木舒克 843901;2.新疆兵團(tuán)農(nóng)三師44團(tuán)獸醫(yī)站, 843806)
近年,國(guó)家對(duì)牲畜口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病均實(shí)施了強(qiáng)制免疫措施,對(duì)于有效防控重大動(dòng)物疫病起到了關(guān)鍵作用。在生產(chǎn)、實(shí)踐中為不影響疫苗免疫效果,各方均強(qiáng)調(diào)疫苗單獨(dú)使用,且要求多重免疫須有一段間隔期,這不僅加大了人力、物力的投入,而且,免疫時(shí)產(chǎn)生的應(yīng)激反應(yīng)及頻繁打擾養(yǎng)殖戶,使養(yǎng)殖業(yè)主不快,防疫工作的開(kāi)展受阻;其次隨著生豬生產(chǎn)節(jié)奏的加快,商品代生豬5個(gè)月即可出欄,若嚴(yán)格按多重免疫注苗的間隔期,則可能有的疫苗未使用,一批豬就已出欄,造成疫苗報(bào)廢與疫情隱患。本試驗(yàn)旨在探索新的科學(xué)免疫接種方法,確定合理有效的免疫程序。以減少生豬的疫苗接種次數(shù)及應(yīng)激反應(yīng),提高防疫工作效率,確保免疫效果。試驗(yàn)如果推廣實(shí)施將對(duì)防疫工作具有較好的指導(dǎo)意義:一是大大節(jié)約防疫工作中人力,物力的投入;二是有效降低應(yīng)激反應(yīng)給生豬生產(chǎn)養(yǎng)殖帶來(lái)的損失;三是為提高防制豬類(lèi)重大動(dòng)物疫病的能力和水平更上新臺(tái)階,為養(yǎng)豬業(yè)健康、穩(wěn)定、和諧發(fā)展打下基礎(chǔ)。
豬口蹄疫O型滅活疫苗(OZK/93株+OR/80株),生產(chǎn)批號(hào):0132003,生產(chǎn)日期:2010.01.10,有效期至2011.01.09;生產(chǎn)廠家:金宇保靈生物藥品有限公司。
政府采購(gòu)豬瘟活疫苗(脾淋源),生產(chǎn)批號(hào):1006023-2,有效期至2011.06.01,生產(chǎn)廠家:齊魯動(dòng)物保健品有限公司。
高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(JXA1—R株),生產(chǎn)批號(hào):2009030,有效期至 2011.05.06,生產(chǎn)廠家:揚(yáng)州威克生物工程有限公司。
高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(JXA1—R株)專(zhuān)用稀釋液,生產(chǎn)批號(hào):100315,生產(chǎn)日期:2010.03.15,有效期至2012.03.14,生產(chǎn)廠家:揚(yáng)州威克生物工程有限公司。
低速離心機(jī)LC-800,科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司。
定溫恒溫干燥箱N(xiāo)DO-400,日本東京理化器械(株)上海工程制造。
伯樂(lè)550酶標(biāo)儀,合普機(jī)電工程(天津)有限公司。
ZW-A微量振蕩器,常州國(guó)華電器有限公司。
20ml金屬注射器,耳標(biāo)鉗,耳標(biāo),0.9號(hào)的獸用采血器,豬保定器,等。
豬瘟正向血凝抗原,生產(chǎn)批號(hào):100524,豬瘟正向稀釋液,生產(chǎn)批號(hào):100512,生產(chǎn)廠家:中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所。
口蹄疫O型正向血凝抗原,生產(chǎn)批號(hào):101010,口蹄疫正向稀釋液,生產(chǎn)批號(hào):100918,生產(chǎn)廠家:中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所。
高致病性豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)ELISA試劑盒,生產(chǎn)批號(hào):100810,生產(chǎn)廠家:武漢科前動(dòng)物生物有限公司。
新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)農(nóng)三師44團(tuán)某規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng):飼養(yǎng)條件一致,健康狀況良好,體重25~30 kg育肥豬。
