廣州亞運(yùn)無(wú)馬疫區(qū)病媒動(dòng)物調(diào)查

彭 濤 ，彭 聰 ，沈 丹 ，梁卓粵 ，彭南秀 ，胡永輝 ，張海明 ，張海冰 ，朱光劍 ，原麗紅 ，陳金平

（1.廣東省昆蟲(chóng)研究所，廣東 廣州 510260；2.廣州市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，廣東 廣州 510260）

動(dòng)物源性疫病感染賽馬經(jīng)常被報(bào)道，除了家禽、家畜外，主要還有蝙蝠、嚙齒類(lèi)、鳥(niǎo)類(lèi)和野豬等動(dòng)物攜帶的疫病可以感染賽馬。2010年第16屆廣州亞運(yùn)會(huì)的馬術(shù)比賽在廣州從化市舉行。因此，為確保進(jìn)駐從化賽馬場(chǎng)的賽馬健康，調(diào)查對(duì)馬屬動(dòng)物健康具有潛在威脅的疫源疫病對(duì)這一次馬術(shù)比賽順利進(jìn)行有著重要的意義。本次調(diào)查主要針對(duì)與馬屬動(dòng)物有共患疫病的動(dòng)物，包括鳥(niǎo)類(lèi)、蝙蝠和野豬。一方面調(diào)查他們的季節(jié)分布情況，另一方面檢測(cè)他們對(duì)馬疫病原的攜帶情況。

1 材料與方法

1.1 調(diào)查采樣點(diǎn)的選擇

設(shè)置核心區(qū)和緩沖區(qū)調(diào)查 核心區(qū):廣州亞運(yùn)馬術(shù)比賽場(chǎng)（位于從化市良口鎮(zhèn)熱水村）為中心周?chē)霃轿迩椎膮^(qū)域；緩沖區(qū):廣州市白云區(qū)、蘿崗區(qū)、花都區(qū)、增城市，以及清遠(yuǎn)市清城區(qū)、佛岡縣，韶關(guān)市新豐縣和惠州市龍門(mén)縣等8個(gè)與從化市相鄰的縣級(jí)行政區(qū)域。

1.2 調(diào)查時(shí)間

在核心區(qū)，按照春、夏、秋、冬不同的季節(jié)進(jìn)行調(diào)查，在不同的季節(jié)進(jìn)行4次調(diào)查。在緩沖區(qū)，在2009年9月份和2010年1月份進(jìn)行大面積調(diào)查取樣。

1.3 采集方法

根據(jù)不同的區(qū)域類(lèi)型，如林區(qū)、農(nóng)田灌溉區(qū)、城市區(qū)和河口水域區(qū)，選擇樣地調(diào)查。具體采集方法根據(jù)采集動(dòng)物的不同生活習(xí)性進(jìn)行設(shè)計(jì)。

1.4 病毒樣品的分離與檢測(cè)

采樣內(nèi)容包括取動(dòng)物的咽拭子和肛拭子，每只動(dòng)物每種標(biāo)本各取2份進(jìn)行病原檢測(cè)，取靜脈血制備血清檢測(cè)病毒抗體。用RT-PCR，熒光定量PCR和抗體ELISA方法檢測(cè)病毒，陽(yáng)性對(duì)照采用相應(yīng)病毒片斷質(zhì)粒[1-7]。見(jiàn)表1和表2。

2 結(jié)果

2.1 鳥(niǎo)類(lèi)與獸類(lèi)的采樣情況

本次調(diào)查采樣于2009年1月至2010年1月進(jìn)行，考慮到調(diào)查對(duì)象的活動(dòng)都呈現(xiàn)出季節(jié)性變化的規(guī)律，在不同時(shí)期分別進(jìn)行采樣，具體采樣時(shí)間為:2009年2月15日至2009年2月25日、2009年4月25日至2009年5月5日、2009年7月23至2009年7月28日、2009年8月25日至2009年9月5日、2009年11月6日至2009年11月12日，2010年1月9日至2010年1月26日。6次采樣共收集到蝙蝠樣品365份（隸屬于14個(gè)種，其中果蝠一種，食蟲(chóng)蝙蝠13種）；鳥(niǎo)類(lèi)樣品358份，60種（隸屬13目，21科）；野豬1種16頭。