隨機(jī)抽取40頭健康狀況良好,飼養(yǎng)條件一致的體重25~30 kg育肥豬,分成四組,分別為A組豬口蹄疫(FMD)+豬瘟(HC)組,B 組豬口蹄疫(FMD)+高致病性豬藍(lán)耳?。≒RRS)組,C組豬瘟(HC)+豬高致病性藍(lán)耳?。≒RRS)組,D 組豬口蹄疫(FMD)+豬瘟(HC)+高致病性豬藍(lán)耳?。≒RRS)組。每組10頭。根據(jù)分組各試驗(yàn)樣本豬同時(shí)分點(diǎn)免疫注射相應(yīng)疫苗,接種劑量嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作。并加施免疫標(biāo)識(shí)。注苗后每2 h測(cè)量一次體溫,測(cè)兩次,同時(shí)觀察注射局部的反應(yīng)和全身反應(yīng)。對(duì)免疫副反應(yīng)強(qiáng)烈的樣本豬及時(shí)肌肉注射腎上腺素脫敏。篩選出免疫副反應(yīng)較弱的搭配組繼續(xù)試驗(yàn)。
2.2.1 試驗(yàn)動(dòng)物篩選及分組
另隨機(jī)抽取250頭飼養(yǎng)條件一致健康狀況良好,體重25~30 kg的育肥豬,采全血分離血清進(jìn)行口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè),口蹄疫、豬瘟抗體監(jiān)測(cè)采用正向間接血凝實(shí)驗(yàn)。高致病性豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)。選取同時(shí)滿足口蹄疫、豬瘟抗體效價(jià)小于4 log2,高致病性豬藍(lán)耳病監(jiān)測(cè)為陰性的豬150頭為試驗(yàn)樣本。 隨機(jī)分成5組,分別為A組豬口蹄疫(FMD)+豬瘟(HC)組,B組豬口蹄疫(FMD)+高致病性豬藍(lán)耳病(PRRS)組,C 組豬瘟(HC)+豬高致病性藍(lán)耳?。≒RRS)組,D組豬口蹄疫(FMD)+豬瘟(HC)+高致病性豬藍(lán)耳?。≒RRS)組。和E組即三種疫苗間隔免疫對(duì)照組(高致病性豬藍(lán)耳病一周后豬瘟一周后豬口蹄疫),每組30頭。
2.2.2 試驗(yàn)動(dòng)物免疫注苗
常規(guī)飼養(yǎng)一周,所有樣本豬根據(jù)分組于不同部位注射相應(yīng)疫苗,注苗方案如表1。免疫劑量嚴(yán)格按說(shuō)明書(shū)操作,并加施免疫標(biāo)識(shí)。觀察注射局部的反應(yīng)和全身反應(yīng),對(duì)應(yīng)激反應(yīng)強(qiáng)烈的仔豬及時(shí)注射腎上腺素脫敏。并記錄注苗日期,時(shí)間及注苗后反應(yīng)。
表1 各組樣本豬免疫注苗方案
2.2.3 免疫抗體監(jiān)測(cè)
2.2.3.1 采血方案 對(duì)照組E組接種豬瘟疫苗時(shí)四個(gè)試驗(yàn)組免疫一周,四個(gè)試驗(yàn)組樣本豬進(jìn)行第一次采血,根據(jù)分組編號(hào)記錄。對(duì)照組E組接種口蹄疫滅活苗時(shí)四個(gè)試驗(yàn)組免疫兩周,四個(gè)試驗(yàn)組所有樣本豬進(jìn)行第二次采血,根據(jù)分組編號(hào)記錄,對(duì)照組E組接種口蹄疫滅活苗一周時(shí)四個(gè)試驗(yàn)組免疫三周,全部試驗(yàn)樣本豬采全血。以后每7天,進(jìn)行一次全面采血監(jiān)測(cè)至免疫抗體水平增長(zhǎng)緩慢或基本不增長(zhǎng)時(shí),五個(gè)試驗(yàn)組樣本豬均進(jìn)行與首免同方案同劑量同批次疫苗的加強(qiáng)免疫。加強(qiáng)免疫后仍以7 d為周期全面采血監(jiān)測(cè)。直至免疫抗體效價(jià)達(dá)到峰值并保持相對(duì)穩(wěn)定之后。以21 d為周期全面采血監(jiān)測(cè)至免疫抗體效價(jià)達(dá)不到農(nóng)業(yè)部規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)(5 log2)[1]。