2.2 病毒檢查

對(duì)采集的動(dòng)物咽拭子和肛拭子進(jìn)行病毒檢查和分析，通過(guò)RT-PCR和熒光定量PCR方法對(duì)所有樣本進(jìn)行病毒檢查，沒(méi)有檢查到對(duì)賽馬健康具有潛在威脅的病原體。同樣，通過(guò)抗體ELISA的方法對(duì)血清樣品病毒檢測(cè)，也沒(méi)有檢測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果。

3 討論

3.1 調(diào)查分析

近幾年，在世界各國(guó)發(fā)生了規(guī)模不等、強(qiáng)度不一的多起馬病疫情，給各國(guó)的養(yǎng)馬業(yè)和賽馬的發(fā)展帶了一定的威脅，如馬接觸傳染子宮炎（美國(guó)）、馬流感（印度、埃及、日本、澳大利亞、中國(guó)、蒙古）、馬鼻疽（巴西）、馬梨形蟲(chóng)?。绹?guó)）、馬傳染性貧血（法國(guó)、德國(guó)）、西尼羅病毒?。ㄒ獯罄?、奧地利、法國(guó)、阿拉伯聯(lián)合酋長(zhǎng)國(guó)）、馬病毒性動(dòng)脈炎（以色列、克羅地亞）[1-7]、非洲馬瘟（埃塞俄比亞）、馬鼻肺炎（以色列）、水泡性口炎（美國(guó)）等[8-9]。這些病原導(dǎo)致的疾病給馬屬動(dòng)物造成巨大的損失。這些病原大都是通過(guò)其他動(dòng)物作為媒介進(jìn)行傳播，如鳥(niǎo)類(lèi)、蝙蝠和野豬等。因此，調(diào)查對(duì)馬屬動(dòng)物有潛在威脅的動(dòng)物攜帶病原的情況，對(duì)馬術(shù)比賽的順利進(jìn)行有很大的幫助。

表1 病毒檢測(cè)信息

表2 引物信息

廣東省昆蟲(chóng)研究所2004—2007年對(duì)從化境內(nèi)的獸類(lèi)和鳥(niǎo)類(lèi)曾進(jìn)行過(guò)調(diào)查，當(dāng)時(shí)共調(diào)查到獸類(lèi)38種，分屬7目18科。其中大部分為嚙齒類(lèi)動(dòng)物，有17種，幾乎占全部種類(lèi)的50%；蝙蝠4種，分別為犬蝠（Cynopterus sphinx）、 中 華 菊 頭 蝠（Rhinolophus sinicus）、灰伏翼 （Hypsugo pulveratus）和東亞伏翼（Pipistrellus abramus）；鳥(niǎo)類(lèi)164種。而本次在該區(qū)域共調(diào)查到蝙蝠14種，發(fā)現(xiàn)了12個(gè)新記錄，為以后從化的蝙蝠調(diào)查提供了有力的證據(jù)，同時(shí)也說(shuō)明本次蝙蝠調(diào)查的方法是可行的。本次捕獲鳥(niǎo)類(lèi)47種，占以往調(diào)查種類(lèi)的29%，均為當(dāng)?shù)爻Ｒ?jiàn)種類(lèi)。對(duì)于野豬的調(diào)查采取捕捉和訪問(wèn)結(jié)合，在賽馬場(chǎng)周?chē)纳缴隙加邪l(fā)現(xiàn)野豬的蹤跡，根據(jù)周邊的獵戶(hù)介紹，他們每隔4～5天能夠捉到一頭，我們捕到16頭用于病毒檢測(cè)。此次調(diào)查取樣種類(lèi)和數(shù)量基本能代表本地區(qū)動(dòng)物的基本情況。

3.2 病毒檢測(cè)分析

我們對(duì)賽馬有潛在病原影響的鳥(niǎo)類(lèi)和獸類(lèi)進(jìn)行系統(tǒng)的調(diào)查，且針對(duì)馬屬動(dòng)物易攜帶的病毒種類(lèi)進(jìn)行研究。在不同的季節(jié)調(diào)查所得動(dòng)物樣本中沒(méi)有發(fā)現(xiàn)對(duì)賽馬產(chǎn)生危害的病原菌。對(duì)野豬樣品主要檢測(cè)了日本腦炎、伊氏錐蟲(chóng)病、水泡性口炎和尼帕病毒；對(duì)蝙蝠樣品主要檢測(cè)了尼帕和亨德拉病毒；對(duì)鳥(niǎo)類(lèi)樣品則主要檢測(cè)了日本腦炎和西尼羅河熱等不同馬屬易感病原體。這為廣州亞運(yùn)會(huì)馬術(shù)比賽提供了技術(shù)支持。

我們調(diào)查檢測(cè)了從化馬場(chǎng)周邊的動(dòng)物可能攜帶對(duì)賽馬健康有威脅的6種馬屬動(dòng)物疫病攜帶情況，雖然所檢測(cè)結(jié)果都是陰性，但是我們同樣要做好防護(hù)工作。該區(qū)域?qū)愸R健康具有潛在威脅的動(dòng)物主要是蝙蝠、鳥(niǎo)類(lèi)和野豬，根據(jù)不同動(dòng)物可以做好不同的防護(hù)工作。蝙蝠不會(huì)主動(dòng)攻擊賽馬，但是賽馬有可能會(huì)吃到食果蝙蝠吃剩的果子導(dǎo)致病毒感染。蝙蝠都是在傍晚活動(dòng)，對(duì)光照比較敏感，因此我們可以用加強(qiáng)燈光照明的方法驅(qū)趕蝙蝠。賽馬場(chǎng)周邊鳥(niǎo)類(lèi)較多，尤其是小型鳥(niǎo)類(lèi)，活動(dòng)高峰期主要在凌晨和傍晚，可以采用聲音驅(qū)趕的方法。對(duì)于野豬防治，賽馬場(chǎng)可以進(jìn)行圍欄防止其進(jìn)入傷害馬匹。

[1]曹軍平，趙國(guó)，顧敏，等.實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法檢測(cè)禽流感病毒[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2010，30（1）:47-51.

[2]楊文詳，徐國(guó)景，唐利軍，等.犬狂犬病毒抗體ELISA檢測(cè)方法的建立[J].公共衛(wèi)生與預(yù)防醫(yī)學(xué)，2007，18（2）:5-8.

[3]Yamanaka T，Tsujimura K，Kondo T，et al.Isolation and genetic analysis of Japanese encephalitis virus from a diseased horse in Japan[J].J Vet Med Sci，2006，68（3）:293-295.

[4]Nidaira M，Taira K，Itokazu K，et al.Detection of Japanese encephalitis virus genome in Ryukyu wild boars（Sus scrofa riukiuanus） in Okinawa，Japan[J].Jpn J Infect Dis，2008，61（2）:164-165.

[5]HartyR N，Brown M E，HayesF P，etal.Vaccinia virus-freerecovery of vesicular stomatitis virus[J].JMol Microbiol Biotechnol，2001，3（4）:513-517.

[6]Harty R N，Brown M E，Hayes F P，et al.Rapid diagnosis of vesicular stomatitis virus in Ecuador by the use of polymerase chain reaction[J].Braz J Microbiol，2007，38（3）:500-506.

[7]王占鋒.水泡性口炎的RT-PCR及ELISA診斷方法的建立[D].長(zhǎng)春:吉林大學(xué)，2008.

[8]朱來(lái)華，梁成珠，于紅光，等.2008年國(guó)際馬病疫情動(dòng)態(tài)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2009，26（8）:64-66.

[9]朱來(lái)華，梁成珠，于紅光，等.2009年國(guó)際馬病疫情動(dòng)態(tài)[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫，2009，26（7）:71-73.