2.2.3.2 監(jiān)測(cè)方法 分離血清進(jìn)行口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè),口蹄疫、豬瘟抗體監(jiān)測(cè)采用正向間接血凝實(shí)驗(yàn)。高致病性豬藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè)采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。試驗(yàn)過(guò)程按國(guó)家農(nóng)業(yè)部《高致病性禽流感等14種動(dòng)物疫病防治技術(shù)規(guī)范》[2]及ELISA監(jiān)測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)操作。并對(duì)各組每次抗體效價(jià)進(jìn)行比較,測(cè)算合格率。
本試驗(yàn)中各組樣本豬均無(wú)明顯免疫副反應(yīng),此項(xiàng)結(jié)果與相關(guān)文獻(xiàn)[3,5-9]報(bào)道的一致。
3.2.1 判定標(biāo)準(zhǔn)
根據(jù)國(guó)家農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫及監(jiān)測(cè)實(shí)施方案的規(guī)定運(yùn)用正向間接血凝監(jiān)測(cè)豬口蹄疫和豬瘟免疫抗體效價(jià)達(dá)到5 log2為合格。免疫抗體合格率全年保持在70%以上[1]。
3.2.2 口蹄疫免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果
用正向間接血凝監(jiān)測(cè)A、B、D、E組豬口蹄疫免疫抗體效價(jià)及合格率結(jié)果見(jiàn)表2。
表2 口蹄疫“O”型正向間接血凝監(jiān)測(cè)免疫抗體合格率及平均抗體效價(jià)
3.2.3 豬瘟免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果
用正向間接血凝監(jiān)測(cè)A、C、D、E組豬瘟免疫抗體效價(jià)及合格率結(jié)果見(jiàn)表3。
3.2.4 高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體監(jiān)測(cè)結(jié)果
3.2.5 各組比較與分析
表3 豬瘟免疫抗體正向間接血凝監(jiān)測(cè)合格率及平均抗體效價(jià)
從圖1、2可以看出,豬口蹄疫免疫抗體28 d監(jiān)測(cè)的平均抗體效價(jià)與35天監(jiān)測(cè)的平均抗體效價(jià)基本保持一致,所以在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)選擇首免后28~30 d進(jìn)行口蹄疫加強(qiáng)免疫,這與國(guó)家農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃實(shí)施方案中要求口蹄疫免疫一個(gè)月后進(jìn)行加強(qiáng)免疫不謀而合。但在本試驗(yàn)中由于監(jiān)測(cè)結(jié)果的時(shí)間差,于首免35 d時(shí),各試驗(yàn)組進(jìn)行了與首免同方案同劑量同批次疫苗的加強(qiáng)免疫。
豬口蹄疫免疫抗體對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期為首免后14~21 d,42~49 d,經(jīng)加強(qiáng)免疫于63 d免疫抗體效價(jià)達(dá)到峰值。首免后35 d,免疫合格率達(dá)到70%,剛剛達(dá)到國(guó)家農(nóng)業(yè)部的要求,經(jīng)加強(qiáng)免疫后于49~84 d免疫合格率達(dá)到100%。并持續(xù)近30 d。群體免疫抗體合格率達(dá)到70%以上持續(xù)至105 d。
A組與E組相比,A組口蹄疫平均免疫抗體效價(jià)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于E組,合格率雖都能達(dá)到100%,但A組峰值維持時(shí)間較E組短,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異極顯著(P<0.01)。
B組與E組相比,B組口蹄疫平均免疫抗體效價(jià)低于E組,但較A組稍高一些;合格率雖都能達(dá)到100%,但B組峰值維持時(shí)間較E組短。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異顯著(0.01<P<0.05)。
D組與E組相比,D組口蹄疫平均免疫抗體效價(jià)較E組稍低一點(diǎn)。合格率同時(shí)達(dá)到100%,且峰值維持時(shí)間基本保持一致,差異不顯著(P>0.05)。
各組相比不難看出豬口蹄疫免疫效果由強(qiáng)到弱的順序?yàn)镋組≥D組>B組>A組。合格率D組與E組相同。
從圖3、4可以看出,豬瘟免疫抗體未出現(xiàn)加強(qiáng)免疫臨界點(diǎn),分析有兩種可能,一是豬瘟免疫可能不需要加強(qiáng)免疫,但這種可能性比較?。欢菗?jù)本試驗(yàn)由于監(jiān)測(cè)結(jié)果的時(shí)間差,于首免35 d時(shí),各試驗(yàn)組進(jìn)行了與首免同方案同劑量同批次疫苗的加強(qiáng)免疫。說(shuō)明豬瘟加強(qiáng)免疫時(shí)間恰恰是首免后35 d,這與國(guó)家農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃實(shí)施方案中要求豬瘟免疫35 d后進(jìn)行加強(qiáng)免疫不謀而合。所以應(yīng)當(dāng)排除第一種可能。
豬瘟免疫抗體對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期為首免后7~14 d。經(jīng)加強(qiáng)免疫于42 d免疫抗體效價(jià)達(dá)到峰值,峰值持續(xù)近30 d。首免后21 d,免疫合格率達(dá)到70%~80%,經(jīng)加強(qiáng)免疫后于42 d免疫合格率達(dá)到100%。并持續(xù)近兩個(gè)月。群體免疫抗體合格率達(dá)到70%以上持續(xù)至147 d。
A組與E組相比,A組豬瘟平均免疫抗體效價(jià)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于E組,合格率雖都能達(dá)到100%,但A組峰值維持時(shí)間較短,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異極顯著(P<0.01)。
C組與E組相比,C組豬瘟平均免疫抗體效價(jià)低于E組,但較A組稍高一些;合格率雖都能達(dá)到100%,但C組峰值維持時(shí)間較E組短。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異顯著(0.01<P<0.05)。
D組與E組相比,D組豬瘟平均免疫抗體效價(jià)較E組略高。合格率同時(shí)達(dá)到100%,且峰值維持時(shí)間基本保持一致,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異不顯著(P>0.05)。
各組相比不難看出豬瘟免疫效果由強(qiáng)到弱的順序?yàn)镈組≥E組>B組>A組,合格率D組與E組相同。
從圖5可以看出,高致病性豬藍(lán)耳病抗體未出現(xiàn)加強(qiáng)免疫臨界點(diǎn),本試驗(yàn)由于監(jiān)測(cè)結(jié)果的時(shí)間差,于首免35 d后,各試驗(yàn)組進(jìn)行了與首免同方案同劑量同批次疫苗的加強(qiáng)免疫。說(shuō)明高致病性豬藍(lán)耳病加強(qiáng)免疫時(shí)間是首免后35 d。高致病性豬藍(lán)耳病抗體對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期為首免后14~21 d。經(jīng)加強(qiáng)免疫于56 d達(dá)到峰值,峰值持續(xù)近7 d。免疫陽(yáng)性率達(dá)到70%~73.3%。剛剛達(dá)到國(guó)家農(nóng)業(yè)部的要求。
B組與E組相比,B組高致病性豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率略高于E組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異顯著(0.01<P<0.05)。
C組與E組相比,C組高致病性豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率略低于E組,經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析差異顯著(0.01<P<0.05)。
D組與E組相比,D組高致病性豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率與E組相同。
各組相比不難看出高致病性豬藍(lán)耳病免疫效果由強(qiáng)到弱的順序?yàn)锽組>E組=D組>A組。
試驗(yàn)數(shù)據(jù)整理與分析得到以下結(jié)論:1.各組平均免疫抗體效價(jià)及群體合格率在一定時(shí)期均能達(dá)到國(guó)家規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn);2.各組間相較免疫效力及免疫持續(xù)期均存有差異;3.通過(guò)分析比較采用豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注苗組與三種疫苗間隔免疫組的免疫效果最佳,但較之省時(shí)省力建議采用豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)注苗的方法免疫。
本試驗(yàn)中設(shè)計(jì)了安全性預(yù)實(shí)驗(yàn),旨在降低試驗(yàn)風(fēng)險(xiǎn)與成本。在本試驗(yàn)中各組樣本豬均未出現(xiàn)明顯免疫副反應(yīng),可能與日齡、品種、個(gè)體差異、氣候環(huán)境等因素有關(guān),在以后的實(shí)際工作中是否會(huì)出現(xiàn)免疫副反應(yīng)有待進(jìn)一步考究。
相關(guān)文獻(xiàn)顯示[4]豬口蹄疫在免疫后56 d達(dá)到峰值,本試驗(yàn)中免疫后63 d達(dá)到峰值,這可能與本次試驗(yàn)監(jiān)測(cè)頻率高,使峰值期與持續(xù)期更準(zhǔn)確。
豬口蹄疫與豬瘟同時(shí)分點(diǎn)免疫組與三種疫苗間隔免疫組比較,口蹄疫與豬瘟免疫抗體水平都降低,這是否說(shuō)明口蹄疫與豬瘟同時(shí)分點(diǎn)免疫對(duì)口蹄疫與豬瘟抗體產(chǎn)生都具有一定的抑制作用,是否相互拮抗還有待進(jìn)一步研究。
豬口蹄疫與高致病性豬藍(lán)耳病同時(shí)分點(diǎn)免疫組與三種疫苗間隔免疫組比較,口蹄疫免疫抗體水平略有降低。而藍(lán)耳病的抗體陽(yáng)性率明顯升高,這是否說(shuō)明口蹄疫免疫對(duì)高致病性豬藍(lán)耳病抗體產(chǎn)生具有促進(jìn)作用,還有待考究。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[7-8],已有部分地區(qū)將此種免疫程序運(yùn)用到生產(chǎn)實(shí)踐中。
豬瘟與高致病性藍(lán)耳病同時(shí)分點(diǎn)免疫組與三種疫苗間隔免疫組比較,豬瘟和藍(lán)耳病抗體水平均略有降低,這是否說(shuō)明豬瘟與高致病性豬藍(lán)耳病同時(shí)分點(diǎn)免疫對(duì)豬瘟與藍(lán)耳病抗體產(chǎn)生都具有抑制作用,是否相互拮抗還有待進(jìn)一步研究。
豬口蹄疫、豬瘟、高致病性豬藍(lán)耳病三種疫苗同時(shí)分點(diǎn)免疫組與三種疫苗間隔免疫組相比較,高致病性豬藍(lán)耳病抗體陽(yáng)性率基本沒(méi)有變化。豬瘟免疫抗體效價(jià)高于三種疫苗間隔免疫組,其微觀機(jī)理還有待進(jìn)一步研究??谔阋叩钠骄贵w效價(jià)雖略低于三種疫苗間隔免疫組,但兩組群體合格率與免疫保護(hù)期一致。
通過(guò)本次試驗(yàn)可以確定的是,首免后28~35 d期間必須進(jìn)行一次加強(qiáng)免疫,否則免疫抗體效價(jià)及合格率很難達(dá)到理想的效果。
本次試驗(yàn)藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè)陽(yáng)性率普遍比較低,原因可能在于目前采用的高致病性豬藍(lán)耳病抗體檢測(cè)ELISA試劑盒只對(duì)豬血清中抗藍(lán)耳病毒N蛋白敏感。且不能定性定量的監(jiān)測(cè)高致病性豬藍(lán)耳病免疫抗體,藍(lán)耳病抗體監(jiān)測(cè)方法還有待改進(jìn)。
相關(guān)文獻(xiàn)[3,5-9]進(jìn)行此類(lèi)試驗(yàn)均采用了高致病性豬藍(lán)耳病滅活苗,本試驗(yàn)中大膽突破采用了高致病性豬藍(lán)耳病活疫苗。試驗(yàn)結(jié)果也比較理想。
本次試驗(yàn)由于試驗(yàn)樣本量少,致使合格率測(cè)算缺乏精準(zhǔn)性。不能充分反應(yīng)群體保護(hù)率。由于試驗(yàn)范圍的局限性,不能突破地域差異等因素對(duì)免疫抗體的影響,建議在局部小范圍內(nèi)做三種疫苗聯(lián)合免疫的田間應(yīng)用試驗(yàn),以便推廣應(yīng)用。
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